microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2022-2-12-19microbe-1688Research ArticleОБЗОРЫREVIEWSАнтигенные компоненты холерной бивалентной химической вакцины, методы их выделения и контроляAntigenic Components of Chemical Bivalent Cholera Vaccine, Methods of their Isolation and Controlhttps://orcid.org/0000-0003-3624-0850ВоробьеваС. А.Vorob’evaS. A.

Воробьева Светлана Александровна

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

Svetlana A. Vorob’eva

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruДураковаО. С.DurakovaO. S.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0172-2964ГромоваО. В.GromovaO. V.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3044-971XВолохО. А.VolokhO. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7119-0516КлоковаО. Д.KlokovaO. D.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1130-3504НикифоровА. К.NikiforovA. K.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46 

 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005 

rusrapi@microbe.ruФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation202208072022021219Copyright © Воробьева С.А., Дуракова О.С., Громова О.В., Волох О.А., Клокова О.Д., Никифоров А.К., 20222022Воробьева С.А., Дуракова О.С., Громова О.В., Волох О.А., Клокова О.Д., Никифоров А.К.Vorob’eva S.A., Durakova O.S., Gromova O.V., Volokh O.A., Klokova O.D., Nikiforov A.K.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1688

В статье представлен обзор данных по методам выделения и контроля антигенов Vibrio cholerae холерогенанатоксина и О-антигенов Инаба и Огава – компонентов пероральной холерной бивалентной химической вакцины производства ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», единственного профилактического препарата против холеры, зарегистрированного на территории Российской Федерации. В настоящий момент в производстве вакцины используется способ раздельного получения холероген-анатоксина и О-антигенов Инаба и Огава с постадийным контролем их основных свойств, который обеспечивает получение качественного готового препарата. Эффективным методом концентрирования полуфабриката, который способствует сокращению потерь и увеличению выхода конечного продукта, является ультрафильтрация. Перспективной остается разработка метода щадящей стерилизации О-антигенов для максимального сохранения специфической активности. Для контроля специфической активности антигенных компонентов и готового препарата вакцины применяют комплекс методов in vivo и in vitro. Однако многостадийность и длительность, применение нескольких видов лабораторных животных, а также современные требования ВОЗ определяют необходимость внедрения альтернативных методов контроля in vitro. В качестве замены биологического метода перспективным является использование клеточных культур, для которого показана положительная корреляция с тестами на животных. Для оценки активности антигенов предлагается применение иммунохимического метода – дот-иммуноанализа с золотыми наночастицами, что позволит унифицировать способ контроля на всех этапах производственного процесса, а также проводить определение серовароспецифичности О-антигенов холерного вибриона. Разработка молекулярно-генетических, микробиологических, иммунохимических методов актуальна для более полного и всестороннего контроля основных иммуногенов производственных штаммов холерного вибриона. Внедрение перспективных методов получения антигенов и контроля их свойств позволит более полно охарактеризовать компонентный состав готовой лекарственной формы холерной химической вакцины.

The paper presents a review of the data on the methods of isolation and control of Vibrio cholerae antigens – cholerogen-anatoxin and O-antigens of Inaba and Ogawa – components of the oral bivalent chemical cholera vaccine produced by the RusRAPI “Microbe”, the only prophylactic drug against cholera registered in the territory of the Russian Federation. Currently, the vaccine is produced using the method of segregated manufacturing of cholerogenanatoxin and O-antigens Inaba and Ogawa with step-by-step control of their main properties, which ensures the production of a high-quality finished product. Ultrafiltration is an effective method for concentrating a semi-finished product, which helps to reduce losses and increases the yield of the final product. It remains promising to develop a method for gentle steril ization of O-antigens to maximize the preservation of specific activity. To control the specific activity of the antigenic components and the finished vaccine preparation, a complex of in vivo and in vitro methods is applied. However, the multi-stage process and duration, the use of several types of laboratory animals, as well as modern WHO requirements determine the need for the introduction of alternative in vitro control methods. The use of cell cultures as a replacement for the biological method appears prospective, and demonstrates a positive correlation with animal tests. To assess the activity of antigens, the use of an immunochemical method – dot-immunoassay with gold nanoparticles – is put forward, which will make it possible to harmonize the control method at all stages of the production process, as well as to determine the serovar specificity of Vibrio cholerae O-antigens. The development of molecular-genetic, microbiological, immunochemical methods is relevant for a more complete and comprehensive control of the main immunogens of industrial strains of cholera vibrio. The introduction of promising methods for obtaining antigens and monitoring their properties will allow for a more complete characterization of the component composition of the finished dosage form of the chemical cholera vaccine.

