microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2015-1-79-84microbe-212Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯBIOTECHNOLOGY, IMMUNOLOGYПрименение ультрафильтрации для концентрирования и очистки антигеновDeployment of Ultrafiltration for Concentrating and Purification of AntigensКомиссаровА. В.KomissarovA. V.rusrapi@microbe.ruАлешинаЮ. А.AleshinaYu. A.rusrapi@microbe.ruГромоваО. В.GromovaO. V.rusrapi@microbe.ruНикифоровА. К.NikiforovA. K.rusrapi@microbe.ruЕреминС. А.EreminS. A.rusrapi@microbe.ruВолохО. А.VolokhO. A.rusrapi@microbe.ruЛобовиковаО. А.LobovikovaO. A.rusrapi@microbe.ruПерепелицаА. И.PerepelitsaA. I.rusrapi@microbe.ruРоссийский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation201520032015017984Copyright © Комиссаров А.В., Алешина Ю.А., Громова О.В., Никифоров А.К., Еремин С.А., Волох О.А., Лобовикова О.А., Перепелица А.И., 20152015Комиссаров А.В., Алешина Ю.А., Громова О.В., Никифоров А.К., Еремин С.А., Волох О.А., Лобовикова О.А., Перепелица А.И.Komissarov A.V., Aleshina Y.A., Gromova O.V., Nikiforov A.K., Eremin S.A., Volokh O.A., Lobovikova O.A., Perepelitsa A.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/212

Представлен обзор отечественной и зарубежной литературы, посвященный вопросам использования ультрафильтрации для концентрирования и очистки антигенов. Рассмотрено применение различных методов ультрафильтрации. Установлено, что одним из перспективных является фильтрация в тангенциальном режиме на установках с плоскорамными фильтрующими элементами. Показано влияние таких технологических параметров данного процесса, как степень концентрирования, давление, температура, номинальная отсечка по молекулярной массе ультрафильтрационных мембран на качество целевых продуктов, время проведения и уменьшение (увеличение) потерь препаратов. Проведенный анализ данных литературы позволяет выбрать способ проведения процесса концентрирования и очистки протективных антигенов бактериальной и вирусной природы и учесть влияние описанных в обзоре параметров при разработке технологии производства диагностических и профилактических медицинских иммунобиологических препаратов.

Represented is domestic and foreign literature review dedicated to usage of ultrafiltration for concentrating and purification of antigens. Discussed are the issues of deployment of various ultrafiltration techniques. It is determined that filtering in the tangential mode by means of modules with flat-frame filtering elements is among the prospective ones. Demonstrated is the impact of such technological specifications as concentration rate, pressure, temperature, and membrane nominal cut-off on molecular mass on the quality of target products, the time elapsed, and preparation losses decrease (increase). Literature data analysis proves to be useful for the selection of the proper procedure for concentrating and purification of protective antigens of bacterial and viral origins. In addition, it allows for taking into account the parameters under discussion when developing specific manufacturing technologies for diagnostic and preventive medical immunobiological preparation production.

