microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2024-2-178-187microbe-2012Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESСравнительное исследование патоморфологических изменений тканей легких животных при моделировании инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2Comparative Study of Pathomorphological Changes in Animal Lung Tissue when Modeling Infection Caused by the SARS-CoV-2 Virushttps://orcid.org/0000-0003-1201-8307ШиповаловА. В.ShipovalovA. V.

Шиповалов Андрей Владимирович, 

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Andrey V. Shipovalov, 

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

shipovalov_av@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8251-7040КудровГ. А.KudrovG. A.

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1194-7219ИвлеваЕ. К.IvlevaE. K.

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2028-6099ОмиговВ. В.OmigovV. V.

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-3340-8750ПьянковО. В.P’yankovO. V.

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

vector@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6746-8092ТарановО. С.TaranovO. S.

630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово

Kol’tsovo, Novosibirsk Region, 630559

vector@vector.nsc.ruФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»РоссияState Scientific Center of Virology and Biotechnology “Vector”Russian Federation20240307202402178187Copyright © Шиповалов А.В., Кудров Г.А., Ивлева Е.К., Омигов В.В., Пьянков О.В., Таранов О.С., 20242024Шиповалов А.В., Кудров Г.А., Ивлева Е.К., Омигов В.В., Пьянков О.В., Таранов О.С.Shipovalov A.V., Kudrov G.A., Ivleva E.K., Omigov V.V., P’yankov O.V., Taranov O.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/2012

Целью работы явилось изучение особенностей инфекционного процесса в легких животных, применяемых как модели для оценки патогенности вируса SARS-CoV-2.

Материалы и методы

Материалы и методы. В работе использовали штамм геноварианта альфа вируса SARS-CoV-2. Эксперименты проводили на линейных и трансгенных мышах, сирийских хомячках, морских свинках, хорьках и двух видах приматов: макак-резус и зеленая мартышка. Патоморфологическое исследование проводили методом оптической микроскопии гистологических препаратов легких с использованием компьютеризированного микроскопа с цифровым микрофотографированием.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Проведен сравнительный гистологический анализ легких шести различных видов лабораторных животных при моделировании новой коронавирусной инфекции, определены сходные морфометрические признаки тяжести течения заболевания, вызванного вирусом SARS-CoV-2 у чувствительных животных, выявлена дозозависимая корреляция патологических изменений в тканях легких при интраназальном введении различных инфицирующих доз. Охарактеризованы особенности патоморфологических изменений у шести различных видов животных при моделировании новой коронавирусной инфекции, определен их дозозависимый характер. Представленные результаты исследований могут быть применены для выбора модельного животного с целью углубленного изучения патогенеза COVID-19, вызванного вновь выделяемыми эпидемически значимыми геновариантами коронавируса, динамики иммунных реакций организма во время развития заболевания, а также при изучении in vivo протективного действия перспективных терапевтических препаратов и вакцин.

The aim of the work was to study the features of the infectious process in the lungs of animals used as models for assessing SARS-CoV-2 pathogenicity.

Materials and methods

Materials and methods. The strain of SARS-CoV-2 alpha variant virus was used in the work. The experiments were carried out on linear and transgenic mice, Syrian hamsters, guinea pigs, ferrets and two types of primates: rhesus macaques and green monkey. The pathomorphological examination was performed by optical microscopy of histological lung preparations using a computerized microscope with digital microphotography.

Results and discussion

Results and discussion. A comparative histological analysis of the lungs in six different types of laboratory animals was carried out when modeling a new coronavirus infection; similar morphometric signs of the severity of the disease caused by the SARS-CoV-2 virus in sensitive animals were determined, and a dose-dependent correlation of pathological changes in lung tissues with intranasal administration of various infectious doses was revealed. The features of pathomorphological changes in six different animal species in the simulation of a new coronavirus infection have been characterized, and their dose-dependent nature determined. The presented research results can be used to select a model animal for the purpose of in-depth study of the pathogenesis of COVID-19 caused by newly isolated coronavirus variants, the dynamics of immune reactions of the body during the development of the disease, as well as in vivo studies of the protective effect of promising therapeutic drugs and vaccines.

