630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
630559, Новосибирская обл., п. Кольцово
Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559
Цель работы – получение рекомбинантных вирусных антигенов основных иммунодоминантных белков: гликопротеина (GPΔMLD), нуклеопротеина (NP) и матриксного белка (VP40) вируса Марбург, а также исследование их антигенных и иммуногенных свойств.
Материалы и методы. Для создания рекомбинантных белков GPΔMLD, NP и VP40 вируса Марбург использовали синтезированные нуклеотидные последовательности, кодирующие эти белки, клонированные в составе экспрессионного вектора pЕТ21a. Иммуногенные и антигенные свойства полученных рекомбинантных белков проверяли с использованием ряда биомоделей (мыши, куры и морские свинки).
Результаты и обсуждение. Получены рекомбинантные плазмиды, содержащие гены, кодирующие белки GPΔMLD, NP, VP40 вируса Марбург, а также штаммы-продуценты Escherichia coli, с выходом очищенных препаратов рекомбинантных белков GPΔMLD, NP, VP40 с одного литра культуральной жидкости – 5, 10 и 10 мкг соответственно. Рекомбинантные белки GP, NP и VP40 MARV при иммунизации мышей вызывают синтез антител с высоким титром (рекомбинантные белки NP и VP40 – более 409600, а рекомбинантный белок GPΔMLD – 12800). Мышиные антитела, специфичные к рекомбинантным белкам, взаимодействуют в иммуноферментном анализе с антигеном инактивированного MARV. Антитела кур, иммунизированных вирусоподобными частицами, содержащими на поверхности поверхностный гликопротеин вируса Марбург, и антитела морских свинок, иммунизированных экспериментальной ДНК-вакциной, содержащей ген GPΔMLD MARV, узнают рекомбинантный белок GPΔMLD и вирусный белок в составе инактивированного MARV. Полученные рекомбинантные белки обладают иммуногенностью/антигенностью и могут использоваться для разработки иммуноферментных тест-систем.
Aim. Production of recombinant viral antigens of the main immunodominant proteins: glycoprotein (GPΔMLD), nucleoprotein (NP) and matrix protein (VP40) of the Marburg virus, as well as the study of their antigenic and immunogenic properties.
Materials and methods. To create recombinant proteins GPΔMLD, NP and VP40 of the Marburg virus, synthesized nucleotide sequences encoding these proteins cloned into the pET21a expression vector were used. The immunogenic and antigenic properties of the obtained recombinant proteins were tested using a number of biomodels (mice, chickens, and guinea pigs).
Results and discussion. Recombinant plasmids containing genes encoding proteins GPΔMLD, NP, VP40 of the Marburg virus, as well as Escherichia coli producing strains, with the yield of purified preparations of recombinant proteins GPΔMLD, NP, VP40 from one liter of culture fluid – 5, 10, and 10 μg were obtained, respectively. When mice are immunized, recombinant proteins GP, NP, and VP40 MARV induce the synthesis of high titer antibodies (recombinant proteins NP and VP40 – more than 409600, and recombinant protein GPΔMLD – 12800). Mouse antibodies specific to recombinant proteins interact in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with the antigen of inactivated MARV. Antibodies of chickens immunized with virus-like particles containing the surface glycoprotein of the Marburg virus and antibodies of guinea pigs immunized with an experimental DNA vaccine containing the GPΔMLD MARV gene recognize the recombinant GPΔMLD protein and the viral protein in the inactivated MARV. The resulting recombinant proteins are immunogenic/antigenic and can be used for the development of enzymelinked immunosorbent assay systems.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.