microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2023-3-141-146microbe-1866Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESВыявление генетического материала вирусов Tacheng uukuvirus и Sara tick phlebovirus в таежных клещах Свердловской, Томской областей и Приморского края России и их филогенияDetection of the Genetic Material of the Viruses Tacheng uukuvirus and Sara tick phlebovirus in Taiga Ticks Collected in the Sverdlovsk, Tomsk Regions and Primorsky Territory of Russia and Their Phylogenyhttps://orcid.org/0000-0001-6150-370XТупотаН. Л.TupotaN. L.

Тупота Наталья Леонидовна

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Natalia L. Tupota

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

tupota_nl@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1275-171XТерновойВ. А.TernovoiV. A.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8237-457XПономареваЕ. П.PonomarevaE. P.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6460-0828БаяндинР. Б.BayandinR. B.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6890-1575ШваловА. Н.ShvalovA. N.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-3004-3020МалышевБ. С.MalyshevB. S.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9608-2044ТрегубчакТ. В.TregubchakT. V.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruБауэрТ. В.BauerT. V.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruПротопоповаЕ. В.ProtopopovaE. V.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruПетроваН. К.PetrovaN. K.

Российская Федерация, 690091, Приморский край, Владивосток, ул. Уткинская, 36

36 Utkinskaya St., Vladivostok, Primorsky Territory, 690091, Russian Federation

fguz@pkrpn.ruЖебровскаяЕ. В.ZhebrovskayaE. V.

Российская Федерация, 690091, Приморский край, Владивосток, ул. Уткинская, 36

36 Utkinskaya St., Vladivostok, Primorsky Territory, 690091, Russian Federation

fguz@pkrpn.ruБурухинаЕ. Г.BurukhinaE. G.

Российская Федерация, 690091, Приморский край, Владивосток, ул. Уткинская, 36

36 Utkinskaya St., Vladivostok, Primorsky Territory, 690091, Russian Federation

fguz@pkrpn.ruХомичукТ. Ф.KhomichukT. F.

Российская Федерация, 690091, Приморский край, Владивосток, ул. Уткинская, 36

36 Utkinskaya St., Vladivostok, Primorsky Territory, 690091, Russian Federation

fguz@pkrpn.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2577-0434АгафоновА. П.AgafonovA. P.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1314-281XМаксютовР. А.MaksyutovR. A.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0229-321XЛоктевВ. Б.LoktevV. B.

Российская Федерация, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559, Russian Federation

vector@vector.nsc.ruФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Центр геномных исследований мирового уровня по обеспечению биологической безопасности и технологической независимости в рамках Федеральной научно-технической программы развития генетических технологийРоссияState Scientific Center of Virology and Biotechnology “Vector”, World Genomic Research Center for Provision of Biological Safety and Technological Independence within the Frames of Federal Scientific and Technical Program for the Development of Genetic TechnologiesRussian FederationФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Приморском крае»РоссияCenter of Hygiene and Epidemiology in the Primorsky TerritoryRussian Federation20230510202303141146Copyright © Тупота Н.Л., Терновой В.А., Пономарева Е.П., Баяндин Р.Б., Швалов А.Н., Малышев Б.С., Трегубчак Т.В., Бауэр Т.В., Протопопова Е.В., Петрова Н.К., Жебровская Е.В., Бурухина Е.Г., Хомичук Т.Ф., Агафонов А.П., Максютов Р.А., Локтев В.Б., 20232023Тупота Н.Л., Терновой В.А., Пономарева Е.П., Баяндин Р.Б., Швалов А.Н., Малышев Б.С., Трегубчак Т.В., Бауэр Т.В., Протопопова Е.В., Петрова Н.К., Жебровская Е.В., Бурухина Е.Г., Хомичук Т.Ф., Агафонов А.П., Максютов Р.А., Локтев В.Б.Tupota N.L., Ternovoi V.A., Ponomareva E.P., Bayandin R.B., Shvalov A.N., Malyshev B.S., Tregubchak T.V., Bauer T.V., Protopopova E.V., Petrova N.K., Zhebrovskaya E.V., Burukhina E.G., Khomichuk T.F., Agafonov A.P., Maksyutov R.A., Loktev V.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1866

Широкое распространение заболеваний, передающихся клещами, представляет значительную проблему для общественного здравоохранения и здоровья населения, проживающего в эндемичных районах.

