microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2019-3-100-105microbe-1177Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИзучение иммунной прослойки к возбудителю холеры у лиц, проживающих на территории Гвинейской РеспубликиThe Study of the Immune Layer to the Cholera Agent in Individuals Living in the Republic of GuineaУткинД. В.UtkinD. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruНайденоваЕ. В.NaidenovaE. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruНикифоровК. А.NikiforovK. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruБойкоА. В.BoikoA. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruАгафоновД. А.AgafonovD. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruЛяпинМ. Н.LyapinM. N.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruЛопатинА. А.LopatinA. A.

127490, Москва, ул. Мусоргского, 4. 

4, Musorgskogo St., Moscow, 127490.

protivochym@nln.ruBangouraI.BangouraI.

Киндия.

Kindia.

CamaraT. D.CamaraT. D.

Киндия.

Kindia.

BoumbalyS.BoumbalyS.

Киндия.

Kindia.

BoiroM. Y.BoiroM. Y.

Kindia.

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute «Microbe»Russian FederationПротивочумный центрРоссия«Plague Control Сenter»Russian FederationНаучно-исследовательский институт прикладной биологии ГвинеиГвинеяResearch Institute of Applied Biology of GuineaGuinea20191310201903100105Copyright © Уткин Д.В., Найденова Е.В., Никифоров К.А., Бойко А.В., Агафонов Д.А., Ляпин М.Н., Лопатин А.А., Bangoura I., Camara T.D., Boumbaly S., Boiro M.Y., 20192019Уткин Д.В., Найденова Е.В., Никифоров К.А., Бойко А.В., Агафонов Д.А., Ляпин М.Н., Лопатин А.А., Bangoura I., Camara T.D., Boumbaly S., Boiro M.Y.Utkin D.V., Naidenova E.V., Nikiforov K.A., Boiko A.V., Agafonov D.A., Lyapin M.N., Lopatin A.A., Bangoura I., Camara T.D., Boumbaly S., Boiro M.Y.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1177

Для достоверной оценки наличия иммунной прослойки к возбудителю холеры необходимым является определение уровня специфических антител в сыворотке крови людей. для выявления специфических противохолерных антител применяют серологические методы, направленные на выявление агглютинирующих, вибриоцидных и токсиннейтрализующих антител. в то же время указанные методы имеют ряд существенных недостатков, которые могут быть устранены при использовании биологических микрочипов, направленных на выявление специфических антител. Цель работы - оценка уровня формирования иммунной прослойки к возбудителю холеры у лиц, проживающих на территории Гвинейской Республики, с использованием биологического микрочипа. Материалы и методы. Исследовано 190 образцов сывороток крови людей, проживающих на территории трех провинций Гвинейской Республики. Образцы собраны в период с мая по октябрь 2016 г. Выявление специфических антител к антигенам V. cholerae осуществляли с использованием иммуночипа в непрямом анализе. В качестве специфических антигенов для сенсибилизации поверхности иммуночипа использовали О-антигены V. cholerae и холерный токсин. Результаты и обсуждение. В результате анализа с применением иммуночипа специфические антитела к О1 и О139 антигенам холерных вибрионов ни в одном из случаев не выявлены. В то же время в 66 исследованных пробах (34,7 %) обнаружены антитела к холерному токсину, из них в 59 образцах - в титре 1:100, в одном - в титре 1:400, в двух - в титре 1:800, в четырех образцах - в титре 1:1600. Отмечено отсутствие статистически значимых различий в зависимости от половой принадлежности обследованных и территории их проживания. Полученные результаты можно объяснить тем, что антитела к холерному токсину циркулируют в сыворотке крови человека более длительное время, чем антитела, специфичные к О1 и О139 антигенам холерного вибриона. Проведенные исследования продемонстрировали наличие в сыворотках антител класса IgG, комплементарных к холерному токсину, что может свидетельствовать как о контакте населения с возбудителем холеры, так и о формировании поствакцинального иммунитета.

