microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2015-2-46-49microbe-225Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYИзучение состава клеточных антигенов патогенных буркхольдерий с использованием иммуноблоттингаStudies of the Composition of the Cell Antigen Preparations Obtained from Pathogenic Burkholderia, Using ImmunoblottingБудченкоА. А.BudchenkoA. A.vari2@sprint-v.com.ruМазуроваИ. Ю.MazurovaI. Yu.vari2@sprint-v.com.ruИлюхинВ. И.IlyukhinV. I.vari2@sprint-v.com.ruВолгоградский научно-исследовательский противочумный институтРоссияVolgograd Research Anti-Plague InstituteRussian Federation201520062015024649Copyright © Будченко А.А., Мазурова И.Ю., Илюхин В.И., 20152015Будченко А.А., Мазурова И.Ю., Илюхин В.И.Budchenko A.A., Mazurova I.Y., Ilyukhin V.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/225

Проведен сравнительный анализ иммуноэлектрофореграмм клеточных антигенов - B. pseudomallei С - 141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264, B. cepacia 25416 после иммуноблоттинга с иммунными кроличьими сыворотками, полученными к живым клеткам авирулентного штамма B. pseudomallei 107, клеточным и внеклеточным антигенам B. pseudomallei 107, B. pseudomallei С - 141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264 , B. cepacia 25416. Визуальный анализ позволил на иммуноэлектрофореграмме клеточных антигенов B. mallei 10230, полученной в иммуноблоттинге с сывороткой к клеточным антигенам B. mallei 10230, выявить фракции с молекулярными массами 18,4 и 35 kDa, отсутствующие на иммуноэлектрофореграмме B. pseudomallei С - 141 после иммуноблоттинга с этой же сывороткой, что позволяет дифференцировать патогенные буркхольдерии. В то же время использование в иммуноблоттинге гетерологичных иммунных сывороток повышает дискриминирующую способность сравнительного анализа иммуноэлектрофореграмм клеточных антигенов в целях дифференциации патогенных буркхольдерий. Уровень воспроизводимости иммуноэлектрофореграмм позволяет использовать коэффициенты их сходства для сравнительного анализа с применением компьютерных программ.

Carried out has been comparative analysis of the cell antigen immune-electrophoregrammes of B. pseudomallei C-141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264, and B. cepacia 25416 after immunoblotting with immune rabbit sera to living cells of avirulent B. pseudomallei 107, celllular and extracellular antigens of B. pseudomallei 107, B. pseudomallei C-141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264, and B. cepacia 25416. Visual investigation has revealed the presence of fractions with molar mass of 18.4 and 35 kDa in B. malei 10230 cell antigens’ electrophoregramme obtained by means of immunoblotting with serum to B. malei 10230 cell antigens, as distinct from B. pseudomallei C-141 electrophoregramme with the same serum. This makes it possible to distinguish the pathogenic Burkholderia. At the same time utilization of heterologous immune sera enhances discriminating capacity of the comparative assay. The level of reproducibility of immune-electrophoregrammes allows for the deployment of the similarity coefficient for computer-based comparative analysis.

