microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2016-2-102-106microbe-316Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯBIOTECHNOLOGY, IMMUNOLOGYРазработка реагента для оценки начальной стадии иммунного ответа на живую чумную вакцинуDevelopment of a Reagent for Evaluation of Incipient Immune Response to the Live Plague VaccineДерябинП. Н.DeryabinP. N.pderyabin@gmail.comКаральникБ. В.Karal’NikB. V.noemail@neicon.ruДенисоваТ. Г.DenisovaT. G.noemail@neicon.ruПономареваТ. С.PonomarevaT. S.noemail@neicon.ruАтшабарБ. Б.AtshabarB. B.noemail@neicon.ruЖунусоваГ. Б.ZhunusovaG. B.noemail@neicon.ruТугамбаевТ. И.TugambaevT. I.noemail@neicon.ruТуружановаА. А.TuruzhanovaA. A.noemail@neicon.ruЗакарянС. Б.ZakaryanS. B.noemail@neicon.ruАлымкуловаЗ. Т.AlymkulovaZ. T.noemail@neicon.ruКазахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций имени М.АйкимбаеваКазахстанM.Aikimbaev Kazakh Scientific Center of Quarantine and Zoonotic InfectionsKazakhstanНаучный центр гигиены и эпидемиологии имени Х.ЖуматоваКазахстанKh.Zhumatov Scientific Center of Hygiene and EpidemiologyKazakhstan20162006201602102106Copyright © Дерябин П.Н., Каральник Б.В., Денисова Т.Г., Пономарева Т.С., Атшабар Б.Б., Жунусова Г.Б., Тугамбаев Т.И., Туружанова А.А., Закарян С.Б., Алымкулова З.Т., 20162016Дерябин П.Н., Каральник Б.В., Денисова Т.Г., Пономарева Т.С., Атшабар Б.Б., Жунусова Г.Б., Тугамбаев Т.И., Туружанова А.А., Закарян С.Б., Алымкулова З.Т.Deryabin P.N., Karal’Nik B.V., Denisova T.G., Ponomareva T.S., Atshabar B.B., Zhunusova G.B., Tugambaev T.I., Turuzhanova A.A., Zakaryan S.B., Alymkulova Z.T.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/316

Цель работы. Разработка реагента для выявления лимфоцитов с рецепторами (ЛфР) к F1 антигену Yersinia pestis . Материалы и методы. В работе использована живая чумная вакцина на основе штамма Yersinia pestis EV линии НИИЭГ, инактивированные формалином взвеси микроорганизмов - Y. pestis , 3123, Y. enterocolitica серовара О9 Н-383, Y. pseudotuberculosis серовара O1 2841; капсульный антиген Y. pestis F1, полученный по методу Baker; липополисахарид Y. pestis К1, фиксированные ацетальдегидом эритроциты быка. Сенсибилизацию эритроцитов быка F1проводили при помощи риванола. Лимфоциты из крови выделяли в градиенте плотности фиколл-верографин 1.077. ЛфР определяли методом адгезии реагента на выделенных лимфоцитах. В контроле использовали эритроциты, не нагруженные F1. После экспозиции выполняли по 7 определений ЛфР специфичности F1 и лимфоцитов, связавших контрольный реагент. В работе использовано 8 кроликов, иммунизированных живой вакциной EV, и 2 кролика, иммунизированных инактивированной вакциной EV. Обследовано 5 людей, иммунизированных вакциной EV. Результаты и выводы. Определена оптимальная сенсибилизирующая доза антигена F1 (250 мкг/мл). В опытах ингибиции гомологичным и гетерологичными антигенами показана специфичность выявления лимфоцитов с рецепторами к F1. Лфр к F1 обнаружены в периферической крови всех кроликов и людей, иммунизированных вакциной EV. У кроликов ЛфР выявлены со 2-х по 35-е сутки, у людей - со 2-х по 14-е сутки после вакцинации. Показано, что при повторной вакцинации людей ЛфР появлялись и исчезали раньше, чем при первичной вакцинации.

Objective of the study is to develop a reagent for the detection of lymphocytes with Yersinia pestis F1 antigen receptors. Materials and methods. Utilized have been: live plague vaccine based on the strain of Yersinia pestis EV NIIEG, formalin killed suspensions of microorganisms - Y. pestis , 3123, Y. enterocolitica O9 H-383 serovar, Y. pseudotuberculosis O1 2841 serovar; acetaldehyde-immobilized capsular antigen of Y. pestis F1 (obtained applying Baker methodology), lipopolysaccharide of Y. pestis K1, and bovine erythrocytes. Bovine erythrocyte F1 sensibilization has been performed using rivanol. Lymphocytes from blood have been isolated in density gradient ficoll-verografin 1.077. Lymphocytes with Yersinia pestis F1 antigen receptors have been detected by means of reagent adhesion onto the isolated lymphocytes. F1-free erythrocytes serve as controls. After the exposition, 7 evaluations of specificity to F1 and the lymphocytes, binding control reagent, have been carried out. Deployed have been 8 rabbits, immunized with live vaccine EV, and 2 rabbits, immunized with inactivated vaccine EV. Examined have been EV-vaccinated 5 persons. Results and conclusions. Identified is optimum sensibilizing dose of F1 antigen (250 µg/ml). Specificity of lymphocytes with receptors to F1 is demonstrated in inhibition experiments applying homologous and heterogeneous antigens. Lymphocytes with receptors to F1 (LRs) have been detected in peripheral blood of all rabbits and humans, immunized with vaccine EV. LRs have been registered since day 2 till day 35 in the rabbits, and in humans - since day 2 till day 14 after vaccination. It is shown that in case of revaccination of humans, LRs emerge and disappear earlier, than in case of primary immunization.