SARS-CoV-2COVID-19модельное животноепатоморфологиялегкиеSARS-CoV-2COVID-19animal modelpathomorphologylungsReferencesLeneva I., Kartashova N., Poromov A., Gracheva A., Korchevaya E., Glubokova E., Borisova O., Shtro A., Loginova S., Shchukina V., Khamitov R., Faizuloev E. Antiviral activity of umifenovir in vitro against a broad spectrum of coronaviruses, including the novel SARS-CoV-2 virus. Viruses. 2021; 13(8):1665. DOI: 10.3390/v13081665.Leneva I., Kartashova N., Poromov A., Gracheva A., Korchevaya E., Glubokova E., Borisova O., Shtro A., Loginova S., Shchukina V., Khamitov R., Faizuloev E. Antiviral activity of umi¬ fenovir in vitro against a broad spectrum of coronaviruses, inclu¬ ding the novel SARS-CoV-2 virus. Viruses. 2021; 13(8):1665. DOI: 10.3390/v13081665.Sutton T.C., Subbarao K. Development of animal models against emerging coronaviruses: From SARS to MERS coronavirus. Virology. 2015; 479-480:247–58. DOI: 10.1016/j.virol.2015.02.030.Sutton T.C., Subbarao K. Development of animal models against emerging coronaviruses: From SARS to MERS coronavirus. Virology. 2015; 479-480:247–58. DOI: 10.1016/j.virol.2015.02.030.Dolskiy A.A., Gudymo A.S., Taranov O.S., Grishchenko I.V., Shitik E.M., Prokopov D.Y., Soldatov V.O., Sobolevskaya E.V., Bodnev S.A., Danilchenko N.V., Moiseeva A.A., Torzhkova P.Y., Bulanovich Y.A., Onhonova G.S., Ivleva E.K., Kubekina M.V., Belykh A.E., Tregubchak T.V., Ryzhikov A.B., Gavrilova E.V., Maksyutov R.A., Deykin A.V., Yudkin D.V. The tissue distribution of SARS-CoV-2 in transgenic mice with inducible ubiquitous expression of hACE2. Front. Mol. Biosci. 2022; 8:821506. DOI: 10.3389/fmolb.2021.821506.Dolskiy A.A., Gudymo A.S., Taranov O.S., Grishchenko I.V., Shitik E.M., Prokopov D.Y., Soldatov V.O., Sobolevskaya E.V., Bodnev S.A., Danilchenko N.V., Moiseeva A.A., Torzhkova P.Y., Bulanovich Y.A., Onhonova G.S., Ivleva E.K., Kubekina M.V., Belykh A.E., Tregubchak T.V., Ryzhikov A.B., Gavrilova E.V., Maksyutov R.A., Deykin A.V., Yudkin D.V. The tissue distribution of SARS-CoV-2 in transgenic mice with inducible ubiquitous expression of hACE2. Front. Mol. Biosci. 2022; 8:821506. DOI: 10.3389/fmolb.2021.821506.Шиповалов А.В., Кудров Г.А., Томилов А.А., Боднев С.А., Болдырев Н.Д., Овчинникова А.С., Зайковская А.В., Таранов О.С., Пьянков О.В., Максютов Р.А. Изучение восприимчивости линий мышей к вызывающим обеспокоенность вариантам вируса SARS-CoV-2. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 1:148–55. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-1-148-155.Shipovalov A.V., Kudrov G.А., Tomilov A.A., Bodnev S.A., Boldyrev N.D., Ovchinnikova A.S., Zaikovskaya A.V., Taranov O.S., P’yankov O.V., Maksyutov R.A. [Susceptibility to SARSCoV-2 virus variants of concern in mouse models]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2022; (1):148–55. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-1-148-155.Шиповалов А.В., Кудров Г.А., Томилов А.А., Боднев С.А., Болдырев Н.Д., Овчинникова А.