ультрафильтрацияантигеныконцентрированиеочисткаultrafiltrationantigensconcentratingpurificationReferencesАгафонов А.П., Стрельцова М.А., Игнатьев Г.М., Твердохлебов А.В., Чепурнов А.А., Калиберов С.А., Кузьмин В.А., Черный Н.Б. Способ получения концентратов вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки и обладающих иммуногенной и протективной активностью. Патент 2029561 РФ, опубл. 27.02.1995. Бюл. № 6.Agafonov A.P., Strel’tsova M.A., Ignat’ev G.M., Tverdokhlebov A.V., Chepurnov A.A., Kaliberov S.A., Kuz’min V.A., Cherny N.B. [Method for the production of concentrates from the viruses inducing hemorrhagic fevers and possessing immunogenic and protective activity]. RF Patent 2029561, 27.02.1995.Бирюков В.В. Основы промышленной биотехнологии. М.: КолосС; 2004. 296 с.Biryukov V.V. [Fundamental Principles of Industrial Biotechnology]. M.; 2004. 296 p.Борковски А. Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы С. Патент 2457858 РФ, опубл. 10.08.2012. Бюл. № 22.Borkovski A. [Multiple vaccination including Neisseria meningitides serogroup C]. RF Patent 2457858, 10.08.2012.Брахт К., Каталевский Е.Е., Савельева С.П. Фильтрация кросс-флоу. Фармацевтические технологии и упаковка. 2009; 6: 47-51.Brakht K., Katalevsky E.E., Savel’eva S.P. [Cross-flow filtration]. Farmatsevt. Tekhnol. Upakovka. 2009; 6:47–51.Брок Т. Мембранная фильтрация. М.: Мир; 1987. 462 с.Brok T. [Membrane Filtration]. M.: Mir; 1987. 462 p.Бывалов А.А., Евстигнеев В.И., Дармов И.В., Пименов Е.В. Антигенный состав чумной химической вакцины. Патент 2190424 РФ, опубл. 10.10.2002. Бюл. № 28.Byvalov A.A., Evstigneev V.I., Darmov I.V., Pimenov E.V. [Antigen composition of chemical plague vaccine]. RF Patent 2190424, 10.10.2002.Бывалов А.А., Евстигнеев В.И., Дармов И.В., Пименов Е.В. Идентификация и выделение антигена, защищающего морских свинок от экспериментальной чумы. Пробл. особо опасных инф. 2005; 1(89):54-8.Byvalov A.A., Evstigneev V.I., Darmov I.V., Pimenov E.V. [Identification and isolation of the antigen, protecting guinea pigs from experimental plague infection]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2005; 1(89):54–8.Генералов С.В., Абрамова Е.Г., Матвеева Ж.В., Жулидов И.М., Никифоров А.К., Лобовикова О.А., Савицкая Л.В., Минаева Л.Н., Галкина М.В., Михеева Т.А., Комиссаров А.В., Киреев М.Н. Опыт получения кроличьего антирабического иммуноглобулина с применением культурального антигена. Пробл. особо опасных инф. 2012; 2(112):78-81.Generalov S.V., Abramova E.G., Matveeva Zh.V., Zhulidov I.M., Lobovikova O.A., Savitskaya L.V., Minaeva L.N., Galkina M.V., Mikheeva T.A., Komissarov A.V., Kireev M.N., Nikiforov A.K. [Production of rabbit anti-rabies immunoglobulin using cultural antigen]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2012; 2(112):78–81.Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Кирееев М.Н., Федорова В.А., Аленкина Т.В., Абрамова Е.Г. Новый способ получения О-антигена холерного очищенного с целью создания холерных диагностических препаратов. Биотехнология. 2002; 2:42-6.Gromova O.V., Dzhaparidze M.N., Dyatlov I.A., Kireev M.N., Fedorova V.A., Alenkina T.V., Abramova E.G. [New method for the production of purified cholera O-antigen with a view to obtain cholera diagnostic preparations]. Biotekhnologia. 2002; 2:42–6.Громова О.В., Нижегородцев С.А., Дятлов И.А., Кутырев В.В. Оптимизация процесса производства холерной химической таблетированной вакцины с помощью технологии ультрафильтрации. Пробл. особо опасных инф. 2011; 109:71-4.Gromova O.V., Nizhegorodtsev S.A., Dyatlov I.A., Kutyrev V.V. [Optimization of the process of cholera chemical pelleted vaccine production using ultrafiltration technology]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 109:71–4. 