Vibrio choleraeпероральная холерная вакцинахолерный токсинхолероген-анатоксино-антигенVibrio choleraeoral cholera vaccinecholera toxincholerogen-anatoxinO-antigenReferencesБеспалова И.А., Иванова И.А., Омельченко Н.Д., Филиппенко А.В., Труфанова А.А. Современное состояние специфической профилактики холеры. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2018; 17(1):55–61.Bespalova I.A., Ivanova I.A., Omel’chenko N.D., Filippenko A.V., Trufanova A.A. [The current state of specific prophylaxis of cholera]. Epidemiologiya i Vaktsinoprofilaktika [Epidemiology and Vaccinal Prevention]. 2018; 17(1):55–61.Щуковская Т.Н., Саяпина Л.В., Кутырев В.В. Вакцинопрофилактика холеры: современное состояние вопроса. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2009; 2:62–7.Shchukovskaya T.N., Sayapina L.V., Kutyrev V.V. [Vaccine prophylaxis of cholera: present status]. Epidemiologiya i Vaktsinoprofilaktika [Epidemiology and Vaccinal Prevention]. 2009; (2):62–7.Waldor M.K., Hotez P.J., Clemens J.D. A national cholera vaccine stockpile – a new humanitarian and diplomatic resource. N. Engl. J. Med. 2010; 363(24):2279–82. DOI: 10.1056/NEJMp1012300.Waldor M.K., Hotez P.J., Clemens J.D. A national cholera vaccine stockpile – a new humanitarian and diplomatic resource. N. Engl. J. Med. 2010; 363(24):2279–82. DOI: 10.1056/NEJMp1012300.Онищенко Г.Г., Попова А.Ю., Кутырев В.В., Смирнова Н.И., Щербакова С.А., Москвитина Э.А., Титова С.В. Актуальные проблемы эпидемиологического надзора, лабораторной диагностики и профилактики холеры в Российской Федерации. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016; 1:89– 101. DOI: 10.36233/0372-9311-2016-1-89-101.Onischenko G.G., Popova A.Yu., Kutyrev V.V., Smirnova N.I., Shcherbakova S.A., Moskvitina E.A., Titova S.V. Actual problems of epidemiologic control, laboratory diagnostics and prophylaxis of cholera in the Russian Federation. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 2016; (1):89–101. DOI: 10.36233/0372-9311-2016-1-89-101.WHO – Prequalification of Medical Products (IVDs, Medicines, Vaccines and Immunization Devices, Vector Control) [Электронный ресурс]. URL: https://extranet.who.int/pqweb/vaccines/prequalified-vaccines (дата обращения 20.09.2021).WHO – Prequalification of Medical Products (IVDs, Medicines, Vaccines and Immunization Devices, Vector Control). (Cited 20 Sept 2021). [Internet]. Available from: https://extranet.who.int/pqweb/vaccines/prequalified-vaccines.Джапаридзе M.Н., Караева Л.Т., Сумароков А.А., Марчук Л.М., Никитина Г.П., Наумов А.В., Попов А.А., Коткина Т.А., Петяев И.М., Павлова Л.П. О-антиген Vibrio cholerae серовара Огава, рекомендуемый для создания оральной холерной бивалентной химической вакцины. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1981; 11:75–81.Dzhaparidze M.N., Karaeva L.T., Sumarokov A.A., Marchuk L.M., Nikitina G.P., Naumov A.V., Popov A.A., Kotkina T.A., Petyaev I.M., Pavlova L.P. [O-antigen of Vibrio cholerae, serovar Ogawa, for the preparation of oral cholera bivalent chemical vaccine]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 1981; (11):75–81.Горяев А.А., Саяпина Л.В., Обухов Ю.И., Бондарев В.П. Эффективность и безопасность вакцин для профилактики холеры. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2018; 18(1):42–9. DOI: 10.30895/2221-996Х-2018-18-1-42-49.Goryaev A.A., Sayapina L.V., Obukhov Yu.I., Bondarev V.P. [Efficacy and safety of vaccines for the prevention of cholera]. Biopreparaty. Profilaktika, Diagnostika, Lechenie [Biopreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment]. 2018; 18(1):42–9. DOI: 10.30895/2221-996х-2018-18-1-42-49.Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Никитина Г.