С., Зайковская А.В., Таранов О.C., Ивлева Е.К., Пьянков О.В., Максютов Р.А. Патогенность вызывающих обеспокоенность вариантов вируса SARS-CoV-2 для сирийского хомячка. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 3:164–9. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-3-164-169.Shipovalov A.V., Kudrov G.A., Tomilov A.A., Bodnev S.A., Boldyrev N.D., Ovchinnikova A.S., Zaikovskaya A.V., Taranov O.S., Ivleva E.K., P’yankov O.V., Maksyutov R.A. [Pathogenicity of the SARS-CoV-2 virus variants of concern for the Syrian golden hamster]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2022; (3):164–9. DOI: 10.21055/0370-10692022-3-164-169.Kumar S., Yadav P.K, Srinivasan R., Perumal N. Selection of animal models for COVID-19 research. Virusdisease. 2020; 31(4):453–8. DOI: 10.1007/s13337-020-00637-4.Kumar S., Yadav P.K, Srinivasan R., Perumal N. Selection of animal models for COVID-19 research. Virusdisease. 2020; 31(4):453–8. DOI: 10.1007/s13337-020-00637-4.Kim Y.I., Kim S.G., Kim S.M., Kim E.H., Park S.J., Yu K.M., Chang J.H., Kim E.J., Lee S., Casel M.A.B., Um J., Song M.S., Jeong H.W., Lai V.D., Kim Y., Chin B.S., Park J.S., Chung K.H., Foo S.S., Poo H., Mo I.P., Lee O.J., Webby R.J., Jung J.U., Choi Y.K. Infection and rapid transmission of SARS-CoV-2 in ferrets. Cell Host Microbe. 2020; 27(5):704–709.e2. DOI: 10.1016/j.chom.2020.03.023.Kim Y.I., Kim S.G., Kim S.M., Kim E.H., Park S.J., Yu K.M., Chang J.H., Kim E.J., Lee S., Casel M.A.B., Um J., Song M.S., Jeong H.W., Lai V.D., Kim Y., Chin B.S., Park J.S., Chung K.H., Foo S.S., Poo H., Mo I.P., Lee O.J., Webby R.J., Jung J.U., Choi Y.K. Infection and rapid transmission of SARS-CoV-2 in ferrets. Cell Host Microbe. 2020; 27(5):704–709.e2. DOI: 10.1016/j.chom.2020.03.023.Рыжиков А.Б., Рыжиков Е.А., Богрянцева М.П., Даниленко Е.Д., Иматдинов И.Р., Нечаева Е.А., Пьянков О.В., Пьянкова О.Г., Суслопаров И.М., Таранов О.С., Гудымо А.С., Данильченко Н.В., Слепцова Е.С., Боднев С.А., Онхонова Г.С., Петров В.Н., Моисеева А.А., Торжкова П.Ю., Пьянков С.А., Трегубчак Т.В., Антонец Д.В., Гаврилова Е.В., Максютов Р.А. Иммуногенные и протективые свойства пептидной вакцины против SARS-CoV-2. Вестник Российской академии медицинских наук. 2021; 76(1):5–19. DOI: 10.15690/vramn1528.Ryzhikov A.B., Ryzhikov E.A., Bogryantseva M.P., Danilenko E.D., Imatdinov I.R., Nechaeva E.A., Pyankov O.V., Pyankova O.G., Susloparov I.M., Taranov O.S., Gudymo A.S., Danilchenko N.V., Sleptsova E.S., Bodnev S.A., Onkhonova G.S., Petrov V.N., Moiseeva A.A., Torzhkova P.Yu., Pyankov S.A., Tregubchak T.V., Antonets D.V., Gavrilova E.V., Maksyutov R.A. [Immunogenicity and protectivity of the peptide vaccine against SARS-CoV-2]. Vestnik Rossijskoj Akademii Meditsinskikh Nauk [Bulletin of the Russian Academy of Medical Sciences]. 