11. Dzhayappa Kh., O’Konnell K. [Vaccine ALFA TAXOIDA C. perfringens]. RF Patent 2434638, 27.11.2011.Джаяппа Х., О`Коннелл К. Вакцина АЛЬФА ТОКСОИДА С. perfringens. Патент 2434638 РФ, опубл. 27.11.2011. Бюл. № 33.Dyatlov I.A., Nizhegorodtsev S.A., Gromova O.V., Vasin Yu.G., Butov A.S., Klokova O.D., Belyakova N.I. [Development of ultrafiltration technology for the production of cholera vibrio O-antigen with a view to vaccine manufacturing]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2001; 2(82):133–9.Дятлов И.А., Нижегородцев С.А., Громова О.В., Васин Ю.Г., Бутов А.С., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка ультрафильтрационной технологии получения О-антигена холерного вибриона для производства вакцин. Пробл. особо опасных инф. 2001; 2(82):133-9.Egorova N.B., Semenov B.F., Kurbatova E.A., Efremova V.N., Kaverina K.G., Mikhailova N.A. [Poly-component vaccine for immune-prophylaxis and immuno-therapy of the diseases caused by opportunistic (potentially) pathogenic microorganisms]. RF Patent 2209081, 27.07.2003.Егорова Н.Б., Семенов Б.Ф., Курбатова Е.А., Ефремова В.Н., Каверина К.Г., Михайлова Н.А. Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами. Патент 2209081 РФ, опубл. 27.07.2003. Бюл. № 21.Yeremin S.A., Volokh O.A., Shepelev I.A., Dalvadyants S.M., Dyatlov I.A. [Designation of new technological patterns and ranging the processes of deriving the antigens from the plague and tularemia microbial agents]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2006; 2(92):58–61.Еремин С.А., Волох О.А., Шепелев И.А., Дальвадянц С.М., Дятлов И.А. Разработка новых технологических схем и масштабирование процессов получения антигенов чумного и туляремийного микробов. Пробл. особо опасных инф. 2006; 2(92):58-61.Ignatov P.E., Fedorov A.I. [Method for the production of protective extracellular antigen of Brucella, which can induce chronic brucellosis]. RF Patent 2199340, 27.02.2003.Игнатов П.Е., Федоров А.И. Способ получения протективного внеклеточного антигена бруцелл, обладающего способностью провоцировать хронические формы бруцеллеза. Патент 2199340 РФ, опубл. 27.02.2003. Бюл. № 6.Il’chenko T.E., Bilalova G.P., Stavitskaya N.Kh., Solyanik R.G., Bystritsky L.D., Krasil’nikov I.V. [Vaccine “ENCEVIR” – state-of-the-art medical preparation for tick-borne encephalitis prophylaxis]. Sibir. Med. Zh. 2009; 2(2): 50–5.Ильченко Т.Э., Билалова Г.П., Ставицкая Н.Х., Соляник Р.Г., Быстрицкий Л.Д., Красильников И.В. Вакцина «Энцевир» - современный препарат для профилактики клещевого энцефалита. Сибирский мед. журн. 2009; 2(2):50-5.Karavaev Yu.D., Semenova I.N., Mel’nik N.V., Plokhova A.A. [Method for the production of the vaccine for animal necrobacillosis prevention and treatment]. RF Patent 2329828, 27.07.2008.Караваев Ю.Д., Семенова И.Н., Мельник Н.В., Плохова А.А. Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных. Патент 2329828 РФ, опубл. 27.07.2008. Бюл. № 21.Kisilevsky M.V., Donenko F.V., Voyushin K.E., Trishin A.V., Kurbatova E.A., Egorova N.B., Gruber I.M., Akhmatova N.K., Semenova I.B., Semenov B.F. [Method for the production of protective protein-bearing fraction of bacteria]. RF Patent 2311197, 27.11.2007.Киселевский М.В., Доненко Ф.В., Воюшин К.Е., Тришин А.В., Курбатова Е.А., Егорова Н.Б., Грубер И.М., Ахматова Н.К., Семенова И.Б., Семенов Б.