For a reliable assessment of the presense of the immune layer to cholera agent, it is necessary to determine the level of specific antibodies in human blood serum. To detect specific anticholera antibodies serological methods are used, aimed to identify agglutinating, vibriocidal and toxin neutralizing antibodies. At the same time, the stated methods have several drawbacks which can be eliminated when using biological microarrays to detect specific antibodies. Object of work. Assessment of the level of the immune layer to cholera agent in individuals residing in the territory of the Republic of Guinea, using a biological microchip. Materials and methods. 190 blood serum samples of people living on the territory of three provinces of the Republic of Guinea, collected over the period of May-October 2016 were studied. The detection of specific antibodies to antigens of V. cholerae was performed using the immunochip for serodiagnosis in the indirect analysis. V. cholerae O-antigens and cholera toxin were used as specific antigens for sensibilization of the immunochip surface. Results and discussion. As a result of the analysis, using immunochip, specific antibodies to O1 and O139-antigens of V. cholerae at the titer of 1:100 were not detected in any of the cases. At the same time, antibodies to cholera toxin were found in 66 samples (34.7 %); titers varied from 1:100 to 1:1600, being 1:100 in 59 samples, 1:400 - in 1 sample, 1:800 - in 2 samples, 1:1600 - in 4 samples. The absence of statistically significant differences depending on the gender of the examined people and the territory of their residence was noted. The obtained results can be explained by the fact that antibodies to cholera toxin are more resistant and circulate longer in human serum than antibodies to O-antigens. Studies have demonstrated the presence of IgG antibodies complementary to cholera toxin in sera, which may indicate both the contact of the population with the cholera pathogen and the formation of post-vaccinal immunity.