2021; 76(1):5–19. DOI: 10.15690/vramn1528.Casadevall A., Pirofski L. Host-pathogen interactions: the attributes of virulence. J. Infect. Dis. 2001; 184(3):337–44. DOI: 10.1086/322044.Casadevall A., Pirofski L. Host-pathogen interactions: the attributes of virulence. J. Infect. Dis. 2001; 184(3):337–44. DOI: 10.1086/322044.Yuan L., Tang Q., Cheng T., Xia N. Animal models for emerging coronavirus: progress and new insights. Emerg. Microbes Infect. 2020; 9(1):949–61. DOI: 10.1080/22221751.2020.1764871.Yuan L., Tang Q., Cheng T., Xia N. Animal models for emerging coronavirus: progress and new insights. Emerg. Microbes Infect. 2020; 9(1):949–61. DOI: 10.1080/22221751.2020.1764871.Borghesi A., Zigliani A., Masciullo R., Golemi S., Maculotti P., Farina D., Maroldi R. Radiographic severity index in COVID-19 pneumonia: relationship to age and sex in 783 Italian patients. Radiol. Med. 2020; 125(5):461–4. DOI: 10.1007/s11547-020-01202-1.Borghesi A., Zigliani A., Masciullo R., Golemi S., Maculotti P., Farina D., Maroldi R. Radiographic severity index in COVID-19 pneumonia: relationship to age and sex in 783 Italian patients. Radiol. Med. 2020; 125(5):461–4. DOI: 10.1007/s11547-020-01202-1.Naninck T., Kahlaoui N., Lemaitre J., Maisonnasse P., De Mori A., Pascal Q., Contreras V., Marlin R., Relouzat F., Delache B., Hérate C., Aldon Y., van Gils M., Zabaleta N., Ho Tsong Fang R., Bosquet N., Sanders R.W., Vandenberghe L.H., Chapon C., Le Grand R. Computed tomography and [18F]-FDG PET imaging provide additional readouts for COVID-19 pathogenesis and therapies evaluation in non-human primates. iScience. 2022; 25(4):104101. DOI: 10.1016/j.isci.2022.104101.Naninck T., Kahlaoui N., Lemaitre J., Maisonnasse P., De Mori A., Pascal Q., Contreras V., Marlin R., Relouzat F., Delache B., Hérate C., Aldon Y., van Gils M., Zabaleta N., Ho Tsong Fang R., Bosquet N., Sanders R.W., Vandenberghe L.H., Chapon C., Le Grand R. Computed tomography and [18F]-FDG PET imaging provide additional readouts for COVID-19 pathogenesis and therapies evaluation in non-human primates. iScience. 2022; 25(4):104101. DOI: 10.1016/j.isci.2022.104101.Upadhya S., Rehman J., Malik A.B., Chen S. Mechanisms of lung injury induced by SARS-CoV-2 infection. Physiology. 2022; 37(2):88–100. DOI: 10.1152/physiol.00033.2021.Upadhya S., Rehman J., Malik A.B., Chen S. Mechanisms of lung injury induced by SARS-CoV-2 infection. Physiology. 2022; 37(2):88–100. DOI: 10.1152/physiol.00033.2021.Matute-Bello G., Downey G., Moore B.B., Groshong S.D., Matthay M.A., Slutsky A.S., Kuebler W.M. An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2011; 44(5):725–38. DOI: 10.1165/rcmb.2009-0210ST.Matute-Bello G., Downey G., Moore B.B., Groshong S.D., Matthay M.A., Slutsky A.S., Kuebler W.M. An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2011; 44(5):725–38. DOI: 10.1165/rcmb.2009-0210ST.Dietert K., Gutbier B., Wienhold S.M., Reppe K., Jiang X., Yao L., Chaput C., Naujoks J., Brack M., Kupke A., Peteranderl C., Becker S., von Lachner C., Baal N., Slevogt H., Hocke A.C., Witzenrath M., Opitz B., Herold S., Hackstein H., Sander L.E., Suttorp N., Gruber A.D. Spectrum of pathogenand