microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2024-3-88-95microbe-2045Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESПолучение и характеристика иммунных асцитических жидкостей к штаммам Vibrio cholerae R-вариантаProduction and Characterization of Immune Ascitic Fluids to Vibrio cholerae R-Variant Strainshttps://orcid.org/0000-0001-5522-9097ЕвдокимоваВ. В.EvdokimovaV. V.

Евдокимова Вероника Вячеславовна

Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40

117/40, M. Gor’kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation

evdokimova_vv@antiplague.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9866-3579АлексееваЛ. П.AlekseevaL. P.

Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40

117/40, M. Gor’kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation

plague@aaanet.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8159-7547ЯкушеваО. А.YakushevaO. A.

Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40

117/40, M. Gor’kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation

plague@aaanet.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4676-0377ЛевченкоД. А.LevchenkоD. A.

Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40

117/40, M. Gor’kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation

plague@aaanet.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7598-0013РенгачМ. В.RengachM. V.

Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40

117/40, M. Gor’kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation

plague@aaanet.ruФКУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт»РоссияRostov-on-Don Research Anti-Plague InstituteRussian Federation202430092024038895Copyright © Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Якушева О.А., Левченко Д.А., Ренгач М.В., 20242024Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Якушева О.А., Левченко Д.А., Ренгач М.В.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Yakusheva O.A., Levchenkо D.A., Rengach M.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/2045

Цель работы – получить иммунные асцитические жидкости (ИАЖ) мышей к целым клеткам холерных вибрионов R-варианта и оценить возможность их применения для обнаружения и характеристики атипичных холерных вибрионов. Материалы и методы. Проводили цикл иммунизации нелинейных белых мышей, включающий четыре инъекции антигена с адъювантом и без него, индукцию накопления асцитической жидкости путем внутрибрюшинной инокуляции мышиных миеломных клеток. Экспериментальные ИАЖ изучали в серологических и иммунологических реакциях на наборе штаммов Vibrio cholerae R-варианта, V. cholerae nonO1/nonO139, V. cholerae О1 и гетерологичных микроорганизмах. Результаты и обсуждение. Полученные ИАЖ отличаются высокими титрами антител в непрямом иммуноферментном анализе (до 1:640000), а в реакции слайд-агглютинации агглютинируют атипичные холерные вибрионы в разведении от 1:8 до 1:32. Обнаружены перекрестные реакции в трех изучаемых группах штаммов V. cholerae, что свидетельствует о наличии у них сходных антигенов. По результатам электрофоретического разделения и иммуноблоттинга лизатов клеток штаммов установлено наличие общих мажорных белков в области 55–60 и 25 кДа. Наглядные отличия наблюдаются по нескольким минорным белкам в области 30–55 кДа, в частности они отсутствуют у типичных штаммов. Показано также, что экспериментальные ИАЖ содержат антитела к эпитопам коровой части липополисахарида и поверхностных белков, причем большая часть из них являются общими для исследуемых групп холерных вибрионов. Полученные данные позволяют заключить, что возможность обнаружения V. cholerae R-варианта повышается при условии использования набора ИАЖ к R-вибрионам; для серологического анализа атипичных штаммов ИФА предпочтительнее реакции слайдагглютинации. Объединение ИАЖ в виде одного препарата представляется перспективным, так как позволяет охарактеризовать спектр поверхностных антигенных детерминант измененных штаммов и расширить возможности их обнаружения.

