microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2024-1-192-195microbe-1961Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯBRIEF COMMUNICATIONSОценка адсорбционной активности бактериальных клеток на модели Yersinia pseudotuberculosisAssessment of the Adsorption Activity of Bacterial Cells Using Yersinia pseudotuberculosis Modelhttps://orcid.org/0000-0003-4980-4109СалиховР. Р.SalikhovR. R.

Салихов Руслан Римович, 

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

Ruslan R. Salikhov,

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0441-9269КузнецоваЕ. М.KuznetsovaE. M.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

rusrapi@microbe.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3044-971XВолохО. А.VolokhO. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

rusrapi@microbe.ruФКУН «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation20240404202401192195Copyright © Салихов Р.Р., Кузнецова Е.М., Волох О.А., 20242024Салихов Р.Р., Кузнецова Е.М., Волох О.А.Salikhov R.R., Kuznetsova E.M., Volokh O.A.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/1961

В настоящее время в ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора осуществляется выпуск диагностических иммуноглобулинов, используемых в лабораторной диагностике возбудителя чумы. Одним из важных этапов получения данной категории препаратов является процесс адсорбции и удаления перекрестнореагирующих антител для повышения специфичности препарата. С этой целью используются инактивированные клетки штаммов Yersinia pseudotuberculosis.

Цель работы – оценка возможности применения иммунохимических методов для анализа адсорбционных свойств бактериальных клеток, с последующим анализом влияния условий культивирования, способа культивирования, варианта используемого штамма на адсорбционные свойства бактериальных клеток.

Материалы и методы

Материалы и методы. Культивирование проводили на плотной и жидкой питательных средах, инактивацию клеток проводили путем температурного и химического воздействия. Оценку адсорбционной активности осуществляли методами иммуноблоттинга и ингибирующего иммуноферментного анализа. Статистическую обработку результатов проводили с применением двухфакторного дисперсионного анализа.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Показана применимость методов иммуноблоттинга и ингибирующего ИФА для качественной и количественной оценки адсорбционных свойств бактериальных клеток. Установлено, что на адсорбционные свойства бактериальных клеток влияет способ инактивации и внесение субстратной подкормки, способ культивирования не оказывает воздействия на адсорбционные свойства клеток.

Currently, the Russian Anti-Plague Institute “Microbe” produces diagnostic immunoglobulins used in laboratory diagnostics of plague pathogen. One of the important stages in obtaining this category of drugs is the process of adsorption and removal of cross-reacting antibodies to increase the specificity of the drug. For this purpose, inactivated cells of Yersinia pseudotuberculosis strains are used.

The aim of the work was to assess the possibility of using immunochemical methods to analyze the adsorption properties of bacterial cells, followed by an assessment of the impact of cultivation method and conditions, and the variant of the strain used on the adsorption properties of bacterial cells.

Materials and methods

Materials and methods. Cultivation was carried out on solid and liquid nutrient media; cells were inactivated by temperature and chemical exposure. Adsorption activity was assessed using immunoblotting and inhibitory enzyme-linked immunosorbent assay. Statistical processing of the results was performed using two-factor analysis of variance.

Results and discussion

Results and discussion. The suitability of immunoblotting and inhibitory ELISA methods for qualitative and quantitative assessment of the adsorption properties of bacterial cells has been demonstrated. It has been established that the adsorption properties of bacterial cells are influenced by the method of inactivation and the application of substrate feeding; the method of cultivation does not affect the adsorption properties of cells.

иммуноглобулины диагностические чумныеYersinia pseudotuberculosisадсорбция перекрестнореагирующих антителингибирующий иммуноферментный анализdiagnostic plague immunoglobulinsYersinia pseudotuberculosisadsorption of cross-reacting antibodiesinhibitory enzyme-linked immunoassayReferencesKhushiramani R., Tuteja U., Shukla J., Batra H.V. Characterization of outer membrane proteins of Yersinia pestis and Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from India. Indian J. Exp. Biol. 2004; 42(5):508–14.Khushiramani R., Tuteja U., Shukla J., Batra H.V. Charac¬ terization of outer membrane proteins of Yersinia pestis and Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from India. Indian J. Exp. Biol. 2004; 42(5):508–14.Chen Y., Duan R., Li X., Li K., Liang J., Liu C., Qiu H., Xiao Y., Jing H., Wang X. Homology analysis and cross-immunogenicity of OmpA from pathogenic Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia pestis. Mol. Immunol. 2015; 68(2 Pt. A):290–9. DOI: 10.1016/j.molimm.2015.09.016.Chen Y., Duan R., Li X., Li K., Liang J., Liu C., Qiu H., Xiao Y., Jing H., Wang X. Homology analysis and cross-immuno- genicity of OmpA from pathogenic Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia pestis. Mol. Immunol. 2015; 68(2 Pt. A):290–9. DOI: 10.1016/j.molimm.2015.09.016.Keasey S.L., Schmid K.E., Lee M.S., Meegan J., Tomas P., Minto M., Tikhonov A.P., Schweitzer B., Ulrich R.G. Extensive antibody cross-reactivity among infectious gram-negative bacteria revealed by proteome microarray analysis. Mol. Cell. Proteomics. 2009; 8(5):924–35. DOI: 10.1074/mcp.M800213-MCP200.Keasey S.L., Schmid K.E., Lee M.S., Meegan J., Tomas P., Minto M., Tikhonov A.P., Schweitzer B., Ulrich R.G. Extensive antibody cross-reactivity among infectious gram-negative bacteria revealed by proteome microarray analysis. Mol. Cell. Proteomics. 2009; 8(5):924–35. DOI: 10.1074/mcp.M800213-MCP200.Sharma N., Hanif S., Upadhyay D., Chhikara M.K. Inhibition ELISA as a putative tool for the identification and quantification of meningococcal A and X polysaccharides at various stages of vaccine development. J. Immunol. Methods. 2019; 473:112634. DOI: 10.1016/j.jim.2019.112634.Sharma N., Hanif S., Upadhyay D., Chhikara M.K. Inhibition ELISA as a putative tool for the identification and quantification of meningococcal A and X polysaccharides at various stages of vac- cine development. J. Immunol. Methods. 2019; 473:112634. DOI: 10.1016/j.jim.2019.112634.Салихов Р.Р., Борисова С.В., Авдеева Н.Г., Самохвалова Ю.И., Волох О.А. Оптимизация условий культивирования Yersinia pseudotuberculosis в процессе получения клеточной массы. Проблемы особо опасных инфекций. 2021; 4:137–42. DOI: 10.21055/0370-1069-2021-4-137-142.Salikhov R.R., Borisova S.V., Avdeeva N.G., Samokhvalova Yu.I., Volokh O.A. [Optimization of the conditions for cultivation of Yersinia pseudotuberculosis in the process of obtaining cell mass]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2021; (4):137–42. DOI: 10.21055/0370-1069-2021-4-137-142.Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electroforetic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1979; 76(9):4350–4. DOI: 10.1073/pnas.76.9.4350.Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electroforetic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1979; 76(9):4350–4. DOI: 10.1073/pnas.76.9.4350.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.Кобзарь А.И. Прикладная математическая статистика. Для инженеров и научных работников. М.: Физматлит; 2006. 816 с.Kobzar’ A.I. [Applied Mathematical Statistics. For Engineers and Scientists]. Moscow: “Fizmatlit”; 2006. 816 p.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.