microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2016-4-79-84microbe-353Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYОпределение диагностической эффективности ПЦР с использованием наборов реагентов «Ген Francisella tularensis - РЭФ» и «Ген Francisella tularensis - РГФ» при исследовании биологического материала от животных с экспериментальной туляремиейAssessment of Diagnostic Efficiency of PCR Kits «Gen Francisella tularensis - REF» and «Gen Francisella tularensis - RGF» when Analyzing Biological Samples from Animals with Experimental TularemiaСеничкинаА. М.SenichkinaA. M.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

rusrapi@microbe.ruОсинаН. А.OsinaN. A.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

АбдрашитоваА. С.AbdrashitovaA. S.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

ГерманчукВ. Г.GermanchukV. G.

410005, Саратов, ул. Университетская, 46

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005

ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», СаратовРоссияRussian Research Anti-Plague Institute «Microbe», SaratovRussian Federation201620122016047984Copyright © Сеничкина А.М., Осина Н.А., Абдрашитова А.С., Германчук В.Г., 20162016Сеничкина А.М., Осина Н.А., Абдрашитова А.С., Германчук В.Г.Senichkina A.M., Osina N.A., Abdrashitova A.S., Germanchuk V.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/353

Цель работы. Оценка диагностической эффективности ПЦР с использованием тест-систем «Ген Francisella tularensis - РГФ» и «Ген Francisella tularensis - РЭФ» в сравнении с другими методами при исследовании материала, полученного от животных с экспериментальной туляремией. Материалы и методы. Проведено исследование проб лимфоузлов, печени, селезенки, легкого и сердца, полученных от животных с экспериментальной туляремией с различной инфекционной нагрузкой, с помощью ПЦР, ИФА, ИХА, МФА, бактериоскопии и бактериологического анализа. Результаты и выводы. Установлена высокая диагностическая эффективность метода ПЦР (98 %) с применением тест-систем «Ген Francisella tularensis - РЭФ» и «Ген Francisella tularensis - РГФ» при выявлении возбудителя туляремии в пробах биологического материала от инфицированных животных. Для других методов данный показатель составил: ИФА – 70,4 %, МФА – 72,1 %, бактериоскопии – 54 % и бактериологического анализа – 64,3 %. Продемонстрирована возможность и информативность исследования пробы легкого на наличие F. tularensis на ранних этапах развития заболевания у высоковосприимчивых животных с помощью ПЦР и бактериологического метода. 

Objective of the study is to assess diagnostic efficiency of PCR kits «Gen Francisella tularensis - REF» and «Gen Francisella tularensis - RGF», when performing analysis of biological samples from animals with experimental tularemia, as compared to other diagnostic methods. Materials and methods. Samples of lymphatic node, liver, spleen, lung and heart tissues, taken from animals with experimental tularemia with different infectious load, have been analyzed by PCR, ELISA, immune-chromatography, DFA, microscopy and culture cultivation. Results and conclusions. High diagnostic efficiency (98 %) has been determined for PCR kits «Gen Francisella tularensis - REF» and «Gen Francisella tularensis - RGF», used for detection of tularemia agent in biological samples taken from infected animals. For other diagnostic methods this index is: 70,4 % – for ELISA, 72,1 % – for DFA, 54 % – for microscopy and 64,3 % – for culture cultivation. Demonstrated has been the possibility and informational content of investigating lung samples for the presence of F. tularensis at early stages of infection in highly susceptible animals, using PCR and culture cultivation. 