Ф. Способ получения протективной белоксодержащей фракции бактерий. Патент 2311197 РФ, опубл. 27.11.2007. Бюл. № 33.Kozlov V.E., Nichveeva L.D., Grechkina N.T., Shevyrev N.S., Azarova N.A., Sharov A.N., Bezgin V.M., Solodov E.N., Bukova N.K. [Method for the production of tuberculin]. RF Patent 2113233, 20.06.1998.Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д., Гречкина Н.Т., Шевырев Н.С., Азарова Н.А., Шаров А.Н., Безгин В.М., Солодов Е.Н., Букова Н.К. Способ получения туберкулина. Патент 2113233 РФ, опубл. 20.06.1998. Бюл. № 17.Komissarov A.V., Eremin S.A., Ul`yanov A.Yu., Aleshina Yu.A., Nikiforov A.K., Vasin Yu.G., Klokova O.D., Belyakova N.I. [Development of the experimental technology for protective antigens of Vibrio cholerae 569B Inaba concentration by means of tangential ultrafiltration]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 3(109):75–7.Комиссаров А.В., Еремин С.А., Ульянов А.Ю., Алешина Ю.А., Никифоров А.К., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка экспериментальной технологии концентрирования протективных антигенов штамма Vibrio cholerae 569В Инаба методом тангенциальной ультрафильтрации. Пробл. особо опасных инф. 2011; 3(109):75-7.Komissarov A.V., Eremin S.A., Aleshina Yu.A., Vasin Yu.G., Klokova O.D., Beliakova N.I. [Experimental evaluation of application of “cross-flow” ultrafiltration method for O-antigen concentrating in cholera chemical bivalent vaccine production]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 2(108):83–6.Комиссаров А.В., Еремин С.А., Алешина Ю.А., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Экспериментальная оценка использования метода ультрафильтрации по принципу «кросс-флоу» для концентрирования О-антигена в производстве холерной бивалентной химической вакцины. Пробл. особо опасных инф. 2011; 2(108):83-6.Mikhailova N.A., Shaimukhametov F.A., Kuznetsova T.N. [Method for the production of A Pseudomonas aeruginosa exotoxin]. RF Patent 1596770, 09.06.1995.Михайлова Н.А., Шаймухаметов Ф.А., Кузнецова Т.Н. Способ получения экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Патент 1596770 РФ, опубл. 09.06.1995. Бюл. № 16.Neschislyaev V.A., Molokhova E.I., Chistokhina L.P., Sorokina Yu.V., Belova I.V. [Multiple use of biologically active metabolites of Lacto- and Bifidobacteria in probiotics manufacturing]. Vestnik Biotekhnol. Fizikokhim. Biol. imeni Y.A.Ovchinnikova. 2006; 2(4):29–30.Несчисляев В.А., Молохова Е.И., Чистохина Л.П., Сорокина Ю.В., Белова И.В. Комплексное использование биологически активных метаболитов лакто- и бифидобактерий в производстве пробиотиков. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова. 2006; 2(4):29-30.Nyn’I.V. [Biotechnology as a basic approach to manufacturing of immunobiological preventive preparations]. Vestnik Biotekhnol. Fizikokhim. Biol. imeni Y.A.Ovchinnikova. 2006; 2(4):62–3.Нынь И.В. Биотехнология как основной подход в производстве иммунобиологических профилактических препаратов. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова. 2006; 2(4):62-3.Sitnik N.P., Zagidullin N.V., Israfilov A.G., Enikeeva L.F., Mukhacheva A.V., Shafeeva R.S., Kuntsevich Yu.G., Petrova I.I. [Method for the production of highly specific heterologous anti-rabies serum]. RF Patent 2322503, 20.04.2008.Ситник Н.П., Загидуллин Н.В., Исрафилов А.Г., Еникеева Л.Ф., Мухачева А.В., Шафеева Р.С., Кунцевич Ю.Г., Петрова И.И. Способ получения высокоспецифичной гетерологичной антирабической сыворотки. Патент 2322503 РФ, опубл. 