model-specific histopathologies in mouse models of acute pneumonia. PLoS One. 2017; 12(11):e0188251. DOI: 10.1371/journal.pone.0188251.Dietert K., Gutbier B., Wienhold S.M., Reppe K., Jiang X., Yao L., Chaput C., Naujoks J., Brack M., Kupke A., Peteranderl C., Becker S., von Lachner C., Baal N., Slevogt H., Hocke A.C., Witzenrath M., Opitz B., Herold S., Hackstein H., Sander L.E., Suttorp N., Gruber A.D. Spectrum of pathogenand model-specific histopathologies in mouse models of acute pneumonia. PLoS One. 2017; 12(11):e0188251. DOI: 10.1371/journal.pone.0188251.Osterrieder N., Bertzbach L.D., Dietert K., Abdelgawad A., Vladimirova D., Kunec D., Hoffmann D., Beer M., Gruber A.D., Trimpert J. Age-dependent progression of SARS-CoV-2 infection in Syrian hamsters. Viruses. 2020; 12(7):779. DOI: 10.3390/v12070779.Osterrieder N., Bertzbach L.D., Dietert K., Abdelgawad A., Vladimirova D., Kunec D., Hoffmann D., Beer M., Gruber A.D., Trimpert J. Age-dependent progression of SARS-CoV-2 infection in Syrian hamsters. Viruses. 2020; 12(7):779. DOI: 10.3390/v12070779.Gruber A.D., Osterrieder N., Bertzbach L.D., Vladimirova D., Greuel S., Ihlow J., Horst D., Trimpert J., Dietert K. Standardization of reporting criteria for lung pathology in SARSCoV-2-infected hamsters: what matters? Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2020; 63(6):856–9. DOI: 10.1165/rcmb.2020-0280LE.Gruber A.D., Osterrieder N., Bertzbach L.D., Vladimirova D., Greuel S., Ihlow J., Horst D., Trimpert J., Dietert K. Standardization of reporting criteria for lung pathology in SARSCoV-2-infected hamsters: what matters? Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2020; 63(6):856–9. DOI: 10.1165/rcmb.2020-0280LE.Sia S.F., Yan L.M., Chin A.W.H., Fung K., Choy K.T., Wong A.Y.L., Kaewpreedee P., Perera R.A.P.M., Poon L.L.M., Nicholls J.M., Peiris M., Yen H.L. Pathogenesis and transmission of SARS-CoV-2 in golden hamsters. Nature. 2020; 583(7818):834–8. DOI: 10.1038/s41586-020-2342-5.Sia S.F., Yan L.M., Chin A.W.H., Fung K., Choy K.T., Wong A.Y.L., Kaewpreedee P., Perera R.A.P.M., Poon L.L.M., Nicholls J.M., Peiris M., Yen H.L. Pathogenesis and transmission of SARS-CoV-2 in golden hamsters. Nature. 2020; 583(7818):834–8. DOI: 10.1038/s41586-020-2342-5.Зайратьянц О.В., редактор. Патологическая анатомия COVID-19. Атлас. М.: ГБУ «НИИОЗММ ДЗМ»; 2020. 140 с.Zairat’yants O.V., editor. [Pathological Anatomy of COVID-19. Atlas]. Moscow; 2020. 140 p.Самсонова М.В., Михалева Л.М., Зайратьянц О.В., Варясин В.В., Быканова А.В., Мишнев О.Д., Березовский Ю.С., Тишкевич О.А., Гомзикова Е.А., Черняев А.Л., Хованская Т.Н. Патология легких при COVID-19 в Москве. Архив патологии. 2020; 82(4):32–40. DOI: 10.17116/patol20208204132.Samsonova M.V., Mikhaleva L.M., Zairat’yants O.V., Varyasin V.V., Bykanova A.V., Mishnev O.D., Berezovsky Yu.S., Tishkevich O.A., Gomzikova E.A., Chernyaev A.L., Khovanskaya T.N. [Lung pathology of COVID-19 in Moscow]. Arkhiv Patologii [Archive of Pathology]. 