microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2019-3-94-99microbe-1180Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESОпыт получения рекомбинантной таблетированной вакцины «Ревакс В3Т»Experience in the Design and Production of Recombinant Oral Vaccine «Revax VZT»ТерентьевА. И.Terent’evA. I.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruЖуковВ. А.ZhukovV. A.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruСергеевАр. А.SergeevAr. A.

630559, Новосибирская обл., п. Кольцово.

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559.

vector@vector.nsc.ruПастушенкоС. Б.PastushenkoS. B.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruРогожкинаС. В.RоgоzhkinaS. V.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruБорисевичС. В.BorisevichS. V.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruМаксимовВ. А.MaksimovV. A.

141306, Сергиев Посад-6, ул. Октябрьская, д. 11.

Sergiev Possad.

48cnii@mil.ruСергеевАл. А.SergeevAl. A.

630559, Новосибирская обл., п. Кольцово.

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559.

vector@vector.nsc.ruТитоваК. А.TitovaK. A.

630559, Новосибирская обл., п. Кольцово.

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559.

vector@vector.nsc.ruГалаховаД. О.GalakhovaD. O.

630559, Новосибирская обл., п. Кольцово.

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559.

vector@vector.nsc.ru48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской ФедерацииРоссия48th Central Research Institute of the Ministry of Defense of the Russian FederationRussian FederationГосударственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»РоссияState Scientific Center of Virology and Biotechnology «Vector»Russian Federation201913102019039499Copyright © Терентьев А.И., Жуков В.А., Сергеев А.А., Пастушенко С.Б., Рогожкина С.В., Борисевич С.В., Максимов В.А., Сергеев А.А., Титова К.А., Галахова Д.О., 20192019Терентьев А.И., Жуков В.А., Сергеев А.А., Пастушенко С.Б., Рогожкина С.В., Борисевич С.В., Максимов В.А., Сергеев А.А., Титова К.А., Галахова Д.О.Terent’ev A.I., Zhukov V.A., Sergeev A.A., Pastushenko S.B., Rоgоzhkina S.V., Borisevich S.V., Maksimov V.A., Sergeev A.A., Titova K.A., Galakhova D.O.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1180

Целью работы явилось получение таблетированной формы рекомбинантной вакцины «Ревакс В3Т» против гепатита В и патогенных для человека ортопоксвирусов для проведения клинических исследований. Материалы и методы. В качестве активного материала использовали рекомбинантный вирус вакцины, штамм b7,5S2-S, в ген тимидинкиназы которого встроен фрагмент ДНК вируса гепатита в. в работе использовали микробиологические, вирусологические, физические, физико-химические и биотехнологические методы исследований качества препарата и технологических процессов. Результаты и обсуждение. Результаты технологического контроля получения полуфабрикатов и готовой продукции вакцины «Ревакс В3Т» подтвердили возможность использования аттестованной аппаратурно-технологической линии «ТЭОВак» для ее производства. Аналогичная технология может также использоваться при производстве других живых эмбриональных таблетированных оспенных вакцин. для получения вакцинного препарата «Ревакс В3Т» со специфической активностью не менее 1,0·107 ООЕ/табл. необходим сухой вируссодержащий материал с активностью не менее 2,0·108 ООЕ/г при сублимационном высушивании жидкого вируссодержащего материала с активностью не менее 1,0·108 ООЕ/г и преимущественном использовании хорионаллантоисной оболочки куриных эмбрионов в качестве субстрата накопления вирусной биомассы.

Objective of the work was the production of recombinant vaccine «RevaxVZT» in tablet dosage form against hepatitis B and pathogenic for humans orthopoxviruses for further clinical trials. Materials and methods. Recombinant strain b7.5S2-S of vaccinia virus carrying a DNA fragment of hepatitis B virus inserted into thymidinekinase gene was used as an active component of the vaccine. Microbiological, virological, physical, physical and chemical, and biotechnological methods were used for studying the quality of the drug and technological processes. Results and discussion. Results of technological control for semi-finished products and final products of the vaccine “Revax VZT” showed the possibility of using certified hardware-processing line of “TEOVac” for its manufacturing. Same technology can be potentially used with other live tableted embryo smallpox vaccines too. For the development of the vaccine “Revax VZT” with the specific activity of not less than 1.0·107 PFu/tablet, it is necessary to use a dry virus-containing material with activity not less than 2.0·108 PFU/g which is produced by freeze-drying of liquid virus-containing preparation with the activity of not less than 1.0·108 PFU/g, preferentially propagated from chorionic allantoic membranes of chicken embryos as a substrate for viral biomass accumulation.