Цель работы – с использованием метода высокопроизводительного секвенирования провести поиск, анализ генетического материала и идентификацию новых вирусных агентов семейства Phenuiviridae в иксодовых клещах, собранных в различных регионах азиатской части России.

Материалы и методы

Материалы и методы. В исследовании использованы 1460 таежных клещей, собранных в пригородных районах Томска, Екатеринбурга и в Приморском крае. Генетический материал, выделенный из клещей, анализировали методом высокопроизводительного секвенирования с использованием технологии Illumina с последующим филогенетическим анализом.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Анализ результатов секвенирования позволил обнаружить протяженные нуклеотидные последовательности L-гена, характерного для вирусов семейства Phenuiviridae. Удалось идентифицировать 20 нуклеотидных последовательностей длиной в среднем 250 п.н. в гомогенатах клещей Ixodes persulcatus. Восемнадцать изолятов идентифицированы как представители рода Uukuvirus и два изолята отнесены к роду Phlebovirus семейства Phenuiviridae. Филогенетический анализ показал, что все изоляты рода Uukuvirus кластеризуются с Tacheng tick virus 2, который относится к виду Tacheng uukuvirus. Они формируют отдельную филогенетическую группу этого вида вируса, близкую к двум румынским вариантам 2019 г. Генетический материал Tacheng tick virus 2 обнаружен во всех трех исследованных регионах азиатской части России. Два томских изолята флебовируса классифицированы как Sara tick phlebovirus. При этом они кластеризовались с двумя изолятами флебовирусов из Карелии. Таким образом, в клещах I. persulcatus, собранных в трех географически различных регионах азиатской части России, обнаружен генетический материал Tacheng tick virus 2 и Sara tick phlebovirus, относящийся к двум родам семейства Phenuiviridae.

Extensive spread of tick-borne diseases poses a significant problem for public health and the health of the population living in endemic areas.

The aim of the study was to search, analyze genetic material and identify new viral agents of the Phenuiviridae family in taiga ticks collected in Asian regions of Russia using the method of high throughput sequencing.

Materials and methods

Materials and methods. The study involved 1460 taiga ticks collected in suburban areas of the Tomsk, Yekaterinburg and Primorsky Territory. The genetic material isolated from ticks was sequenced using Illumina technology followed by phylogenetic analysis.

Results and discussion

Results and discussion. Analysis of the sequencing results made it possible to detect extended nucleotide sequences of the L-gene fragment characteristic of the Phenuiviridae family viruses. We were able to identify 20 nucleotide sequences the length of 250 bp on average in homogenates of Ixodes persulcatus ticks. Eighteen isolates have been identified as members of the genus Uukuvirus and two isolates have been assigned to the genus Phlebovirus, Phenuiviridae family. Phylogenetic analysis has shown that all isolates of the genus Uukuvirus fall under the cluster of Tacheng tick virus 2 belonging to the species Tacheng uukuvirus. They form a separate phylogenetic group which is closely related to two Romanian variants of 2019. Tacheng tick virus 2 was detected in all three surveyed regions of the Asian part of Russia. Two Tomsk isolates of phlebovirus were classified as Sara tick phlebovirus and they clustered with two isolates of phleboviruses from Karelia. Thus, the genetic material of Tacheng tick virus 2 and Sara tick phlebovirus belonging to two genera of the family Phenuiviridae was found in I. persulcatus ticks collected in three geographically different regions of the Asian part of Russia.