20.04.2008. Бюл. № 11.Sit’kov V.I., Surmilo A.P., Lemeshko V.N., Soboleva G.L., Panin A.N. [Method for the production of polyvalent vaccine against animal leptospirosis]. RF Patent 2096042, 20.11.1997.Ситьков В.И., Сурмило А.П. Лемешко В.Н., Соболева Г.Л. Панин А.Н. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных. Патент 2096042 РФ, опубл. 20.11.1997. Бюл. № 32.Scopus R. [Methods of Protein Purification]. M.: Mir; 1985. 237 p.Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир; 1985. 237 с.Stroganov V.V., Kosmaenko O.M., Popov A.A., Nikitina G.P., Dzhaparidze M.N., Kotkina T.A. [Application of ultrafiltration performed on the home-produced semi-permeable membranes UAM for separation of somatic O-antigen from cholera vibrio exotoxin]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1978; 4(68):50–67.Строганов В.В., Космаенко О.М., Попов А.А., Никитина Г.П., Джапаридзе М.Н., Коткина Т.А. Применение метода ультрафильтрации на отечественных полупроницаемых мембранах УАМ для отделения соматического О-антигена от экзотоксина холерного вибриона. Пробл. особо опасных инф. 1978; 4(68):50-67.Stroganov V.V., Kosmaenko O.M., Tikhonov N.G., Adamov A.K., Vasin Yu.G., Nikitina G.P., Matorina N.A. [Experimental studies of ultrafiltration module for manufacturing purified cholera exotoxin]. In: [Prophylaxis of Particularly Dangerous Infections]. 1980. P. 50–67.Строганов В.В., Космаенко О.М., Тихонов Н.Г., Адамов А.К., Васин Ю.Г., Никитина Г.П., Маторина Н.А. Экспериментальное изучение ультрафильтрационной установки для получения очищенного холерного экзотоксина. В кн.: Профилактика особо опасных инфекций. 1980. C. 50-7.Tkachenko E.A., Dzagurova T.K., Nabatnikov P.A., Mikhailov M.I. [Method for the production of the mixed bivalent, cultural, inactivated, concentrated, purified vaccine for HFRS (hemorrhagic fever with renal syndrome) prophylaxis]. RF Patent 2445117, 20.03.2012.Ткаченко Е.А., Дзагурова Т.К., Набатников П.А., Михайлов М.И. Способ получения комбинированной бивалентной, культуральной, инактивированной, концентрированной, очищенной вакцины для профилактики геморрагической лихорадки с почечным синдромом. Патент 2445117 РФ, опубл. 20.03.2012. Бюл. № 8.Cherkasov A.N., Pasechnik V.A. [Membranes and Sorbents in Biotechnology]. L.: Khimiya; 1991. 239 p.Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Л.: Химия; 1991. 239 с.Shevtsov A.N., Lobastov V.S., Borovskoy D.V., Menovshchikov V.A., Khapaev N.G. [Method for the production of anthrax protective antigen]. RF Patent 2340356, 10.12.2008.Шевцов А.Н., Лобастов В.С., Боровской Д.В., Меновщиков В.А., Хапаев Н.Г. Способ получения сибиреязвенного протективного антигена. Патент 2340356 РФ, опубл. 10.12.2008. Бюл. № 34.Shevyrev N.S., Bezgin V.M., Kozlov V.E., Nichveeva L.D., Solodov E.N., Sharov A.N., Bukova N.K., Tyrina V.S. [Allergen for diagnostics of tuberculosis and method for its production]. RF Patent 2045959, 20.10.1995.Шевырев Н.С., Безгин В.М., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д., Солодов Е.Н., Шаров А.Н., Букова Н.К., Тырина В.С. Аллерген для диагностики туберкулеза и способ его получения. Патент 2045959 РФ, опубл. 20.10.1995. Бюл. № 29.Shevyrev N.S., Bezgin V.M., Nichveeva L.D., Kozlov V.E., Solodov E.N., Grinev A.A., Sorokina A.A., Alekhin V.A., Sharov A.N., Tyrina V.S., Bukova N.K. [Method for the production of tuberculin]. RF Patent 2035914, 27.05.1995.Шевырев Н.С., Безгин В.М., Ничвеева Л.Д., Козлов В.Е., Солодов Е.Н., Козлов В.Е., Гринев А.А., Сорокина А.А., Алехин В.А., Шаров А.Н., Тырина В.С., Букова Н.К. Способ получения туберкулина. Патент 2035914 РФ, опубл. 