иммунная прослойкахолерасерологическая диагностикаантителаиммуночипГвинейская Республикаimmune layercholeraserological diagnosticsantibodiesimmunochipRepublic of GuineaReferencesМосквитина Э.А., Янович Е.Г., Кругликов В.Д., Титова С.В., Куриленко М.П., Пичурина Н. Л., Водопьянов А.С., Левченко Д.А., Иванова С.М., Водопьянов С.О., Олейников И.П. Прогноз по холере на 2019 г. на основании анализа эпидемиологической обстановки в мире, СНГ и Госсии в 2009-2018 гг. Проблемы особо опасных инфекций. 2019; 1:64-73. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-1-64-73.Moskvitina E.A Yanovich E.G., Kruglikov V.D., Titova S.V, Kurilenko M.L., Pichurina N.L., Vodop'yanov A.S., Levchenko D.A., Ivanova S.M., Vodop'yanov S.O., Oleynikov I.P. [Cholera Forecast for the Year 2019 Based on Assessment of Epidemiological Situation Around the World, Across CIS and Russia in 2009-2018]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2019; 1:64-73. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-1-64-73.World Health Organization. Wkly Epidemiol. Rec. 2018, 93(38):489-500. [Электронный ресурс] URL: https://apps.who.inmris/bitstream/handle/10665/274654/WER9338.pdf7ua=1 (дата обращения 15.07.2019).World Health Organization. Wkly Epidemiol. Rec. 2018, 93(38):489-500. (Cited 15 July 2019). [Internet] Available from: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/274654/WER9338. pdf?ua=1.Grout L., Martinez-Pino I., Ciglenecki I. Keita S., Diallo A.A., Traore B., Delamou D., Toure O., Nicholas S., Rusch B., Staderini N., Serafini M., Grais R.F., Luquero F.J. Pregnancy Outcomes after a Mass Vaccination Campaign with an Oral Cholera Vaccine in Guinea: A Retrospective Cohort Study. PLoS Negl. Trop. Dis. 2015; 9(12):e0004274. DOI: 10.1371/journal.pntd.0004274.Grout L., Martinez-Pino I., Ciglenecki I Keita S., Diallo A.A., Traore B., Delamou D., Toure O., Nicholas S., Rusch B., Staderini N., Serafini M., Grais R.F., Luquero F.J. Pregnancy Outcomes after a Mass Vaccination Campaign with an Oral Cholera Vaccine in Guinea: A Retrospective Cohort Study. PLoS Negl. Trop. Dis. 2015; 9(12):e0004274. DOI: 10.1371/journal.pntd.0004274.Гришин Е.В., Валякина Т.И. Получение моноклональных антител к холерному токсину и термолабильному энтеротоксину Е. rnli для разработки биплексного анализа токсинов в объектах окружающей среды. Biotechnologia Acta. 2013; 6(4):19-32. DOI: 10.15407/biotech6.04.019.Grishin E.V, Valyakina T.I. [Obtaining of monoclonal antibodies against cholera toxin and heat labile enterotoxin of E. coli for development of the toxins diplex analysis in environmental specimens]. Biotechnologia Acta. 2013; 6(4):19-32. DOI: 10.15407/biotech6.04.019.Levine M.M., Young C.R., Hughes T.P., O’Donnel S., Black R.E., Clements M.L., Robins-Browne R., Lim Y.-L. Duration of serum antitoxin response following Vibrio cholerae infection in North Americans: relevance for seroepidemiology. Am. J. Epidemiol. 1981; 114(3):348-54. DOI: 10.1093/oxfordjournals.aje.a113201.Levine M.M., Young C.R., Hughes T.P., O’Donnel S., Black R.E., Clements M.L., Robins-Browne R., Lim Y.-L. Duration of serum antitoxin response following Vibrio cholerae infection in North Americans: relevance for seroepidemiology. Am. J. Epidemiol. 1981; 114(3):348-54. DOI: 10.1093/oxfordjournals.aje.a113201.Методические указания. МУК 4.2.2315-08 «Серологические методы в диагностике холеры». Дополнение к МУК 4.2.2218-07 «Лабораторная диагностика холеры». Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом российской Федерации Г.Г. Онищенко 18 января 2008 года.Methodological Regulations. MR 4.2.2315-08 “Serological methods in cholera diagnosis”. Supplement to MR 4.2.2218-07 “Laboratory diagnostics of cholera” . Approved by the Head of the Federal Service for Surveillance in the Sphere of Consumers Rights Protection and Human welfare, Chief State Sanitary Officer of the Russian Federation, G.G. Onishchenko on January 18, 2008.Онищенко Г.Г., Брагина И.В., Ежлова Е.Б., Демина Ю.В., Шеенков Н.