П., Мелещенко М.В., Доброва В.Г., Заворотных В.И., Грачева В.П., Захарова Т.Л. Оральная химическая вакцина из гипертоксигенных штаммов КМ -76 Инаба и КМ -68 Огава возбудителя холеры. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991; 4:31–3.Dzhaparidze M.N., Naumov A.V., Nikitina G.P., Meleshchenko M.V., Dobrova V.G., Zavorotnykh V.I., Gracheva V.P., Zakharova T.L. [Oral chemical vaccine prepared on the basis of hypertoxigenic strains KM-76 Inaba and KM-68 Ogawa of the causative agent of cholera]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 1991; (4):31–3.Топорков A.B., Заднова С.П., Смирнова Н.И. Сравнительный анализ продукции основных протективных антигенов у рекомбинантных и производственных штаммов Vibrio cholerae классического биовара. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005; 1:53–7.Toporkov A.V., Zadnova S.P., Smirnova N.I. [Comparative analysis of the major protective antigens production in Vibrio cholerae recombinant and producer strains of the classical biovar]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 2005; (1):53–7.Вольников В.Р., Ульянов А.Ю., Салихов Р.Р., Дуракова О.С., Авдеева Н.Г., Самохвалова Ю.И., Волох О.А. Экологическая безопасность и перспективы развития малоотходных технологий в биотехнологическом производстве. Известия Саратовского университета. Новая серия. Серия: Химия. Биология. Экология. 2021; 21(3):317–23. DOI: 10.18500/1816-9775-2021-21-3-317-323.Vol’nikov V.R., Ul’yanov A.Yu., Salikhov R.R., Durakova O.S., Avdeeva N.G., Samokhvalova Yu.I., Volokh O.A. [Ecological safety and prospects of development of low-waste technologies in the biotechnology industry]. Izvestiya Saratovskogo Universiteta. Novaya Seriya. Seriya: Khimiya. Biologiya. Ekologiya [Bulletin of the Saratov University. New Series. Series: Chemistry. Biology. Ecology]. 2021; 21(3):317–23. DOI: 10.18500/1816-9775-2021-213-317-323.Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Мелещенко М.В., Никитина Г.П. Способ получения пероральной химической вакцины. Патент РФ № 2076734, опубл. 10.04.1997. Бюл. № 13.Dzhaparidze M.N., Naumov A.V., Meleshchenko M.V., Nikitina G.P. [Method for the production of oral chemical vaccine]. RF patent No. 2076734, publ. April 10, 1997. Bull. No. 13.Анисимов П.И., Адамов А.К., Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Никитина Г.П. Способ производства вакцины для профилактики холеры. Патент РФ № 2080121, опубл. 27.05.1997. Бюл. № 15.Anisimov P.I., Adamov A.K., Dzhaparidze M.N., Naumov A.V., Nikitina G.P. [Method for the production of a vaccine for the prevention of cholera]. RF patent No. 2080121, publ. May 27, 1997. Bull. No. 15.Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Елисеев Ю.Ю., Киреев М.Н., Космаенко О.М. Способ получения О-антигена холерного очищенного. Патент РФ № 2143280, опубл. 27.12.1999. Бюл. № 36.Gromova O.V., Dzhaparidze M.N., Dyatlov I.A., Eliseev Yu.Yu., Kireev M.N., Kosmaenko O.M. [Method for obtaining purified cholera O-antigen]. RF patent No. 2143280, publ. December 27, 1999. Bull. No. 36.Дятлов И.А., Нижегородцев С.А., Громова О.В., Васин Ю.Г., Бутов А.С., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка ультрафильтрационной технологии получения О-антигена холерного вибриона для производства вакцин. Проблемы особо опасных инфекций. 2001; 2(82):133–9.Dyatlov I.A., Nizhegorodtsev S.A., Gromova O.V., Vasin Yu.G., Butov A.S., Klokova O.D., Belyakova N.I. [Development of an ultrafiltration technology for obtaining O-antigen of cholera vibrio for the production of vaccines]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2001; 2(82):133–9.Комиссаров А.В., Никифоров А.К., Алешина Ю.А., Еремин С.А., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Крайнова А .Г. Способ концентрирования нативных холерогенаанатоксина и О-антигена Vibrio cholerae О1 классического биовара штамма 569В серовара Инаба. Патент РФ № 2451522, опубл. 27.05.2012. Бюл. № 15.Komissarov A.V., Nikiforov A.K., Aleshina Yu.A., Eremin S.A., Vasin Yu.G., Klokova O.D., Belyakova N.I., Krainova A.G. [Method for concentrating native cholerogen-anatoxin and O-antigen of Vibrio cholerae O1 of the classical biovar, strain 569B of the serovar Inaba]. RF patent No. 2451522, publ. May 27, 2012. Bull. No. 15.Комиссаров А.В., Никифоров А.К., Еремин С.А., Алешина Ю.А., Громова О.В., Крайнова А.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Васин Ю.Г. Способ концентрирования нативного О-антигена Vibrio cholerae. Патент РФ № 2445116, опубл. 20.03.2012. Бюл. № 13.Komissarov A.V., Nikiforov A.K., Eremin S.A., Aleshina Yu.A., Gromova O.V., Krainova A.G., Klokova O.D., Belyakova N.I., Vasin Yu.G. [Method for concentrating native O-antigen of Vibrio cholerae]. RF patent No. 2445116, publ. March 20, 2012. Bull. No. 13.Кузьмиченко И.А., Громова О.В., Киреев М.Н., Еремин С.А., Белякова Н.И., Клокова О.Д., Нижегородцев С.А. Мониторинг активности ферментов при производстве вакцины холерной бивалентной таблетированной. Биотехнология. 2010; 2:87–92.Kuz’michenko I.A., Gromova O.V., Kireev M.N., Eremin S.A., Belyakova N.I., Klokova O.D., Nizhegorodtsev S.A. [Monitoring of enzyme activity in the production of tableted bivalent cholera vaccine]. Biotekhnologiya [Biotechnology]. 2010; (2):87–92.Заднова С.П., Волох О.А., Крепостнова И.М., Щелканова Е.Ю., Ливанова Л.Ф., Захарова Т.Л., Шепелев И.А., Еремин С.А., Смирнова Н.И. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях. Проблемы особо опасных инфекций. 2007; 1:51–5.Zadnova S.P., Volokh O.A., Krepostnova I.M., Shchelkanova E.Yu., Livanova L.F., Zakharova T.L., Shepelev I.A., Eremin S.A., Smirnova N.I. Study of the generation of the main factors of pathogenicity and immunogenicity by various strains of Vibrio cholerae during their cultivation under production conditions. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2007; (1):51–5.Dukoral, INN – Oral Cholera vaccine [Электронный ресурс]. URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-discussion/dukoral-epar-scientific-discussion_en.pdf (дата обращения 20.10.2021).Dukoral, INN – Oral Cholera vaccine. (Cited 20 Oct 2021). [Internet]. Available from: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-discussion/dukoral-epar-scientificdiscussion_en.pdf.Громова О.В., Кузьмиченко И.А., Киреев М.Н., Нижегородцев С.А., Корсуков В.Н. Новый способ получения комплекса ферментов холерного вибриона – протеовибрина с помощью ультрафильтрации. Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. 2012; 5-1:201–5.Gromova O.V., Kuz’michenko I.A., Kireev M.N., Nizhegorodtsev S.A., Korsukov V.N. [A new method for obtaining a complex of Vibrio cholerae enzymes – proteovibrin, using ultrafiltration]. Bulleten’ Vostochno-Sibirskogo Nauchnogo Tsentra Sibirskogo Otdeleniya Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk [Bulletin of the East Siberian Scientific Center of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences]. 2012; (5-1):201–5.Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. Т. 4. М.; 2018. С. 5326–36.[State Pharmacopoeia of the Russian Federation]. XIV edition. Vol. 4. Moscow; 2018. P. 5326–36.Russell W.M.S., Burch R.L. The Principles of Humane Experimental Technique. London: Methuen; 1959. 238 р.Russell W.M.S., Burch R.L. The Principles of Humane Experimental Technique. London: Methuen; 1959. 238 р.Алексеева Л.П., Якушева О.