2020; 82(4):32–40. DOI: 10.17116/patol20208204132.Шестопалова Л.В., Прокопьева Е.А., Корчагина К.В., Максимова Д.А., Зайковская А.В., Шкурупий В.А., Шестопалов А.М. Ультраструктурные изменения альвеолоцитов и макрофагов легких под влиянием высокопатогенного вируса гриппа птиц H5N1. Вестник НГУ. Серия: Биология, клиническая медицина. 2011; 9(1):58–65.Shestopalova L.V., Prokopieva E.A., Korchagina K.V., Maksimova D.A., Zaikovskaya A.V., Shkurupi V.A., Shestopalov A.M. [Ultrastructural changes in lung alveolocytes and macrophages under the influence of highly pathogenic avian influenza virus H5N1]. Vestnik Novosibirskogo Gosudarstvennogo Universiteta [Bulletin of Novosibirsk State University. Series: Biology and Clinical Medicine]. 2011; 9(1):58–65.Xu Z., Shi L., Wang Y., Zhang J., Huang L., Zhang C., Liu S., Zhao P., Liu H., Zhu L., Tai Y., Bai C., Gao T., Song J., Xia P., Dong J., Zhao J., Wang F.S. Pathological findings of COVID-19 associated with acute respiratory distress syndrome. Lancet. Respir. Med. 2020; 8(4):420–2. DOI: 10.1016/S2213-2600(20)30076-X.Xu Z., Shi L., Wang Y., Zhang J., Huang L., Zhang C., Liu S., Zhao P., Liu H., Zhu L., Tai Y., Bai C., Gao T., Song J., Xia P., Dong J., Zhao J., Wang F.S. Pathological findings of COVID-19 associated with acute respiratory distress syndrome. Lancet. Respir. Med. 2020; 8(4):420–2. DOI: 10.1016/S2213-2600(20)30076-X.Almansa R., Martínez-Orellana P., Rico L., Iglesias V., Ortega A., Vidaña B., Martínez J., Expósito A., Montoya M., Bermejo-Martin J.F. Pulmonary transcriptomic responses indicate a dual role of inflammation in pneumonia development and viral clearance during 2009 pandemic influenza infection. PeerJ. 2017; 5:e3915. DOI: 10.7717/peerj.3915.Almansa R., Martínez-Orellana P., Rico L., Iglesias V., Ortega A., Vidaña B., Martínez J., Expósito A., Montoya M., Bermejo-Martin J.F. Pulmonary transcriptomic responses indicate a dual role of inflammation in pneumonia development and viral clearance during 2009 pandemic influenza infection. PeerJ. 2017; 5:e3915. DOI: 10.7717/peerj.3915.To K.K., Hung I.F., Li I.W., Lee K.L., Koo C.K., Yan W.W., Liu R., Ho K.Y., Chu K.H., Watt C.L., Luk W.K., Lai K.Y., Chow F.L., Mok T., Buckley T., Chan J.F.; Wong S.S., Zheng B., Chen H., Lau C.C., Tse H., Cheng V.C., Chan K.H., Yuen K.Y. Delayed clearance of viral load and marked cytokine activation in severe cases of pandemic H1N1 2009 influenza virus infection. Clin. Infect. Dis. 2010; 50(6):850–9. DOI: 10.1086/650581.To K.K., Hung I.F., Li I.W., Lee K.L., Koo C.K., Yan W.W., Liu R., Ho K.Y., Chu K.H., Watt C.L., Luk W.K., Lai K.Y., Chow F.L., Mok T., Buckley T., Chan J.F.; Wong S.S., Zheng B., Chen H., Lau C.C., Tse H., Cheng V.C., Chan K.H., Yuen K.Y. Delayed clearance of viral load and marked cytokine activation in severe cases of pandemic H1N1 2009 influenza virus infection. Clin. Infect. Dis. 2010; 50(6):850–9. DOI: 10.1086/650581.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.