диагностическая эффективностьПЦРэкспериментальная туляремияdiagnostic efficiencyPCRexperimental tularemiaReferencesБелькова С.А., Балахонов С.В. Индикация капсульного антигена чумного микроба в суспензиях органов мелких млекопитающих с применением иммунохроматографической тестсистемы. Дальневосточный журн. инф. патол. 2014; 25:96–8.Bel’kova S.A., Balakhonov S.V. [Indication of plague microbe capsular antigen in suspensions of organ tissues from small mammals, using immune-chromatographic test-system]. Dal’nevost. Zh. Infek. Patol. 2014; 24:96–8.Бугоркова С.А., Филимонова Д.Г.Оценка тяжести течения экспериментальной туляремийной инфекции по ряду морфометрических характеристик. Пробл. особо опасных инф. 2013; 2:9–53.Bugorkova S.A., Filimonova D.G. [Estimation of the severity of experimental tularemia against a number of morphometric characteristics]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2013; 2:49–53.Олсуфьев Н.Г., Дунаева Т.Н. Природная очаговость. Эпидемиология и профилактика туляремии. М.; 1970. 272 с.Olsuf’ev N.G., Dunaeva T.N. [Natural Focality. Epidemiology and Prophylaxis of Tularemia]. M.; 1970. 272 p.Осина Н.А., Сеничкина А.М., Бугоркова Т.В., Щербакова С.А. Разработка амплификационных тест-систем для выявления возбудителя туляремии. Пробл. особо опасных инф. 2015; 2:54–7.Osina N.A., Senichkina A.M., Bugorkova T.V., Shcherbakova S.A. [Development of amplification test-systems for tularemia agent detection]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2015; 2:54–7.Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности: МУ 1.3.2569 – 09.[Management of work in laboratories applying methods of ampli- fication of nucleic acids when working with samples, containing microor- ganisms of the I–IV groups of pathogenicity]. Methodological regulations 1.3.2569-09.Порядок организации и проведения лабораторной диагностики туляремии для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней: МУ 4.2.2939-11.[Procedure for organization and conducting laboratory diagnos- tics of tularemia for territorial, regional, and federal laboratory facilities]. Methodological regulations 4.2.2939-11.Сеничкина А.М., Осина Н.А., Зайцев А.А., Усольцева Н.М., Усманова С.М. Апробация новых генодиагностических препаратов при эпизоотологическом мониторинге территорий Российской Федерации на наличие возбудителя туляремии. Здоровье населения и среда обитания. 2015; 6(267):43–6.Senichkina A.M., Osina N.A., Zaitsev A.A., Usol’tseva N.M., Usmanova S.M. [Approbation of new diagnostic preparations in the process of epizootiological survey of the territories of the Russian Federation for the presence of tularemia agent]. Zdor. Naselen. Sreda Obit. 2015; 6(267):43–6.Эпидемиологический надзор за туляремией: МУ 3.1.2007-05.[Epidemiological surveillance over tularemia]. Methodological reg- ulations 3.1.2007-05.Emanuel P.A., Bell R., Dang J.L., McClanahan R., David J.C., Burgess R.J., Thompson J., Collins L., Hadfield T. Detection of Francisella tularensis within Infected Mouse Tissues by Using a Hand-Held PCR Thermocycler. J. Cln. microbiol. 2003; 41(2): 689– 93. DOI:10.1128/JCM.41.2.689-693.20013Emanuel P.A., Bell R., Dang J.L., McClanahan R., David J.C., Burgess R.J., Thompson J., Collins L., Hadfield T. Detection of Francisella tularensis within Infected Mouse Tissues by Using a Hand-Held PCR Thermocycler. J. Cln. microbiol. 2003; 41(2): 689–93. DOI:10.1128/JCM.41.2.689-693.20013Rossow H., Forbes K.M., Tarkka E., Kinnunen P.M., Hemmila H., Huitu O., Nikkari S., Henttonen H., Kipar A., Vapalahti O. Experimental Infection of Voles with Francisella tularensis Indicates Their Amplification Role in Tularemia Outbreaks. PLoS One. 2014; 9(10):1–9. DOI: 10.1371/journal.pone.0108864.Rossow H., Forbes K.M., Tarkka E., Kinnunen P.M., Hemmila H., Huitu O., Nikkari S., Henttonen H., Kipar A., Vapalahti O. Experimental Infection of Voles with Francisella tularensis Indicates Their Amplification Role in Tularemia Outbreaks. PLoS One. 2014; 9(10):1–9. DOI: 10.1371/ journal.pone.0108864.Skottman T., Piiparinen H., Hyytiainen H., Myllys V., Skurnik M., Nikkari S. Simultaneous real-time PCR detection of Bacillus anthracis, Francisella tularensis and Yersinia pestis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2007; 26(2):207–11.Skottman T., Piiparinen H., Hyytiainen H., Myllys V., Skurnik M., Nikkari S. Simultaneous real-time PCR detection of Bacillus anthracis, Francisella tularensis and Yersinia pestis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2007; 26(2):207–11.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.