Дуракова Оксана Сергеевна
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
Oksana S. Durakova
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
Одним из ключевых требований к штаммам-продуцентам, используемым в производстве иммунобиологических препаратов, является их стабильность, которая заключается в сохранении основных культуральноморфологических, физиологических и продуктивных свойств в ряде генераций. В данной статье предложен комплексный методический подход для проверки стабильности штаммов методами in vitro.
Цель исследования – провести комплексный анализ стабильности штаммов – продуцентов активных компонентов холерной химической вакцины при подготовке посевного материала и на этапе культивирования.
Материалы и методы. В работе использовали токсигенные штаммы Vibrio сholerae 569В классического биовара серовара Инаба и V. cholerae М -41 классического биовара серовара Огава. Морфологию клеток контролировали методами световой и электронной трансмиссивной микроскопии. С помощью атомно-силовой микроскопии измеряли основные параметры бактериальной клетки. Анализ штаммов на присутствие в хромосоме гена ctxA осуществляли с использованием тест-системы «ГенХол» с электрофоретическим учетом результатов. Полногеномное секвенирование штаммов проводили на платформе Ion Torrent PGM с использованием чипа Ion 318 Chip Kit и набора реагентов Ion PGM Hi-Q View Chef 400 Kit. Для определения специфической активности холерного токсина и О-антигена использовали ДОТ-иммуноанализ с конъюгатом на основе стафилококкового белка А и наночастиц коллоидного золота.
Результаты и обсуждение. Микробиологическими, иммунохимическими, молекулярно-генетическими методами и методами микроскопического анализа на всех этапах культивирования подтверждена стабильность основных свойств производственных штаммов V. cholerae – продуцентов активных компонентов холерной химической вакцины и экспериментально обоснована перспективность использования комплексного методического подхода. Адаптация данных методов позволит контролировать стабильность штаммов-продуцентов, оптимизировать условия культивирования и, как следствие, увеличить выход необходимого антигенного компонента вакцины.
One of the key requirements to producer strains used in the manufacturing of immunobiological preparations is their stability, which consists in maintaining the main cultural, morphological, physiological, and productive properties in a series of generations. This paper describes a comprehensive methodological approach to testing strain stability using in vitro techniques.
The purpose of this study was to conduct an integrated analysis of the stability in the strains that produce active components of the chemical cholera vaccine when preparing seed material and at the stage of cultivation.
Materials and methods. Toxigenic strains of Vibrio сholerae 569B of the classical biovar, serovar Inaba and V. сholerae M-41 of the classical biovar, serovar Ogawa were used in the work. Cell morphology was monitored through light and transmission electron microscopy. Atomic force microscopy was applied to measure the main parameters of the bacterial cell. The strains were tested for the presence of ctxA gene in the chromosome using the “GenChol” test system with electrophoretic registration of results. Whole genome sequencing of the strains was performed on the Ion Torrent PGM platform using the Ion 318 Chip Kit and the Ion PGM Hi-Q View Chef 400 Kit. To determine the specific activity of cholera toxin and O-antigen, a DOT immunoassay with a conjugate based on staphylococcal protein A and colloidal gold nanoparticles was applied.
Results and discussion. The stability of the main properties of industrial V. сholerae strains – producers of the active components of the chemical cholera vaccine has been confirmed using microbiological, immunochemical, molecular-genetic methods and microscopic analysis at all stages of cultivation, and the prospects for using the integrated methodological approach experimentally substantiated. Tailoring of these methods will make it possible to control the stability of producer strains, optimize cultivation conditions and, as a result, increase the yield of the necessary antigenic component of the vaccine.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.