В., Балахонов С.В., Урбанович Л.Я., Ганин B.С., Миронова Л.В., Загоскина Т.Ю., Носкова О.А., Куликалова Е.С., Басов Е.А., Токарева Л.Е., Тайкова Т.С., Долгова Т.М. руководство к практическим занятиям по лабораторной диагностике холеры. Иркутск; 2012. 92 с.Onishchenko G.G., Bragina I.V., Ezhlova E.B., Demina Yu.V, Sheenkov N.V., Balakhonov S.V, Urbanovich L.Ya., Ganin VS., Mironova L.V, Zagoskina T.Yu., Noskova O.A., Kulikalova E.S., Basov E.A., Tokareva L.E., Taikova T.S., Dolgova T.M. [Guidelines for practice classes on laboratory diagnosis of cholera]. Irkutsk; 2012. 92 p.Кэтти Д., редактор. Антитела. Методы. М.: Мир; 1991. Т 1. 287 с.Katty D., editor. [Antibodies. Methods]. M.: “Mir”; 1991. Vol. 1. 287 p.Yuan J., Wang E., Fox B. A Immune Monitoring Technology Primer: protein microarray («seromics»). J. Immunother. Cancer. 2016; 4:2. DOI: 10.1186/s40425-016-0106-4.Yuan J., Wang E., Fox B. A Immune Monitoring Technology Primer: protein microarray («seromics»). J. Immunother. Cancer. 2016; 4:2. DOI: 10.1186/s40425-016-0106-4.Уткин Д.В., Осина Н.А., Киреев М.Н., Спицын А.Н., Щербакова С.А. Биологический микрочип для выявления и многопараметрического анализа противохолерных антител. Патент рф № 2528099, опубл. 10.09.2014 г. Бюл. № 25.Utkin D.V, Osina N.A., Kireev M.N., Spitsyn A.N., Shcherbakova S.A. {Biological microchip for the detection and multi-parameter analysis of anti-cholera antibodies]. RF Patent No 2528099, publ. September 10, 2014. Bulletin No. 25.Уткин Д.В., Осина Н.А., Спицын А.Н., Киреев М.Н., Громова О.В., Захарова Т.Л., Найденова Е.В., Куклев В.Е. разработка биочипа для выявления противохолерных антител в сыворотке крови человека. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(2):50-3.Utkin D.V, Osina N.A., Spitsyn A.N., Kireev M.N., Gromova O.V, Zakharova T.L., Naidenova E.V, Kuklev VE. [The development of biochip to detect anti-cholera antibodies in human blood serum]. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika [Russian Clinical Laboratory Diagnostics]. 2015; 60(2):50-3.Rebaudet S., Mengel M.A., Koivogui L., Moore S., Mutreja A., Kande Y., Yattara O., Keita V.S., Njanpop-Lafourcade B.-M., Fournier P.-E., Garnotel E., Keita S., Piarroux R. Deciphering the Origin of the 2012 Cholera Epidemic in Guinea by Integrating Epidemiological and Molecular Analyses. PLoS Negl. Trop. Dis. 2014; 8(6):e2898. DOI: 10.1371/journal.pntd.0002898Rebaudet S., Mengel M.A., Koivogui L., Moore S., Mutreja A., Kande Y., Yattara O., Keita VS., Njanpop-Lafourcade B.-M., Fournier P.-E., Garnotel E., Keita S., Piarroux R. Deciphering the Origin of the 2012 Cholera Epidemic in Guinea by Integrating Epidemiological and Molecular Analyses. PLoS Negl. Trop. Dis. 2014; 8(6):e2898. DOI: 10.1371/journal.pntd.0002898.World Health Organization. Cholera. Wkly Epidemiol. Rec. 2014; 89(31):345-56. [Электронный ресурс]. URL: http://www.who.int/wer/2014/wer8931.pdf?ua=1 (дата обращения 15.07.2019).World Health Organization. Cholera. Wkly Epidemiol Rec. 2014; 89(31):345-56. (Cited 15 July 2019). [Internet]. Available from: http://www.who.int/wer/2014/wer8931.pdf7uaM.Martinez-Pino I., Luquero F.J., Sakoba K., Sylla S., Haile M., Grais R.F., Ciglenecki I., Quilici M.-L., Page A.-L.Use of a Cholera Rapid Diagnostic Test during a Mass Vaccination Campaign in Response to an Epidemic in Guinea, 2012. PLoS Negl. Trop. Dis. 2013; 7(8):e2366. DOI: 10.1371/journal.pntd.0002366.Martinez-Pino I., Luquero F.J., Sakoba K., Sylla S., Haile M., Grais R.F., Ciglenecki I., Quilici M.-L., Page A.-L.Use of a Cholera Rapid Diagnostic Test during a Mass Vaccination Campaign in Response to an Epidemic in Guinea, 2012. PLoS Negl. Trop. Dis. 2013; 7(8):e2366. DOI: 10.1371/journal.pntd.0002366.Гржибовский А.М. Доверительные интервала: для частот и долей. Экология человека. 2008; 5:57-60.Grzhibovsky A.M. [Confidence intervals for proportions]. Ekologiya Cheloveka [Human Ecology]. 2008; 5:57-60.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.