рекомбинантный штамм вируса вакциныгепатит Впатогенные для человека ортопоксвирусытаблетированная оспенная вакцинатехнологияаппаратурно-технологическая линияrecombinant strain of vaccinia virushepatitis Вorthopoxviruses pathogenic for humanssmallpox vaccine in tabletstechnologyhardware-processing lineReferencesОсновы государственной политики Российской Федерации в области обеспечения химической и биологической безопасности на период до 2025 года и дальнейшую перспективу: указ Президента Российской Федерации от 11.03.2019 г № 97 [Электронный ресурс]. URL: https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/72092478/ (дата обращения 11.03.2019).Fundamentals of the state policy of the Russian Federation in the field of ensuring chemical andbiological safety for the_period up to 2025 and beyond: Decree of the President of the Russian Federation of March 11,2019 No. 97. (Cited 11 Mar 2019). lInternetj. Available from: https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/72092478/.Buonaguro F.M., Tornesello M.L., Buonaguro L. The XIX century smallpox prevention in Naples and the risk of transmission of human blood related pathogens. J. Transl. Med. 2015; 13:33. DOI: 10.1186/s12967-015-04t30-9.Buonaguro F.M., Tornesello M.L., Buonaguro L. The XIX century smallpox prevention in Naples and the risk of transmission of human blood related pathogens. J. Transl. Med. 2015; 13:33. DOI: 10.1186/s12967-015-04t30-9.Okoli A., Okeke M.I., Tryland M., Moens U. CRISPR/ Cas9 - advancing orthopoxvirus genome editing for vaccine and vector development. Viruses. 2018; 10(1). pii: E50. DOI: 10.3390/v10010050.Okoli A., Okeke M.I., Tryland M., Moens U. CRISPR/ Cas9 - advancing orthopoxvirus genome editing for vaccine and vector development. Viruses. 2018; 10(1). pii: E50. DOI: 10.3390/v10010050.Подкуйко B.H., Воробьев А.А., Краснянский В.П., Патрикеев Г.Т., Михайлов В.В., Дорохина ТВ., Махлай А.А., Дыканов Г.А. Пероральная иммунизация - способ повышения безопасности рекомбинантного вектора (вируса вакцины). ВестникРоссийской академии медицинских наук. 1993; 2:39-45.Podkuyko V.N., Vorobyov A.A., Krasnyansky V.P., Patrikeev G.T., Mikhailov V.V., Dorokhina T.V., Makhlai A.A., Dykanov G.A. Oral immunization is a way to increase the safety of a recombinant vector (vaccine virus). [Bulletin of the Russian Academy of Medical Sciences!. 1993' 2'39-45Pavot V, Sebastian S., Turner A.V., Matthews J., Gilbert S.C. Generation and production of modified vaccinia virus Ankara (MVA) as a vaccine vector. Methods Mol. Biol. 2017; 1581:97-119. DOI: 10.1007/978-1-4939-6869-5-6.Pavot V, Sebastian S., Turner A.V., Matthews J., Gilbert S.C. Generation and production of modified vaccinia virus Ankara (MVA) as a vaccine vector. Methods Mol. Biol. 2017; 1581:97-119. DOI: 10.1007/978-1-4939-6869-5-6.Omura N., Yoshikawa T., Fujii H., Shibamura M., Inagaki T., Kato H., Egawa K., Harada S., Yamada S., Takeyama H., Saijo M. A novel system for constructing a recombinant highly-attenuated vaccinia virus strain (LC16m8) expressing foreign genes and its application for the generation of LC16m8-based vaccines against Herpes Simplex virus 2. Jpn. J. Infect. Dis. 2018; 71(3):229-33. DOI: 10.7883/yoken.JJID.2017.458.Omura N., Yoshikawa T.yFujii H., Shibamura M., Inagaki T., Kato H., Egawa K., Harada S., Yamada S., Takeyama H., Saijo M. A novel system for constructing a recombinant highly-attenuated vaccinia virus strain (LC16m8) expressing foreign genes and its application