А., Зюзина В.П., Дуванова О.В., Шипко Е.С., Писанов Р.В. Современные методические приемы очистки холерного токсина. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2019; 15(1):5–9.Alekseeva L.P., Yakusheva O.A., Zyuzina V.P., Duvanova O.V., Shipko E.S., Pisanov R.V. [Modern methodological approaches to purification of cholera toxin]. Vestnik Biotekhnologii I Phiziko-Khimicheskoi Biologii imeni Yu.A. Ovchinnikova [Bulletin of Biotechnology and Physico-Chemical Biology Named after Yu.A. Ovchinnikov]. 2019; 15(1):5–9.Гаева А.В., Громова О.В., Дуракова О.С., Генералов С.В., Ливанова Л.Ф., Волох О.А. Определение специфической активности компонентов холерной химической вакцины с использованием культуры клеток. Биотехнология. 2020; 36(3):82–9. DOI: 10.21519/0234-2758-2020-36-3-82-89.Gaeva A.V., Gromova O.V., Durakova O.S., Generalov S.V., Livanova L.F., Volokh O.A. [Determination of the specific activity of the components of the chemical cholera vaccine using cell cultures]. Biotekhnologiya [Biotechnology]. 2020; 36(3):82–9. DOI: 10.21519/0234-2758-2020-36-3-82-89.Маркина О.В., Алексеева Л.П., Телесманич Н.Р., Чемисова О.С., Акулова М.В., Маркин Н.В. GM1-ДОТ -ИФА для выявления токсинпродуцирующих штаммов Vibrio cholerae. Клиническая лабораторная диагностика. 2011; 5:49–52.Markina O.V., Alekseeva L.P., Telesmanich N.R., Chemisova O.S., Akulova M.V., Markin N.V. [GM1-DOT-ELISA for the detection of toxin-producing strains of Vibrio cholerae]. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika [Clinical Laboratory Diagnostics]. 2011; (5):49–52.Михеева Е.А., Девдариани З.Л., Осина Н.А., Захарова Т .Л. Получение и характеристика антителопродуцирующих гибридом и моноклональных иммуноглобулинов к энтеротоксину Vibrio cholerae. Биотехнология. 2014; 30(3):49–54.Mikheeva E.A., Devdariani Z.L., Osina N.A., Zakharova T.L. [Obtaining and characterization of antibody-produc ing hybridomas and monoclonal immunoglobulins to Vibrio cholerae enterotoxin]. Biotekhnologiya [Biotechnology]. 2014; 30(3):49–54.Гаева А.В., Громова О.В., Дуракова О.С., Генералов С.В., Волох О.А. Современные подходы к контролю активных компонентов холерной химической вакцины. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018; 1:152–7.Gaeva A.V., Gromova O.V., Durakova O.S., Generalov S.V., Volokh O.A. [Modern approaches to the control of active components of cholera chemical vaccine]. Razrabotka i Registratsiya Lekarstvennykh Sredstv [Drug Development and Registration]. 2018; (1):152–7.Полтавченко А.Г., Ерш А.В., Крупницкая Ю.А. Выбор системы детекции для мультиплексного дот-иммуноанализа антител. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(4):229–33. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-4-229-233.Poltavchenko A.G., Ersh A.V., Krupnitskaya Yu.A. [Selection of system of detection for multiplex dot-immune analysis of antibodies]. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika [Clinical Laboratory Diagnostics]. 2016; 61(4):229–33. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-4-229-233.Дыкман Л.А., Хлебцов Н.Г. Золотые наночастицы в биологии и медицине: достижения последних лет и перспективы. Acta Naturae. 2011; 3(2):36–58.Dykman L.A., Khlebtsov N.G. [Gold nanoparticles in biology and medicine: recent achievements and prospects]. Acta Naturae. 2011; 3(2):36–58.Дуракова О.С., Громова О.В., Киреев М.Н., Воробьева С.А., Клокова О.Д., Ливанова Л.Ф., Белякова Н.И., Волох О.А. Применение дот-иммуноанализа для определения специфической активности антигенов в производстве холерной вакцины. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2018; 14(4):10–3.Durakova O.S., Gromova O.V., Kireev M.N., Vorob’eva S.A., Klokova O.D., Livanova L.F., Belyakova N.I., Volokh O.A. [The use of dot-immunoassay to determine the specific activity of antigens in the production of cholera vaccine]. Vestnik Biotekhnologii I Phiziko-Khimicheskoi Biologii imeni Yu.A. Ovchinnikova [Bulletin of Biotechnology and Physico-Chemical Biology Named after Yu.A. Ovchinnikov]. 2018; 14(4):10–3.Воробьева С.А., Дуракова О.С., Волох О.А., Громова О .В. Возможность определения специфической активности О?АГ в производстве холерной химической вакцины с помощью дот-анализа. Известия Саратовского университета. Новая серия. Серия: Химия. Биология. Экология. 2018; 18(3):318–9. DOI: 10.18500/1816-9775-2018-18-3-318-319.Vorob’eva S.A., Durakova O.S., Volokh O.A., Gromova O.V. [The possibility of determining the specific activity of O-AG in the production of cholera chemical vaccine using dotassay]. Izvestiya Saratovskogo Universisteta. Novaya Seriya. Seriya: Khimiya. Biologiya. Ekologiya [Bulletin of the Saratov University. New Series. Series: Chemistry. Biology. Ecology]. 2018; 18(3):318–9. DOI: 10.18500/1816-9775-2018-18-3-318-319.Дыкман Л.А., Волох О.А., Громова О.В., Дуракова О.С., Воробьева С.А., Киреев М.Н., Ливанова Л.Ф., Никифоров А.К., Щеголев С.Ю., Кутырев В.В. Получение и характеристика антител к протективным антигенам холерного вибриона, конъюгированным с наночастицами золота. Доклады Российской академии наук. Науки о жизни. 2020; 490(1):27–30. DOI: 10.31857/S2686738920010084.Dykman L.A., Volokh O.A., Gromova O.V., Durakova O.S., Vorob’eva S.A., Kireev M.N., Livanova L.F., Nikiforov A.K., Shchegolev S.Yu., Kutyrev V.V. [Preparation and characterization of antibodies to protective antigens of Vibrio cholerae, conjugated with gold nanoparticles]. Doklady Rossiiskoi Akademii Nauk. Nauki o Zhizni [Reports of the Russian Academy of Sciences. Life Sciences]. 2020; 490(1):27–30. DOI: 10.31857/S2686738920010084.Плеханов Н.А., Заднова С.П., Агафонов Д.А., Смирнова Н .И. Конструирование мультиплексной ПЦР для идентификации токсигенных штаммов генетических вариантов Vibrio cholerae эльтор и их дифференциации по эпидемическому потенциалу. Биотехнология. 2015; 31(2):82–90.Plekhanov N.A., Zadnova S.P., Agafonov D.A., Smirnova N.I. [Construction of multiplex PCR for identification of toxigenic strains of genetic variants of El Tor Vibrio cholerae and their differentiation by epidemic potential]. Biotekhnologiya [Biotechnology]. 2015; 31(2):82–90.Заднова С.П., Ливанова Л.Ф., Крепостнова И.М., Захарова Т.Л., Осин А.В., Смирнова Н.И. Комплексная гено- и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп и оценки их вирулентности. Патент РФ № 2404257, опубл. 20.11.2010. Бюл. № 32.Zadnova S.P., Livanova L.F., Krepostnova I.M., Zakharova T.L., Osin A.V., Smirnova N.I. [Complex geno- and immunodiagnostic test system for identification of Vibrio cholerae O1 and O139 serogroups and assessment of their virulence]. RF patent No. 2404257, publ. November 20, 2010. Bull. No. 32.Абдрашитова А.С., Яцышина С.Б., Осина Н.А., Астахова Т.С., Портенко С.А., Саяпина Л.В., Шипулин Г.А., Щербакова С .А. Разработка мультилокусных амплификационных тест-систем для выявления ускоренной идентификации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов. Биозащита и биобезопасность. 2014; 6(2):34–41.Abdrashitova A.S., Yatsyshina S.B., Osina N.A., Astakhova T.S., Portenko S.A., Sayapina L.V., Shipulin G.A., Shcherbakova S.A. [Development of multilocus amplification test systems for the detection of accelerated identification of epidemically significant strains of V. cholerae]. Biozashchita i Biobezopasnost’ [Biosecurity and Biosafety]. 2014; 6(2):34–41.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.