клещевые инфекциитаежные клещиIxodes persulcatusPhenuiviridaeTacheng tick virus 2Sara tick phlebovirusРоссияtick-borne infectionstaiga tickIxodes persulcatusPhenuiviridaeTacheng tick virus 2Sara tick phlebovirusRussiaИсследование выполнено при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-15-2019-1665) и ГЗ-9/21. Авторы выражают глубокую благодарность д-ру биол. наук, проф. Н.С. Москвитиной (ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Томский государственный университет», г. Томск) и клинико-диагностической лаборатории «Ситилаб» (г. Екатеринбург) за сбор и предоставление таежных клещей для настоящего исследования.The study was supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (Contract No 075-15-2019-1665) and the State Assignment SA-9/21. Acknowledgements: The authors express their deep gratitude to N.S. Moskvitina, Doctor of Biological Sciences, Professor (Tomsk State University, Tomsk) and the clinical diagnostic laboratory “Citylab” (Yekaterinburg) for collecting and providing taiga ticks for this study.ReferencesNi X.B., Cui X.M., Liu J.Y., Ye R.Z., Wu Y.Q., Jiang J.F., Sun Y., Wang Q., Shum M.H., Chang Q.C., Zhao L., Han X.H., Ma K., Shen S.J., Zhang M.Z., Guo W.B., Zhu J.G., Zhan L., Li L.J., Ding S.J., Zhu D.Y., Zhang J., Xia L.Y., Oong X.Y., Ruan X.D., Shao H.Z., Que T.C., Liu G.Y., Du C.H., Huang E.J., Wang X., Du L.F., Wang C.C., Shi W.Q., Pan Y.S., Zhou Y.H., Qu J.L., Ma J., Gong C.W., Chen Q.Q., Qin Q; Tick Genome and Microbiome Consortium (TIGMIC); Lam T.T., Jia N., Cao W.C. Metavirome of 31 tick species provides a compendium of 1,801 RNA virus genomes. Nat. Microbiol. 2023; 8(1):162–73. DOI: 10.1038/s41564-022-01275-w.Ni X.B., Cui X.M., Liu J.Y., Ye R.Z., Wu Y.Q., Jiang J.F., Sun Y., Wang Q., Shum M.H., Chang Q.C., Zhao L., Han X.H., Ma K., Shen S.J., Zhang M.Z., Guo W.B., Zhu J.G., Zhan L., Li L.J., Ding S.J., Zhu D.Y., Zhang J., Xia L.Y., Oong X.Y., Ruan X.D., Shao H.Z., Que T.C., Liu G.Y., Du C.H., Huang E.J., Wang X., Du L.F., Wang C.C., Shi W.Q., Pan Y.S., Zhou Y.H., Qu J.L., Ma J., Gong C.W., Chen Q.Q., Qin Q; Tick Genome and Microbiome Consortium (TIGMIC); Lam T.T., Jia N., Cao W.C. Metavirome of 31 tick species provides a compendium of 1,801 RNA virus genomes. Nat. Microbiol. 2023; 8(1):162–73. DOI: 10.1038/s41564-022-01275-w.Wang S.S., Liu J.Y., Wang B.Y., Wang W.J., Cui X.M., Jiang J.F., Sun Y., Guo W.B., Pan Y.S., Zhou Y.H., Lin Z.T., Jiang B.G., Zhao L., Cao W.C. Geographical distribution of Ixodes persulcatus and associated pathogens: Analysis of integrated data from a China field survey and global published data. One Health. 2023; 16:100508. DOI: 10.1016/j.onehlt.2023.100508.Wang S.S., Liu J.Y., Wang B.Y., Wang W.J., Cui X.M., Jiang J.F., Sun Y., Guo W.B., Pan Y.S., Zhou Y.H., Lin Z.T., Jiang B.G., Zhao L., Cao W.C. Geographical distribution of Ixodes persulcatus and associated pathogens: Analysis of integrated data from a China field survey and global published data. One Health. 