microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2015-4-96-99microbe-274Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYРазработка алгоритма идентификации культур возбудителя бруцеллеза методом MALDI-TOF масс-спектрометрииDevelopment of Algorithm for Identification of Brucellosis Agent Cultures Using MALDI-TOF Mass-SpectrometryУльшинаД. В.Ul’ShinaD. V.snipchi@mail.stv.ruКовалевД. А.KovalevD. A.snipchi@mail.stv.ruБобрышеваО. В.BobryshevaO. V.snipchi@mail.stv.ruЛямкинГ. И.LyamkinG. I.snipchi@mail.stv.ruХудолеевА. А.KhudoleevA. A.snipchi@mail.stv.ruСирицаЮ. В.SiritsaYu. V.snipchi@mail.stv.ruКуличенкоА. Н.KulichenkoA. N.snipchi@mail.stv.ruСтавропольский научно-исследовательский противочумный институтРоссияStavropol Research Anti-Plague InstituteRussian Federation201520122015049699Copyright © Ульшина Д.В., Ковалев Д.А., Бобрышева О.В., Лямкин Г.И., Худолеев А.А., Сирица Ю.В., Куличенко А.Н., 20152015Ульшина Д.В., Ковалев Д.А., Бобрышева О.В., Лямкин Г.И., Худолеев А.А., Сирица Ю.В., Куличенко А.Н.Ul’Shina D.V., Kovalev D.A., Bobrysheva O.V., Lyamkin G.I., Khudoleev A.A., Siritsa Y.V., Kulichenko A.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/274

В работе приведены результаты прямого белкового профилирования коллекции штаммов бруцелл с помощью времяпролетной масс-спектрометрии с матричной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS). Стандартизована методика обеззараживания культур возбудителя бруцеллеза и последующего анализа при использовании MALDI-TOF MS. Получены 59 репрезентативных белковых профилей представителей шести основных видов бруцелл ( B. melitensis , B. abortus , B. suis, B. canis, B. ovis, B. neotomae ), которые включены в электронную базу данных масс-спектров в среде программы Biotyper v 3.0 (Bruker Daltonics, Германия). При анализе масс-спектров исследованных штаммов бруцелл выявлены 17 родоспецифичных фрагментов в диапазоне масс 2000-20000 Да, совокупность которых в MALDI-TOF масс-спектрах может использоваться при идентификации Brucella spp. В работе также описаны фрагменты, специфичные для отдельных видов и штаммов бруцелл, представляющие интерес в качестве маркеров для внутривидовой дифференциации возбудителя. На основании полученных данных разработан стандартизированный алгоритм идентификации и дифференциации культур возбудителя бруцеллеза методом MALDI-TOF масс-спектрометрии.

Given are the results of direct protein profiling of brucella strain collection using matrix laser desorption/ionization time-of-flight mass-spectrometry (MALDI-TOF MS). Standardized is the method for brucellosis agent culture disinfection and subsequent assessment. Obtained are 59 representative protein profiles of six major species ( B. melitensis, B. abortus, B. canis, B. ovis, B. neotomae ), which are included into electronic database of mass-spectra, integrated in Biotyper v 3.0 software (Bruker Daltonics, Germany). Analysis of mass-spectra of brucella strains under investigation revealed 17 genus-specific fragments within the mass range of 2000-20000 Da, the combination of which can be used for Brucella spp . identification. In addition, described are the fragments, specific for certain brucella species and strains, promising as markers for intraspecific differentiation. Based on the data received developed is a standardized algorithm of identification and differentiation of brucellosis agent cultures applying MALDI-TOF mass spectrometry.

масс-спектрометриябелковое профилированиевозбудитель бруцеллезаmass-spectrometryprotein profilingbrucellosis agentReferencesМарри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. М.: Мир; 1993. Т. 2. 415 с.Marry R., Grenner D., Meyes P., Roduell V. [Human Biochemistry]. M.: “Mir”; 1993. Vol. 2. 415 p.Wilkins C.L., Lay J.O. Identification of microorganisms by mass spectrometry. Wiley-Blackwell; 2006. 376 p.Wilkins C.L., Lay J.O. Identification of microorganisms by mass spectrometry. Wiley-Blackwell; 2006. 376 p.Ferreira L., Vega S., Sanchez-Juanes F., Gonzalez M., Herrero A., Muñiz M.C., Gonzalez-Buitrago J.M., Munoz J.L. Identifying bacteria using a matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometer. Comparison with routine methods used in clinical microbiology laboratories. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2010; 28:492- 7.Ferreira L., Vega S., Sanchez-Juanes F., Gonzalez M., Herrero A., Muñiz M.C., Gonzalez-Buitrago J.M., Munoz J.L. Identifying bacteria using a matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometer. Comparison with routine methods used in clinical microbiology laboratories. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2010; 28:492– 7.Lista F., Reubsaet F., De Santis R., Parchen R., de Jong A., Kieboom J., van der Laaken A., Voskamp-Visser I., Fillo S., Jansen H-J., van der Plas J., Paauw A. Reliable identification at the species level of Brucella isolates with MALDI-TOF-MS. BMC Microbiology. 2011; 11:267. DOI: 10.1186/1471-2180-11-267.Lista F., Reubsaet F., De Santis R., Parchen R., de Jong A., Kieboom J., van der Laaken A., Voskamp-Visser I., Fillo S., Jansen H-J., van der Plas J., Paauw A. Reliable identification at the species level of Brucella isolates with MALDI-TOF-MS. BMC Microbiology. 2011; 11:267. DOI: 10.1186/1471-2180-11-267.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.