microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2015-2-54-57microbe-227Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYРазработка амплификационных тест-систем для выявления возбудителя туляремииDevelopment of Amplification Test-Systems for Tularemia Agent DetectionОсинаН. А.OsinaN. A.rusrapi@microbe.ruСеничкинаА. М.SenichkinaA. M.rusrapi@microbe.ruБугорковаТ. В.BugorkovaT. V.rusrapi@microbe.ruЩербаковаС. А.ShcherbakovaS. A.rusrapi@microbe.ruРоссийский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation201520062015025457Copyright © Осина Н.А., Сеничкина А.М., Бугоркова Т.В., Щербакова С.А., 20152015Осина Н.А., Сеничкина А.М., Бугоркова Т.В., Щербакова С.А.Osina N.A., Senichkina A.M., Bugorkova T.V., Shcherbakova S.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/227

Разработан способ обнаружения ДНК туляремийного микроба методом ПЦР с электрофоретическим и гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов. В качестве ДНК-матрицы выбраны гены iglBC, которые являются видоспецифичными для возбудителя туляремии. На основе полученных результатов созданы препараты для выявления ДНК туляремийного микроба в биологическом материале и объектах окружающей среды методом ПЦР с учетом результатов методом электрофореза и в режиме реального времени: «Ген Francisella tularensis - РЭФ» и «Ген Francisella tularensis - РГФ» соответственно. Определена форма комплектации данных тест-систем. Чувствительность и специфичность сконструированных наборов определена при исследовании бактериальных взвесей туляремийного микроба, суспензий органов мелких млекопитающих, клещей, блох, комаров, проб почвы, воды открытых водоемов, мокроты и крови человека, искусственно контаминированных возбудителем туляремии. Установлена высокая чувствительность - 1·103 м.к./мл и специфичность - 100 % разработанных тест-систем вне зависимости от вида исследуемого материала.

Developed is the method for tularemia microbe DNA detection using PCR with electrophoretic and hybridization-fluorescent registration of results. iglBC genes have been chosen as DNA-matrixes, being species-specific ones for tularemia agent. Based on the results obtained constructed have been preparations for tularemia microbe DNA detection in biological material and environmental samples applying PCR with electrophoretic registration of results and real-time PCR: “Gene Francisella tularensis - REP” and “Gene Francisella tularensis RHF”, respectively. Identified are the package contents to be included into the test-systems. Sensitivity and specificity of the designed panels are validated through investigations of tularemia agent bacterial emulsions and suspensions from small mammals’ organs, from ticks, fleas and mosquitoes, as well as through studies of soil and surface water samples, sputum and human blood probes, experimentally contaminated with tularemia agent. Test-systems demonstrate high sensitivity (1·103 microbe cells/ml) and specificity (100 %), irrespective of the type of test material.

Francisella tularensisДНКПЦР в режиме реального временидетекциянаборы реагентовFrancisella tularensisDNAreal-time PCRdetectionreagent panelsReferencesВоробьев А.А., Боев Б.В., Бондаренко В.М., Гинзбург А.Л. Проблема биотерроризма в современных условиях. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002; 3:3-12.Vorob’ev A.A., Boev B.V., Bondarenko V.M., Ginzburg A.L. [Bioterrorism issue under current conditions]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2002; 3:3–12.Emanuel P.A., Bell R., Dang J.L., McClanahan R., David J.C., Burgess R.J., Thompson J., Collins L., Hadfield T. Detection of Francisella tularensis within infected mouse tissues by using a hand-held PCR thermocycler. J. Clin. Microbiol. 2003; 41(2):689-93.Emanuel P.A., Bell R., Dang J.L., McClanahan R., David J.C., Burgess R.J., Thompson J., Collins L., Hadfield T. Detection of Francisella tularensis within infected mouse tissues by using a hand-held PCR thermocycler. J. Clin. Microbiol. 2003; 41(2):689–93.Johansson A., Berglund L., Eriksson U., Goransson I., Wollin R., Forsman M., Tarnvik A., Sjostedt A. Comparative analysis of PCR versus culture for diagnosis of ulceroglandular tularemia. J. Clin. Microbiol. 2000; 38(1):22-6.Johansson A., Berglund L., Eriksson U., Goransson I., Wollin R., Forsman M., Tarnvik A., Sjostedt A. Comparative analysis of PCR versus culture for diagnosis of ulceroglandular tularemia. J. Clin. Microbiol. 2000; 38(1):22–6.Kugeler K.J. Discrimination between Francisella tularensis and Francisella-like endosymbionts when screening ticks by PCR. Appl. Environ. Microbiol. 2005; 7(11):7594-7.Kugeler K.J. Discrimination between Francisella tularensis and Francisella-like endosymbionts when screening ticks by PCR. Appl. Environ. Microbiol. 2005; 7(11):7594–7.Long G.W., Oprandy J.J., Narayanan R.B., Fortier A.H., Porter K.R., Nacy C.A. Detection of Francisella tularensis in blood by polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol. 1993; 31(1):152-4.Long G.W., Oprandy J.J., Narayanan R.B., Fortier A.H., Porter K.R., Nacy C.A. Detection of Francisella tularensis in blood by polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol. 1993; 31(1):152–4.Sjostedt A., Eriksson U., Berglund L., Tarnvik A. Detection of Francisella tularensis in ulcers of patients with tularemia by PCR. J. Clin. Microbiol. 1997; 35(5):1045-8.Sjostedt A., Eriksson U., Berglund L., Tarnvik A. Detection of Francisella tularensis in ulcers of patients with tularemia by PCR. J. Clin. Microbiol. 1997; 35(5):1045–8.Versage J.L., Severin D.D., Chu M.C., Petersen J.H. Development of a multitarget real-time TaqMan PCR assay for enhanced detection of Francisella tularensis in complex. J. Clin. Microbiol. 2003; 41:5492-9.Versage J.L., Severin D.D., Chu M.C., Petersen J.H. Development of a multitarget real-time TaqMan PCR assay for enhanced detection of Francisella tularensis in complex. J. Clin. Microbiol. 2003; 41:5492–9.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.