The aim of the work was to obtain immune ascitic fluids (IAF) of mice to whole cells of R-variant cholera vibrios and to evaluate the possibility of their use for detection and characterization of atypical cholera vibrios. Materials and methods. A cycle of immunization of nonlinear white mice was performed. It included four injections of antigen with and without adjuvant, induction of ascitic fluid accumulation through intraperitoneal inoculation of murine myeloma cells. Experimental IAFs were studied in serologic and immunologic reactions on a set of strains of R-variant Vibrio cholerae, V. cholerae nonO1/nonO139, V. cholerae O1 and heterologous microorganisms. Results and discussion. The obtained IAFs are notable for high antibody titers in indirect enzyme immunoassay (up to 1:640000), and agglutinate atypical cholera vibrios at dilutions from 1:8 to 1:32 in slide-agglutination reaction. Cross-reactions were found in the three groups of V. cholerae strains studied, indicating the presence of similar antigens. Based on the results of electrophoretic separation and immunoblotting of cell lysates of the strains, the presence of common major proteins in the region of 55–60 and 25 kDa was established. Evident differences were observed for several minor proteins in the 30–55 kDa region, in particular, they were absent in the typical strains. It is also shown that experimental IAFs contain antibodies to epitopes of the core part of LPS and surface proteins, most of them being common to the studied groups of cholera vibrios. The obtained data allow us to draw the following conclusions: the possibility of detecting a larger number of V. cholerae R-variants is increased if the ELISA kit to R-vibrios is used; the use of ELISA method is preferable to the slide-agglutination reaction for serologic analysis of atypical strains. Combining IAFs in the form of a single preparation seems promising, as it allows for characterizing the spectrum of surface antigenic determinants of altered strains and expanding the possibilities of their detection.