for the generation of LC16m8-based vaccines against Herpes Simplex virus 2. Jpn. J. Infect. Dis. 2018; 71(3):229-33. DOI: 10.7883/yoken.JJID.2017.458.Li Y., Chen S., Fang J, Zhu Y., Bai B., Li W., Yin X., Wang J., Liu X., Han J., Li X., Sun L., Jin N. Construction of an attenuated Tian Tan vaccinia virus strain by deletion of TA35R and TJ2R genes. Virus Res. 2018; 256:192-200. DOI: 10.1016/j.virusres.2018.06.017.Li Y., Chen S., Fang J, Zhu Y., Bai B., Li W., Yin X., Wang J., Liu X., Han J., Li X., Sun L., Jin N. Construction of an attenuated Tian Tan vaccinia virus strain by deletion of TA35R and TJ2R genes. Virus Res. 2018; 256:192-200. DOI: 10.1016/j.virusres.2018.06.017.Cavenaugh J.S., Awi D., Mendy M., Hill A.V., Whittle H., McConkey S.J. Partially randomized, non-blinded trial of DNA and MVA therapeutic vaccines based on hepatitis B virus surface protein for chronic HBV infection. PLoS One. 2011; 6(2):e14626. DOI: 10.1371/journal.pone.0014626.Cavenaugh J.S., Awi D., Mendy M., Hill A.V., Whittle H McConkey S.J. Partially randomized, non-blinded trial of DNA and MVA therapeutic vaccines based on hepatitis B virus surface protein for chronic HBV infection. PLoS One. 2011; 6(2):e14626. DOI: 10.1371/journal.pone.0014626.Backes S., Jager C., Dembek C.J., Kosinska A.D., Bauer T., Stephan A.S., Dislers A., Mutwiri G., Busch D.H., Babiuk L.A., Gasteiger G., Protzer U. Protein-prime/modified vaccinia virus Ankara vector-boost vaccination overcomes tolerance in high-antigenemic HBV-transgenic mice. Vaccine. 2016; 34(7):923-32. DOI: 10.10i6/j.vaccine.2015.12.060.Backes S., Jager C., Dembek C.J., Kosinska A.D., Bauer T., Stephan A.S., Dislers A., Mutwiri G., Busch D.H., Babiuk L.A., Gasteiger G., Protzer U. Protein-prime/modified vaccinia virus Ankara vector-boost vaccination overcomes tolerance in high-antigenemic HBV-transgenic mice. Vaccine. 2016; 34(7):923-32. DOI: 10.1016/j.vaccine.2015.12.060.Муратов П.Ю., Беляев А.С., Дмитриев И.П., Нетесов С.В., Рукавишников М.Ю. Живая рекомбинантная вакцина для профилактики гепатита В и натуральной оспы для накожного применения и способ ее получения. Патент РФ на изобретение № 2073524(13) от 13.05.1999 г.Muratov P.Yu., Belyaev A.S., Dmitriev I.P, Netesov S.V., Rukavishnikov M.Yu. Live recombinant vaccine for the prevention of hepatitis B and smallpox for cutaneous use and method for its preparation. RF patent for the invention No. 2073524(13) dated 13.05.1999.Павлова Л.И., Горбунов М.А., Борисова В.Н., Красильников И.В., Носкова А.В., Лыцарь Б.Н., Скворцов С.В., Белякова Е.А., Яковлева И.М., Коровин Ю.П., Бельченко А.В., Титов и.А., Буданов М.В. Отечественная рекомбинантная вакцина против гепатита В (результаты контролируемых испытаний). Вопросы вирусологии. 1996; 41(4):170-2.Pavlova L.I., Gorbunov M.A., Borisova V.N., Krasilnikov I.V, Noskova A.V, Lytsar B.N., Skvortsov S.V, Belyakova E.A., Yakovleva I. .M., Korovin Yu.P., Belchenko A.V, Titov I.A., Budanov M.V. Domestic recombinant hepatitis B vaccine (results of controlled trials). Voprosy virusologii [Problems of virology]. 1996;Ведерников Б.Ф., Генералов В.М., Евтин Н.К., Кочнева Г.В., Михеев М.В., Нетесов С.В., Петрищенко В.А., Пьянков О.В., Сандахчиев Л.С., Сафатов А.С., Сергеев А.А., Сергеев А.Н., Шишкин А.В., Шишкина Л.