2023; 16:100508. DOI: 10.1016/j.onehlt.2023.100508.Klimentov A.S., Belova O.A., Kholodilov I.S., Butenko A.M., Bespyatova L.A., Bugmyrin S.V., Chernetsov N., Ivannikova A.Y., Kovalchuk I.V., Nafeev A.A., Oorzhak N.D., Pilikova O.M., Polienko A.E., Purmak K.A., Romanenko E.N., Romanova L.I., Saryglar A.A., Solomashchenko N.I., Shamsutdinov A.F., Vakalova E.V., Lukashev A.N., Karganova G.G., Gmyl A.P. Phlebovirus sequences detected in ticks collected in Russia: Novel phleboviruses, distinguishing criteria and high tick specificity. Infect. Genet. Evol. 2020; 85:104524. DOI: 10.1016/j.meegid.2020.104524.Klimentov A.S., Belova O.A., Kholodilov I.S., Butenko A.M., Bespyatova L.A., Bugmyrin S.V., Chernetsov N., Ivannikova A.Y., Kovalchuk I.V., Nafeev A.A., Oorzhak N.D., Pilikova O.M., Polienko A.E., Purmak K.A., Romanenko E.N., Romanova L.I., Saryglar A.A., Solomashchenko N.I., Shamsutdinov A.F., Vakalova E.V., Lukashev A.N., Karganova G.G., Gmyl A.P. Phlebovirus sequences detected in ticks collected in Russia: Novel phleboviruses, distinguishing criteria and high tick specificity. Infect. Genet. Evol. 2020; 85:104524. DOI: 10.1016/j.meegid.2020.104524.Slonchak A., Parry R., Pullinger B., Sng J.D.J., Wang X., Buck T.F., Torres F.J., Harrison J.J., Colmant A.M.G., Hobson-Peters J., Hall R.A., Tuplin A., Khromykh A.A. Structural analysis of 3’UTRs in insect flaviviruses reveals novel determinants of sfRNA biogenesis and provides new insights into flavivirus evolution. Nat. Commun. 2022; 13(1):1279. DOI: 10.1038/s41467-022-28977-3.Slonchak A., Parry R., Pullinger B., Sng J.D.J., Wang X., Buck T.F., Torres F.J., Harrison J.J., Colmant A.M.G., Hobson-Peters J., Hall R.A., Tuplin A., Khromykh A.A. Structural analysis of 3’UTRs in insect flaviviruses reveals novel determinants of sfRNA biogenesis and provides new insights into flavivirus evolution. Nat. Commun. 2022; 13(1):1279. DOI: 10.1038/s41467-022-28977-3.Kobayashi D., Murota K., Itokawa K., Ejiri H., Amoa-Bosompem M., Faizah A.N., Watanabe M., Maekawa Y., Hayashi T., Noda S., Yamauchi T., Komagata O., Sawabe K., Isawa H. RNA virome analysis of questing ticks from Hokuriku District, Japan, and the evolutionary dynamics of tick-borne phleboviruses. Ticks Tick Borne Dis. 2020; 11(2):101364. DOI: 10.1016/j.ttbdis.2019.101364.Kobayashi D., Murota K., Itokawa K., Ejiri H., Amoa-Bosompem M., Faizah A.N., Watanabe M., Maekawa Y., Hayashi T., Noda S., Yamauchi T., Komagata O., Sawabe K., Isawa H. RNA virome analysis of questing ticks from Hokuriku District, Japan, and the evolutionary dynamics of tick-borne phleboviruses. Ticks Tick Borne Dis. 2020; 11(2):101364. DOI: 10.1016/j.ttbdis.2019.101364.Ballinger M.J., Bruenn J.A., Kotov A.A., Taylor D.J. Selectively maintained paleoviruses in Holarctic water fleas reveal an ancient origin for phleboviruses. Virology. 2013; 446(1-2):276–82. DOI: 10.1016/j.virol.2013.07.032.Ballinger M.J., Bruenn J.A., Kotov A.A., Taylor D.J. Selectively maintained paleoviruses in Holarctic water fleas reveal an ancient origin for phleboviruses. Virology. 2013; 446(1-2):276–82. DOI: 10.1016/j.virol.2013.07.032.Harvey E., Rose K., Edena J.-S., Lo N., Abeyasuriya T., Shi M., Doggett S.L., Holmes E.S. Extensive diversity of RNA viruses in Australian ticks. J. Virol. 