microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2019-4-113-116microbe-1220Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯBRIEF COMMUNICATIONSЭкспериментальное обоснование возможности использования перевиваемой линии клеток СНО-К1 для определения специфической активности компонентов холерной химической вакциныExperimental Substantiation of the Possibility to Use Finite Cell Line CHO-K1 for Determination of Specific Activity of Components of Chemical Cholera VaccineДураковаO. С.DurakovaO. S.

Дуракова Оксана Сергеевна.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

Oksana S. Durakova.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruГромоваО. В.GromovaO. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruГаеваА. В.GaevaA. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruГенераловС. В.GeneralovS. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruЛивановаЛ. Ф.LivanovaL. F.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruКлоковаО. Д.KlokovaO. D.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruВолохО. А.VolokhO. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005.

rusrapi@microbe.ruРоссийский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation20191801202004113116Copyright © Дуракова O.С., Громова О.В., Гаева А.В., Генералов С.В., Ливанова Л.Ф., Клокова О.Д., Волох О.А., 20202020Дуракова O.С., Громова О.В., Гаева А.В., Генералов С.В., Ливанова Л.Ф., Клокова О.Д., Волох О.А.Durakova O.S., Gromova O.V., Gaeva A.V., Generalov S.V., Livanova L.F., Klokova O.D., Volokh O.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1220

Цель - экспериментально обосновать возможность использования перевиваемой линии клеток СНО-К1 для определения специфической активности холерного токсина и компонента вакцины холерогена-анатоксина в процессе производства холерной химической вакцины. Материалы и методы. В исследованиях использовали перевиваемую линию клеток СНО-К. учет результатов метода биоиндикации на перевиваемой клеточной линии проводили визуально с помощью инвертированного микроскопа и фотометрически в колориметрическом тесте для оценки метаболической активности клеток при длине волны 595 нм. Результаты и обсуждение. предлагаемый метод позволяет определить активность продукции токсина у штамма Vibrio cholerae 569B при глубинном культивировании в биореакторе и специфическую активность холерогена-анатоксина по анатоксиносвязыванию с использованием клеточных культур. результаты коррелируют с данными, полученными при использовании методов внутрикожной пробы по Крейгу, GM1-H®A и РПИГ. Введение в практику метода клеточных культур может обеспечить существенное сокращение использования животных на этапах производства вакцины холерной бивалентной химической.

Objective was to experimentally substantiate the possibility to use the finite cell line CHO-K1 for measuring specific activity of cholera toxin and component of the vaccine choleragen-anatoxin in the process of chemical cholera vaccine manufacturing. Materials and methods. The studies involved the finite cell line CHO-K. The registration of results of bio-indication method was performed visually with the help of inverted microscope and photometrically - in colorimetric test for the assessment of metabolic activity of the cells at the wave length of 595 nm. Results and discussion. The proposed method allows for determining the toxin-production activity of Vibrio cholerae 569B strain during submerged cultivation in bioreactor and specific activity of choleragen-anatoxin by anatoxin binding measuring using cell cultures. The results correlate with the data obtained using intradermal Craig’s technique, GM1-ELISA and radial passive immune hemolysis (RPIH). Introduction of cell culture method into practice will provide for significant decrease in the volumes of usage of animals at the stages of manufacturing of chemical bivalent cholera vaccine.