холерный вибрионатипичный штаммR-вариантмышиная асцитическая жидкостьполиклональная сывороткаагглютинацияантигенная детерминантаcholera vibrioatypical strainR-variantmurine ascitic fluidpolyclonal serumagglutinationantigenic determinantReferencesБезсмертный В.Е., Подосинникова Л.С., Иванова С.М., Титов Г.В., Смоликова Л.М., Мазрухо Б.Л., Кругликов В.Д.,Шестиалтынова И.С., Монахова Е.В., Кудрякова Т.А., Авдеева Е.П., Лобанов В.В. Характеристика культур холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, изолированных от людей и из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации в 2006 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 20. Ростов-на-Дону; 2007. С. 49–53.Bezsmertny V.E., Podosinnikova L.S., Ivanova S.M., Titov G.V., Smolikova L.M., Mazruho B.L., Kruglikov V.D., Shestialtynova I.S., Monakhova E.V., Kudryakova T.A., Avdeeva E.P., Lobanov V.V. [Characteristics of cultures of cholera vibrios O1 and O139 serogroups isolated from patients and from environmental objects on the territory of the Russian Federation in 2006. In: [Cholera and Pathogenic for Humans Vibrios. Proceedings of the Problem Commission (48.04). Iss. 20]. Rostov-on-Don; 2007. P. 49–53.Иванова С.М., Титов Г.В., Безсмертный В.Е., Титова С.В., Кругликов В.Д., Москвитина Э.А., Архангельская И.В., Ежова М.И., Кудрякова Т.А., Зубкова Д.А., Водопьянов С.О., Водопьянов А.С. Информация о биологических свойствах холерных вибрионов О1 серогруппы, изолированных из объектов окружающей среды и от людей на территории Российской Федерации в 2014 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 28. Ростов-на-Дону; 2015. С. 67–70. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.Ivanova S.M., Titov G.V., Bezsmertny V.E., Titova S.V., Kruglikov V.D., Moskvitina E.A., Arhangel’skaya I.V., Ezhova M.I., Kudryakova T.A., Zubkova D.A., Vodop’yanov S.O., Vodop’yanov A.S. [Data on the biological properties of cholera vibrios O1 serogroup isolated from environmental objects and from patients on the territory of the Russian Federation in 2014]. In: [Cholera and Pathogenic for Humans Vibrios. Proceedings of the Problem Commission (48.04). Iss. 28]. Rostov-on-Don; 2015. P. 67–70. Available from: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.Яшкулов К.Б., Каляева Т.Б., Оброткина Н.Ф., Тюнникова В.Д., Дандаева Б.В. О свойствах культур холерных вибрионов О1, выделенных из воды открытых водоемов Республики Калмыкия в период с 2012–2014 гг. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 28. Ростов-на-Дону; 2015. С. 71–75. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.Yashkulov K.B., Kalyaeva T.B., Obrotkina N.F., Tyunnikova V.D., Dandaeva B.V. [On the properties of cultures of cholera vibrios O1 isolated from the open water bodies of the Republic of Kalmykia in 2012–2014]. In: [Cholera and Pathogenic for Humans Vibrios. Proceedings of the Problem Commission (48.04). Iss. 28]. Rostov-on-Don; 2015. P. 71–5. Available from: http://antiplague.ru/wpcontent/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.Иванова С.М., Иванников В.В., Мискинова Т.А., Лопатин А.А, Титова С.В., Кругликов В.Д., Москвитина Э.А., Архангельская И.В., Левченко Д.А.2, Чемисова О.С., Гаевская Н.Е., Ежова М.И., Непомнящая Н.Б. Информация о биологических свойствах холерных вибрионов О1 серогруппы, изолированных из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации в 2017 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 31. Ростов-на-Дону; 2018. С 48–51. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2019/01/СБОРНИК -31.pdf.Ivanova S.M., Ivannikov V.V., Miskinova T.A., Lopatin A.A, Titova S.V., Kruglikov V.D., Moskvitina E.A., Arkhangel’skaya I.V., Levchenko D.A., Chemisova O.S., Gaevskaya N.E., Ezhova M.I., Nepomnyashchaya N.B [Information on the biological properties of cholera vibrios O1 serogroup isolated from environmental objects on the territory of the Russian Federation in 2017]. In: [Cholera and Pathogenic for Humans Vibrios. Proceedings of the Problem Commission (48.04). Iss. 31]. Rostov-on-Don; 2018. P. 48–51. Available from: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2019/01/SBORNIK-31.pdf.Мошкина А.А. Свойства забайкальских штаммов холерных вибрионов О1, выделенных за последние пять лет. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 32. Ростов-на-Дону; 2019. С. 110–12. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2019/11/Холера-и-патогенные-для-человека-вибрионы-выпуск-32.pdf.Moshkina A.A. [Properties of Transbaikal strains of cholera vibrios O1 isolated over the past five years]. In: [Cholera and Pathogenic for Humans Vibrios. Proceedings of the Problem Commission (48.04). Iss. 32]. Rostov-on-Don; 2019. P. 110–12. Available from: https://clck.ru/3DbpY9Черепахина И.Я., Балахнова В.В., Подосинникова Л.С., Огнева Н.С., Сорокин В.М., Прозорова Л.А., Фецайлова О.П., Чиркова О.О. Современные подходы к изучению антигенной вариабельности холерных вибрионов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996; 4:85–6.Cherepakhina I.Ya., Balakhnova V.V., Podosinnikova L.S., Ogneva N.S., Sorokin V.M., Prozorova L.A., Fetsailova O.P., Chirkova O.O. [Modern approaches to the study of antigenic variability of cholera vibrios]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 1996; (4):85–6.Лобанов В.В., Сухарь В.В. Особенности липополисахарида Vibrio cholerae. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002; 2:102–7.Lobanov V.V., Sukhar’ V.V. [Features of Vibrio cholerae lipopolysaccharide]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 2002; (2):102–7.Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Якушева О.А., Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Зюзина В.П., Яговкин М.Э. Изучение с помощью панели МКА поверхностных антигенных детерминант атипичных по агглютинабельности штаммов Vibrio cholerae. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 1:77–85. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-1-77-85.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Yakusheva O.A., Levchenko D.A., Kruglikov V.D., Zyuzina V.P., Yagovkin M.E. [Study of the surface antigenic determinants of Vibrio cholerae strains with atypical agglutinability using the panel of monoclonal antibodies]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2022; (1):77–85. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-1-77-85.Климович В.Б., Самойлович М.П., Грязева И.В., Крутецкая И.Ю., Пашкова С.Ф., Руденко И.Я. Моноклональные антитела на основе репертуара иммунного ответа мышей линии SJL/J. Медицинская иммунология. 1999; 1(1-2):47–58.Klimovich V.B., Samojlovich M.P., Gryazeva I.V., Krutetskaya I.Yu., Pashkova S.F., Rudenko I.Ya. [Monoclonal antibodies based on the immune response repertoire of SJL/J mice]. Meditsinskaya Immunologiya [Medical IImmunology]. 1999; 1(1-2): 47–58.Нуралова И.В. Способ получения хламидийного люминесцирующего диагностического препарата, хламидийный люминесцирующий диагностический препарат и способ диагностики хламидийных инфекций. Патент РФ № 2141666, опубл. 20.11.1999.Nuralova I.V. [A method for producing a chlamydial luminescent diagnostic drug, a chlamydial luminescent diagnostic drug and a method for diagnosing chlamydial infections]. RF Patent No. 2141666, publ. 20 Nov 1999.Подоплекина Л.Е., Шарова О.И., Унгер Г.Н. Способ получения антител для производства диагностических препаратов вируса клещевого энцефалита. Патент РФ № 2063245, опубл. 10.07.1996.Podoplekina L.E., Sharova O.I., Unger G.N. [Method for obtaining antibodies for the production of tick-borne encephalitis virus diagnostic drugs]. RF Patent No. 2063245, publ. 10 July 1996.Девдариани З.Л., Федорова В.А., Веренков М.С., Чижиньков А.И., Кочетов А.Х. Беспородные мыши – биопродуценты моноклональных антител к капсульному антигену возбудителя чумы. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1992; 2:73–4.Devdariani Z.L., Fedorova V.A., Verenkov M.S., Chizhin’kov A.I., Kochetov A.Kh. [Outbred mice are bioproducers of monoclonal antibodies to the capsular antigen of the plague pathogen]. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology]. 1992; (2):73–4.Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Якушева О.А., Алексеева Л.П., Водопьянов С.О., Ежова М.И., Носков А.К. Изучение диапазона изменчивости по агглютинабельности штаммов Vibrio cholerae, выделенных при мониторинговых исследованиях. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 3:107–14. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-3-107-114.Levchenko D.A., Kruglikov V.D., Arhangel’skaya I.V., Yakusheva O.A., Alekseeva L.P., Vodop’yanov S.O., Ezhova M.I., Noskov A.K. [Assessment of the variation range of agglutinability in Vibrio cholerae strains isolated in the course of monitoring studies]. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2022; (3):107–4. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-3-107-114.Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Подойницына О.А., Непомнящая Н.Б., Селянская Н.А., Водопьянов А.С., Ежова М.И., Ренгач М.В., Носков А.К. Комплексная характеристика штаммов Vibrio cholerae – R-вариант. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2023; 19(1):6–14.Levchenko D.A., Kruglikov V.D., Podojnitsyna O.A., Nepomnyashchaya N.B., Selyanskaya N.A., Vodop’yanov A.S., Ezhova M.I., Rengach M.V., Noskov A.K. [Complex characteristics of Vibrio cholerae strains – R-variant]. Bulletin of Biotechnology and Physicochemical Biology named after Yu.A. Ovchinnikov. 2023; 19(1):6–14.Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях. СП б.; 2012. 48 с. [Электронный ресурс]. URL: https://ruslasa.ru/wp-content/uploads/2017/06/Directive_201063_rus.pdf.[Directive 2010/63/EU of the European Parliament and the Council of European Union on the protection of animals used for scientific purposes]. St. Petersburg; 2012. 48 p. [Internet]. Available from: https://ruslasa.ru/wp-content/uploads/2017/06/Directive_201063_rus.pdf.Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.; 1991. 288 с.Egorov A.M., Osipov A.P., Dzantiev B.B., Gavrilova E.M. Theory and Application of Enzyme Immunoassay. Moscow; 1991. 288 p.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding – current status and outlook. J. Immunol. Methods. 1984; 72(2):313–40. DOI: 10.1016/0022-1759(84)90001-2.Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding – current status and outlook. J. Immunol. Methods. 1984; 72(2):313–40. DOI: 10.1016/0022-1759(84)90001-2.Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Кретенчук О.Ф., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Бурша О.С. Иммуноферментные методы анализа в диагностике холеры. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(5):303–7. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-5-303-307.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Kretenchuk O.F., Kruglikov V.D., Arhangel’skaya I.V., Bursha O.S. [Enzyme immunoassay methods in the diagnosis of cholera]. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika [Clinical Laboratory Diagnostics]. 2016; 61(5):303–7. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-5-303-307.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.