2019; 93(3):e01358-18. DOI: 10.1128/JVI.01358-18.Harvey E., Rose K., Edena J.-S., Lo N., Abeyasuriya T., Shi M., Doggett S.L., Holmes E.S. Extensive diversity of RNA viruses in Australian ticks. J. Virol. 2019; 93(3):e01358-18. DOI: 10.1128/JVI.01358-18.Zhao T., Gong H., Shen X., Zhang W., Shan T., Yu X., Wang S.J., Cui L. Comparison of viromes in ticks from different domestic animals in China. Virol. Sin. 2020; 35(4):398‒406. DOI: 10.1007/s12250-020-00197-3.Zhao T., Gong H., Shen X., Zhang W., Shan T., Yu X., Wang S.J., Cui L. Comparison of viromes in ticks from different domestic animals in China. Virol. Sin. 2020; 35(4):398‒406. DOI: 10.1007/s12250-020-00197-3.Xu L., Guo M., Hu B., Zhou H., Yang W., Hui L., Huang R., Zhan J., Shi W., Wu Y. Tick virome diversity in Hubei Province, China, and the influence of host ecology. Virus Evol. 2021; 7(2):veab089. DOI: 10.1093/ve/veab089.Xu L., Guo M., Hu B., Zhou H., Yang W., Hui L., Huang R., Zhan J., Shi W., Wu Y. Tick virome diversity in Hubei Province, China, and the influence of host ecology. Virus Evol. 2021; 7(2):veab089. DOI: 10.1093/ve/veab089.Málková D., Holubová J., Kolman J.M., Marhoul Z., Hanzal F., Kulková H., Markvart K., Simková L. Antibodies against some arboviruses in persons with various neuropathies. Acta Virol. 1980; 24(4):298.Málková D., Holubová J., Kolman J.M., Marhoul Z., Hanzal F., Kulková H., Markvart K., Simková L. Antibodies against some arboviruses in persons with various neuropathies. Acta Virol. 1980; 24(4):298.Mazelier M., Rouxel R.N., Zumstein M., Mancini R., Bell-Sakyi L., Lozach P.-Y. Uukuniemi virus as a tick-borne virus model. J. Virol. 2016; 90(15):6784‒98. DOI: 10.1128/JVI.00095-16.Mazelier M., Rouxel R.N., Zumstein M., Mancini R., Bell-Sakyi L., Lozach P.-Y. Uukuniemi virus as a tick-borne virus model. J. Virol. 2016; 90(15):6784‒98. DOI: 10.1128/JVI.00095-16.Li C.X., Shi M., Tian J.H., Lin X.D., Kang Y.J., Chen L.J., Qin X.C., Xu J., Holmes E.C., Zhang Y.Z. Unprecedented genomic diversity of RNA viruses in arthropods reveals the ancestry of negative-sense RNA viruses. eLife. 2015; 4:e05378. DOI: 10.7554/eLife.05378.Li C.X., Shi M., Tian J.H., Lin X.D., Kang Y.J., Chen L.J., Qin X.C., Xu J., Holmes E.C., Zhang Y.Z. Unprecedented genomic diversity of RNA viruses in arthropods reveals the ancestry of negative-sense RNA viruses. eLife. 2015; 4:e05378. DOI: 10.7554/eLife.05378.Сизикова Т.Е., Лебедев В.Н., Борисевич С.В. Молекулярная эволюция вируса Даби (Phenuiviridae: Bandavirus: Dabie bandavirus) – возбудителя острой лихорадки с тромбоцитопеническим синдромом. Вопросы вирусологии. 2021; 66(6):409–16. DOI: 10.36233/0507-4088-68.Sizikova T.E., Lebedev V.N., Borisevich S.V. [The molecular evolution of Dabie bandavirus (Phenuiviridae: Bandavirus: Dabie bandavirus), the agent of severe fever with thrombocytopenia syndrome]. Voprosy Virusologii [Problems of Virology]. 2022; 66(6):409–16. DOI: 10.36233/0507-4088-68.Карташов М.Ю., Микрюкова Т.П., Кривошеина Е.И., Кузнецов А.И., Глушкова Л.И., Корабельников И.В., Егорова Ю.И., Терновой В.А., Локтев В.Б. Генотипирование возбудителей клещевого энцефалита и лихорадки Кемерово в таежных клещах, собранных в Республике Коми. Инфекция и иммунитет. 