холерная химическая вакцинакультура клеток сно-к1холерный токсинхолероген-анатоксинchemical cholera vaccinecell culture CHO-K1cholera toxincholeragen-anatoxinReferencesОнищенко Г.Г., Попова А.Ю., Кутырев В.В., Смирнова Н.И., Щербакова С.А., Москвитина Э.А., Штова С.В. Актуальные проблемы эпидемиологического надзора, лабораторной диагностики и профилактики холеры в Российской Федерации. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016; 1:89¬101. DOI: 10.36233/0372-9311-2016-1-89-101.Onishchenko G.G., Popova A.Yu., Kutyrev V.V., Smirnova N.I., Shcherbakova S.A., Moskvitina E.A., Titova S.V. [Relevant issues of epidemiological surveillance, laboratory diagnosis and prophylaxis of cholera in the Russian Federation]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology, and Immunobiology]. 2016; 1:89—101. DOI: 10.36233/0372-9311-2016-1-89-101.Гаева А.В., Громова О.В., Дуракова О.С., Генералов С.В., Волох О.А. Современные подходы к контролю активных компонентов холерной химической вакцины. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018; 1:152-7.Gaeva A.V., Gromova O.V, Durakova O.S., Generalov S.V, Volokh O.A. [Modern approaches to the control of active agents of chemical cholera vaccine*]. Razrabotka i Registratsiya Lekarstvennykh Sredstv [Development and Registration of Pharmaceuticals]. 2018; 1:152–7.Craig J Preparation of the vascular permeability factor of V cholera. J. Bacteriol. 1966; 92(3):793-5. PMID: 5922548. PMCID: PMC276327.Craig J. Preparation of the vascular permeability factor of V cholera. J. Bacteriol. 1966; 92(3):793-5 PMID: 5922548. PMCID: PMC276327.Шагинян И.А., Маракуша Б.М. Модификация метода пассивного иммунного гемолиза на плотной среде для выявления продукции термолабильных энтеротоксинов штаммами холерных вибрионов и кишечной палочки. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1983; 2:92-6.Shaginyan I.A., Marakusha B.M. [Modification of the method of passive immune hemolysis on solid nutrient medium for measuring the production of thermo labile enterotoxins by the strains of cholera vibrios and collibacillus]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology, and Immunobiology]. 1983; 2:92-6.Ramamurthy T., Das B., Chakraborty S., Mukhopadhyay A.K., Sack D.A. Diagnostic techniques for rapid detection of Vibrio cholerae O1/O139. Vaccine. 2019; pii: S0264-410X(19)31020-5. DOI: 10.1016/j.vaccine.2019.07.099.Ramamurthy T., Das B., Chakraborty S., Mukhopadhyay A.K., Sack D.A. Diagnostic techniques for rapid detection of Vibrio cholerae O1/O139. Vaccine. 2019; pii: S0264-410X(19)31020-5. DOI: 10.1016/j.vaccine.2019.07.099.Государственная фармакопея Российской Федерации, XIII издание. Москва; 2015. T. 1-3.State Pharmacopeia of the Russian Federation, 13th edition. Moscow; 2015. Vol. 1-3.Kumar P., Nagarajan A., Uchil P.D. Analysis of Cell Viability by the MTT Assay. Cold Spring Harb. Protoc. 2018; 6. DOI: 10.1101/pdb.prot095505.Kumar P., Nagarajan A., Uchil P.D. Analysis of Cell Viability by the MTT Assay. Cold Spring Harb. Protoc. 2018; 6. DOI: 10.1101/pdb.prot095505.Лакин Г.Ф. Биометрия: учеб. пособие для биол. спец. вузов. М.: Высш. шк.; 1990. 352 с.Lakin G.F. [Biometry: Textbook for biology students of specialized higher educational institutions]. Moscow; 1990. 352p.Guerrant R.L Brunton L.L., Schaitman T.C., Rebhun L.I., Cilman A.C. Cyclic adenosine monophosphate and alteration of Chinese hamster ovary cell morphology: a rapid, sensitive in vitro assay for the enterotoxins of Vibrio cholerae and Escherichia coli. Infect. Immun. 1974; 10(2):320-7. PMID: 4368545. PMCID: PMC414999.Guerrant R.L., Brunton L.L., Schaitman T.C., Rebhun L.I., Cilman A.C. Cyclic adenosine monophosphate and alteration of Chinese hamster ovary cell morphology: a rapid, sensitive in vitro assay for the enterotoxins of Vibrio cholerae and Escherichia coli. Infect. Immun. 1974; 10(2):320-7. PMID: 4368545. PMCID: PMC414999.Фрешни Р.Я. Культура животных клеток: практическое руководство. М: Бином. Лаб. Знаний; 2010. 714 с.Freshni R.Ya. [Animal cell culture: Practice Guidelines]. Moscow; 2010. 714 p.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.