27.05.1995. Бюл. № 15.Shepelev I.A., Eremin S.A., Vasin Yu.G., Volokh O.A., Alenkina T.V., Belyakova N.I., Kuznetsova E.M., Nikiforov A.K. [Prospects for application of ultrafiltration technology for the scaled preparation of plague microbe and cholera vibrio major antigens]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 3(109):84–7.Шепелев И.А., Еремин С.А., Васин Ю.Г., Волох О.А., АленкинаТ.В., Белякова Н.И., Кузнецова Е.М. Перспективы применения процессов ультрафильтрации для масштабированного получения основных антигенов чумного микроба и холерного вибриона. Пробл. особо опасных инф. 2011; 3(109):84-7.Shepelev I.A., Volokh O.A., Yereomin S.A., Dyatlov I.A. [Optimization of the techniques for deriving the protective “C” complex of the tularemia pathogen]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2006; 2(92):61–4.Шепелёв И.А., Волох О.А., Еремин С.А., Дятлов И.А. Оптимизация способа получения протективного «С»-комплекса туляремийного микроба. Пробл. особо опасных инф. 2006; 2(92):61-4.El’bert L.B., Krasil’nikov I.V., Drozdov S.G., Terletskaya E.N., Timofeev A.V. [Concentrated purified vaccine against tick-borne encephalitis produced using ultrafiltration and chromatography]. Vopr. Virusol. 1985; 1:90–3.Эльберт Л.Б., Красильников И.В., Дроздов С.Г., Терлецкая Е.Н., Тимофеев А.В. Концентрированная очищенная вакцина клещевого энцефалита, изготовленная методом ультрафильтрации и хроматографии. Вопр. вирусол. 1985; 1:90-3.Arockiasamy A., Krishnaswamy S. Purification of integral outer-membrane protein OmpC, a surface antigen from Salmonella typhi for structure-function studies: a method applicable to enterobacterial major outermembrane protein. Anal. Biochem. 2000; 283(1):64–70.Arockiasamy A., Krishnaswamy S. Purification of integral outer-membrane protein OmpC, a surface antigen from Salmonella typhi for structure-function studies: a method applicable to enterobacterial major outer-membrane protein. Anal. Biochem. 2000; 283(1):64-70.Barrett P., Mundt W., Kistner O., Howard M. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines. Expert. Rev. Vaccines. 2009; 8:607–18.Barrett P., Mundt W., Kistner O., Howard M. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines. Expert. Rev. Vaccines. 2009; 8:607-18.Jang H., Hyo S.K., Jeong A.K. Improved Purification Process for Cholera Toxin and its Application to the Quantification of Residual Toxin in Cholera Vaccines. J. Microbiol. Biotechnol. 2009; 19(1):108–12.Jang H., Hyo S.K., Jeong A.K. Improved Purification Process for Cholera Toxin and its Application to the Quantification of Residual Toxin in Cholera Vaccines. J. Microbiol. Biotechnol. 2009; 19(1):108-12.Takagi M., Barbosa R. Purification of capsular polysaccharide produced by Haemophilus influenzae type b through a simple, efficient and suitable method for scale-up. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2008; 35:1217–22.Takagi M., Barbosa R. Purification of capsular polysaccharide produced by Haemophilus influenzae type b through a simple, efficient and suitable method for scale-up. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2008; 35:1217-22.Zydney A.L., Kuriyel R. Protein concentration and buffer exchange using ultrafiltration. Methods in Biotechnology. 2000; 9:35–46.Zydney A.L., Kuriyel R. Protein concentration and buffer exchange using ultrafiltration. Methods in Biotechnology. 2000; 9:35-46.Zydney A.L., Kuriyel R. Protein concentration and buffer exchange using ultrafiltration. Methods in Biotechnology. 2000; 9:35-46.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.