2020; 10(1):159–66. DOI: 10.15789/2220-7619-GOT-1147.Kartashov M.Y., Mikryukova T.P., Krivosheina E.I., Kuznetsov A.I., Glushkova L.I., Korabel’nikov I.V., Egorova Yu.I., Ternovoy V.A., Loktev V.B. [Genotyping of tick-borne encephalitis and Kemerovo viruses in taiga ticks collected in the Komi Republic]. Infektsiya i Immunitet [Russian Journal of Infection and Immunity]. 2020; 10(1):159–66. DOI: 10.15789/2220-7619-GOT-1147.Martin M. Cutadapt removes adapter sequences from highthroughput sequencing reads. EMBnet.journal. 2011; 17(1):10–12. DOI: 10.14806/ej.17.1.200.Martin M. Cutadapt removes adapter sequences from highthroughput sequencing reads. EMBnet.journal. 2011; 17(1):10–12. DOI: 10.14806/ej.17.1.200.Li H., Handsaker B., Wysoker A., Fennell T., Ruan J., Homer N., Marth G., Abecasis G., Durbin R. 1000 genome project data processing subgroup. The sequence alignment/map (SAM) format and SAMtools. Bioinformatics. 2009; 25(16):2078–9. DOI: 10.1093/bioinformatics/btp352.Li H., Handsaker B., Wysoker A., Fennell T., Ruan J., Homer N., Marth G., Abecasis G., Durbin R. 1000 genome project data processing subgroup. The sequence alignment/map (SAM) format and SAMtools. Bioinformatics. 2009; 25(16):2078–9. DOI: 10.1093/bioinformatics/btp352.Okonechnikov K., Golosova O., Fursov M.; UGENE team. Unipro UGENE: a unified bioinformatics toolkit. Bioinformatics. 2012; 28(8):1166–67. DOI: 10.1093/bioinformatics/bts091.Okonechnikov K., Golosova O., Fursov M.; UGENE team. Unipro UGENE: a unified bioinformatics toolkit. Bioinformatics. 2012; 28(8):1166–67. DOI: 10.1093/bioinformatics/bts091.Kumar S., Stecher G., Tamura K. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets. Mol. Biol. Evol. 2016; 33(7):1870–4. DOI: 10.1093/molbev/msw054.Kumar S., Stecher G., Tamura K. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets. Mol. Biol. Evol. 2016; 33(7):1870–4. DOI: 10.1093/molbev/msw054.Bratuleanu B.E., Temmam S., Chrétien D., Regnault B., Pérot P., Bouchier C., Bigot T., Savuța G., Eloit M. The virome of Rhipicephalus, Dermacentor and Haemaphysalis ticks from Eastern Romania includes novel viruses with potential relevance for public health. Transbound. Emerg. Dis. 2022; 69(3):1387–403. DOI: 10.1111/tbed.14105.Bratuleanu B.E., Temmam S., Chrétien D., Regnault B., Pérot P., Bouchier C., Bigot T., Savuța G., Eloit M. The virome of Rhipicephalus, Dermacentor and Haemaphysalis ticks from Eastern Romania includes novel viruses with potential relevance for public health. Transbound. Emerg. Dis. 2022; 69(3):1387–403. DOI: 10.1111/tbed.14105.Dong Z., Yang M., Wang Z., Zhao S., Xie S., Yang Y., Liu G., Zhao S., Xie J., Liu Q., Wang Y. Human Tacheng tick virus 2 infection, China, 2019. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27(2):594–8. DOI: 10.3201/eid3201/191486.Dong Z., Yang M., Wang Z., Zhao S., Xie S., Yang Y., Liu G., Zhao S., Xie J., Liu Q., Wang Y. Human Tacheng tick virus 2 infection, China, 2019. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27(2):594–8. DOI: 10.3201/eid3201/191486.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.