живая чумная вакцина EVлимфоциты с рецепторами к антигену F1вакцинация людей и кроликовlive plague vaccine EVlymphocytes with receptors to F1 antigensimmunization of humans and rabbitsReferencesКаральник Б.В., Денисова Т.Г. Иммуномодуляция как путь изучения иммунорегуляторных функций антигенсвязывающих лимфоцитов. Аллергол. и иммунол. 2011; 12(1):54-5.Karal’nik B.V., Denisova T.G. [Immune-modulation as a means to investigate immune-regulatory functions of antigen-binding lymphocytes]. Allergol. Immunol. 2011; 12(1):54–5.Каральник Б.В., Дерябин П.Н., Денисова Т.Г., Жунусова Г.Б., Березин В.Е. Антигенсвязывающие лимфоциты в динамике иммунного ответа на бактериальные, вирусные и аутоантигены. Известия Министерства образования и науки Республики Казахстан, Национальной Академии наук Республики Казахстан. Сер. биологическая и медицинская. 2001; 5:37-43.Karal’nik B.V., Deryabin P.N., Denisova T.G., Zhunusova G.B., Berezin V.E. [Antigen-binding lymphocytes in the dynamics of immune response to bacterial, viral and auto-immune antigens]. Bulletin of the Ministry of Education and Science of the Republic of Kazakhstan, National Academy of Sciences of the Republic of Kazakhstan. Biological and medical Series. 2001; 5:37–43.Каральник Б.В., Лещинская Л.Ц. Способ определения е-розеткообразующих клеток. А.с. 862919 СССР, опубл. 15.09.1981, Бюл. 34. 30 с.Karal’nik B.V., Leshchinskaya L.Ts. [Method of e-rosette forming cells detection]. A.c. 862919 USSR, 15.09.1981. 30 p.Коробкова Е.И. Живая противочумная вакцина. М.: Медгиз; 1956. 207 с.Korobkova E.I. [Live Plague Vaccine]. M.: Medgiz; 1956. 207 p.Кутырев В.В., Девдариани З.Л., Саяпина Л.В. Современное состояние научных исследований в области вакцинопрофилактики особо опасных бактериальных инфекций. Пробл. особо опасных инф. 2006; 2(92):18-24.Kutyrev V.V., Devdariani Z.L., Sayapina L.V. [Present status of the researches in the sphere of vaccine prophylaxis of particularly dangerous bacterial infections]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2006; 2(92):18–24.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Кутырев В.В. Современные тенденции в конструировании рекомбинантных вакцин для специфической профилактики чумы. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2015; 3:116-26.Mikshis N.I., Kudryavtseva O.M., Kutyrev V.V. [Current trends in development of recombinant vaccines for specific prophylaxis of plague]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2015; 3:116–26.Шамардин В.А., Каральник Б.В. Сенсибилизация эритроцитов иммуноглобулинами. Методические рекомендации Алма-Ата; 1981. 12 с.Shamardin V.A., Karal’nik B.V. [Sensibilization of erythrocytes with the help of immunoglobulins]. Methodological recommendations. Alma-Ata; 1981. 12 p.Baker E.E., Sommer H., Foster L.E., Meyer E., Meyer K.F. Studies on immunization against plague. The isolation and characterization of the soluble antigen of Pasteurella pestis. J. Immunol. 1952; 68(2):131-45.Baker E.E., Sommer H., Foster L.E., Meyer E., Meyer K.F. Studies on immunization against plague. The isolation and characterization of the soluble antigen of Pasteurella pestis. J. Immunol. 1952; 68(2):131–45.Feodorova V.A., Motin V.L. Plaque vaccines. In: Vaccines against bacterial biothreat pathogens. India; 2011. P. 175-233.Feodorova V.A., Motin V.L. Plague vaccines. In: Vaccines against bacterial biothreat pathogens. India; 2011. P. 175–233.Willamson E., Flick-Smith Y., LeButt C. Human immune response to a plague vaccine comprasing recombinant F1 and rV antigens. Infect. Immun. 2005; 73:3598-3608. DOI: 10.1128/IAI.73.6.3598-3608.2005.Willamson E., Flick-Smith Y., LeButt C. Human immune response to a plague vaccine comprasing recombinant F1 and rV antigens. Infect. Immun. 2005; 73:3598–3608. DOI: 10.1128/IAI.73.6.3598-3608.2005.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.