анализиммуноблоттингклеточные и внеклеточные антигенысывороткаBurkholderia pseudomalleiB malleianalysisimmunoblottingcellular and extracellular antigensserumReferencesБейли Н. Математика в биологии и медицине. М.: Мир; 1970.Beily N. [Mathematics in Biology and Medicine]. M.: Mir; 1970.Будченко А.А., Илюхин В.И., Викторов Д.В. Сравнительный анализ электрофореграмм суммарных клеточных белков патогенных буркхольдерий. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2005; 2:24-8.Budchenko A.A., Ilyukhin V.I., Viktorov D.V. [Comparative analysis of electrophoregrammes of bulk cell proteins in pathogenic Burkholderia]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2005; 2:24–8.Домарадский И.В. Проблемы перекрестного иммунитета. М.: Медицина; 1973.Domaradsky I.V. [Problems of Cross-Protective Immunity]. M.: Meditsina; 1973.Илюхин В.И., Сенина Т.В., Плеханова Н.Г., Антонов В.А., Меринова Л.К., Сеимова И.К. Burkholderia thailandensis: биологические свойства, идентификация и таксономическая позиция. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2002; 1:7-11.Ilyukhin V.I., Senina T.V., Plekhanova N.G., Antonov V.A., Merinova L.K., Seimova I.K. [Burkholderia thailandensis: biological properties, identification and taxonomic position]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2002; 1:7–11.Кулаков Ю.К., Желудков М.М., Толмачева Т.А. Использование молекулярно-биологических методов идентификации бруцелл в сравнительном анализе штаммов, выделенных от больных собак. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2003; 1:6-14.Kulakov Yu.K., Zheludkov M.M., Tolvacheva T.A. [Application of molecular-genetic methods for Brucella identification in comparative assay of the strains isolated from infected dogs]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2003; 1:6–14.Anuntagool N., Rugdech P., Sirisinha S. Identification of specific antigens of Pseudomonas pseudomallei and evaluation of their efficacies for diagnosis of melioidosis. J. Clin. Microbiol. 1993; 31(1):1232-6.Anuntagool N., Rugdech P., Sirisinha S. Identification of specific antigens of Pseudomonas pseudomallei and evaluation of their efficacies for diagnosis of melioidosis. J. Clin. Microbiol. 1993; 31(1):1232–6.Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the guantitation of microgram guantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976; 72:248-54.Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the guantitation of microgram guantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976; 72:248–54.Katz J., Devvald R., Nicholson J. Procedurally similar competitive immunoassay systems for the serodiagnosis of Babesia eaui, Babesia eaballi, Trypanosoma euuiperdum and Burkhohleria mallei infection in horses. J. Vet. Diagn. Invest. 2000; 12:46-50.Katz J., Devvald R., Nicholson J. Procedurally similar competitive immunoassay systems for the serodiagnosis of Babesia eaui, Babesia eaballi, Trypanosoma euuiperdum and Burkhohleria mallei infection in horses. J. Vet. Diagn. Invest. 2000; 12:46–50.Laemmli U.K. Clevage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227: 680-5.Laemmli U.K. Clevage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227: 680–5.Pal V., Kumar S., Malik P., Rai G.P. Evaluation of Recombinant Proteins of Burkholderia mallei for Serodiagnosis of Glanders. Clin. Vaccine Immunol. 2012; 19:1193-8.Pal V., Kumar S., Malik P., Rai G.P. Evaluation of Recombinant Proteins of Burkholderia mallei for Serodiagnosis of Glanders Clin. Vaccine Immunol. 2012; 19:1193–8.Sermswan R.W., Wongratanacheewin S., Anuntagool N. Comparison of the polymerase chain reaction and serologic tests for diagnosis of septicemic melioidosis. J. Trop. Med. Hyg. 2000; 63:146-9.Sermswan R.W., Wongratanacheewin S., Anuntagool N. Comparison of the polymerase chain reaction and serologic tests for diagnosis of septicemic melioidosis. J. Trop. Med. Hyg. 2000; 63:146–9.Tiyawisutsri R., Peacock S.J., Langa S., Limmathurotsakul D., Cheng A.C., Chierakul W., Chaowagul W., Day N.P., Wuthiekanun V. Antibodies from patients with Melioidosis recognize Burkholderia mallei but not Burkholderia thailandensis antigens in the indirect hemagglutination assay. J. Clin. Microbiol. 2005; 43:4872-4.Tiyawisutsri R., Peacock S.J., Langa S., Limmathurotsakul D., Cheng A.C., Chierakul W., Chaowagul W., Day N.P., Wuthiekanun V. Antibodies from patients with Melioidosis recognize Burkholderia mallei but not Burkholderia thailandensis antigens in the indirect hemagglutination assay. J. Clin. Microbiol. 2005; 43:4872–4.Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979; 76:4350-4.Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979; 76:4350–4.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.