Н. Таблетированная живая рекомбинантная бивакцина «Ревакс ВКТ» против натуральной оспы и гепатита в и способ ее получения. Патент РФ № 2242246 от 15.02.2002 г.Vedernikov B.F., Generalov V.M., Evtin N.K., Kochneva G.V., Mikheev M.V., Netesov S.V., Petrishchenko V.A., Pyankov O.V., Sandakhchiev L. .S., Safatov A.S., Sergeev A.A., Sergeev A.N., Shishkin A.V., Shishkina L.N. Tableted live recombinant bivaccine “Revax VKT” against smallpox and hepatitis B and the method for its preparation. RF patent No. 2242246 of 15.02.2002.Плясунов И.В., Сергеев А.А., Сергеев Ал.А., Петрищенко В.А., Шишкина Л.Н., Генералов В.В., Сафатов А.С., Сандахчиев Л.С., Удут В.В., Мельников С.А., Подкуйко В.Н. Клинические исследования рекомбинантной бивакцины против оспы и гепатита B для орального применения в условиях двукратной вакцинации. Вопросы вирусологии. 2006; 51(2):31-5.Plyasunov I.V., Sergeev A.A., Sergeev Al.A., Petrishchenko V.A., Shishkina L.N., Generalov V.V., Safatov A.S., Sandakhchiev L.S., Udut V .V, Melnikov S.A., Podkuyko V.N. Clinical studies of recombinant bi-vaccine against smallpox and hepatitis B for oral ad-ministration in conditions of double vaccination. Voprosy virusologii [Problems of virology], 2006; 51(2):31—5.Бондарев В.П., Терентьев А.И., Мельников С.А., Бондарева Т.А. Внедрение таблетированной оспенной вакцины ТЭОВак в серийное производство для обеспечения биологической безопасности населения Российской Федерации. Проблемы особо опасных инфекций. 2010; 2:66-8. DOI: 10.21055/0370-1069-2010-2(104)-66-68.Bondarev' VP., Terentyev A.I., Melnikov S.A., Bondareva T.A. The introduction of TEOVac smallpox vaccine into serial production to ensure the biological safety of the population of the Russian Federation. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2010; 2:66-8. DOI: 10.21055/0370-1069-2010-2(104)-66-68.Чернос В.И., Челяпов Н.В., Антонова Т.П., Ралихина Л.Е., Унанов С.С., Альтштейн А.Д., Захарова Л.Г., Фодор И.И., Бендукидзе К.А., Комаров Ф.И., Белышев Б.П., Дмитриев А.В., Анджапаридзе О.Г. Проверка безопасности, прививаемости, реактогенности и антигенных свойств живой рекомбинатной оспенно-гепатитной В-вакцины в опыте на добровольцах. Вопросы вирусологии. 1990; 35(2):132-5.Chernos VI., Chelyapov N.V, Antonova T.P., Ralikhina L.E., Unanov S.S., Altstein A.D., Zakharova L.G., Fodor I.I., Bendukidze K .A., Komarov F.I., Belyshev B.P., Dmitriev A.V, Andzhaparidze O.G. Testing the safety, vaccination, reactogenicity and antigenic properties of a live recombinant smallpox and hepatitis B vaccine in a volunteer experiment. Voprosy virusologii [Problems of virology]. 1990; 35(2):132—5.Graham B.S., Belshe R.B., Clements M.L., Dolin R., Corey L., Wright P.F., Gorse G.J., Midthun K., Keefer M.C., Roberts N.J., Schwartz D.H., Agosti J.M., Fernie B.F., Stablein D.M., Montefiori D.C., Lambert J.S., Hu S.-L., Esterlitz J.R., Lawrence D.N., Koff W.C. Vaccination of vaccinia-naive adults with human immunodeficiency virus type 1 gp160 recombinant vaccinia virus in a blinded, controlled, randomized clinical trial. J. Infect. Diseases. 1992; 166 (2):244-52. DOI: 10.1093/infdis/166.2.244.Graham B.S., Belshe R.B., Clements M.L., Dolin R., Corey L., Wright P.F., Gorse G.J., Midthun K., Keefer M.C., Roberts N.J., Schwartz D.H., Agosti J.M., Fernie B.F., Stablein D.M., Montefiori D.C., Lambert J.S., Hu S.-L., Esterlitz J.R., Lawrence D.N., Koff W.C. Vaccination of vaccinia-naive adults with human immunodeficiency virus type 1 gp160 recombinant vaccinia virus in a blinded, controlled, randomized clinical trial. J. Infect. Diseases. 1992; 166 (2):244-52. DOI: 10.1093/infdis/166.2.244.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.