microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2016-4-98-101microbe-357Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯBIOTECHNOLOGY, IMMUNOLOGYПолучение гипериммунных сывороток к термоэкстрактам из бруцелл в S- и L-формахPreparation of Hyperimmune Sera to Thermoextracts of Brucella S- and L-FormsМихайловЛ. М.МikhailovL. M.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruАндреевскаяН. М.AndreevskayaN. M.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruМихайловаВ. А.МikhailovaV. A.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruБаранниковаН. Л.BarannikovaN. L.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruТокареваЛ. Е.TokarevaL. E.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruЯстремскаяК. Ю.YastremskayaK. Yu.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruБалахоновС. В.BalakhonovS. V.

664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047

adm@chumin.irkutsk.ruФКУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока», ИркутскРоссияIrkutsk Research Anti-Plague Institute, IrkutskRussian Federation2016201220160498101Copyright © Михайлов Л.М., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Баранникова Н.Л., Токарева Л.Е., Ястремская К.Ю., Балахонов С.В., 20162016Михайлов Л.М., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Баранникова Н.Л., Токарева Л.Е., Ястремская К.Ю., Балахонов С.В.Мikhailov L.M., Andreevskaya N.M., Мikhailova V.A., Barannikova N.L., Tokareva L.E., Yastremskaya K.Y., Balakhonov S.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/357

Цель. Получение гипериммунных сывороток к термоэкстрактам из бруцелл в S- и L-формах. Материалы и методы. В работе использовали термоэкстракты, полученные из штамма Brucella abortus И-206 в S- и L-формах. В качестве животных-продуцентов сывороток использовали кроликов породы Шиншилла. Специфическую активность определяли в пробирочной реакции агглютинации с диагностикумами: корпускулярным экспериментальным из бруцелл в L-форме и коммерческим бруцеллезным цветным, специфичность – с гетерологичными штаммами: Francisella tularensis 15 НИИЭГ, Vibrio choleraе 5 (Огава), V. choleraе 35 А3 (Инаба), Yersinia enterocolitica О:9, Y. pestis EV НИИЭГ, Escherichia coli 3912/41. Содержание белка в полученном экстракте определяли по методу Лоури. Результаты и выводы. В результате проведенных исследований показана антигенная активность термоэкстрактов, разработаны схемы иммунизации, позволяющие получать высокоактивные и специфичные сыворотки, которые могут быть использованы для идентификации и дифференциации возбудителя бруцеллеза. 

Objective of the study was to prepare hyperimmune sera to Brucella S- and L-form thermo-extracts. Materials and methods. Thermo-extracts from Brucella abortus I-206 strain in S- and L-forms were used. Chinchilla rabbits were used as animals, sera producers. Specific activity was determined by test-tube agglutination with Brucella L-form corpuscular experimental and commercial Brucella colored diagnosticums, while specificity – with heterologous strains: Francisella tularensis 15 NIIEG, Vibrio choleraе 5 (Ogawa), V. choleraе 35 А3 (Inaba), Yersinia enterocolitica О:9, Y. pestis EV NIIEG, Escherichia coli 3912/41. Protein content in the obtained extract was defined using Lowry method. Results and conclusions. Consequently, the antigen activity of the generated thermo-extracts has been shown, the immunization schemes have been developed permitting to obtain highly active and specific sera that could be used for identification and differentiation of brucellosis causative agent. 

бруцеллытермоэкстрактыS- и L-формысывороткиBrucellathermo-extractS- and L-formseraReferencesМихайлов Л.М., Калиновский А.И., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Репина Л.П. Способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки против бруцелл в L-форме. Патент РФ 2242765, опубл. 20.12.2004. Бюл. 35.Mikhailov L.M., Kalinovsky A.I., Andreevskaya N.M., Mikhailova V.A., Repina L.P. [Method for the production of diagnostic agglutinating se- rum against Brucella L-form]. RF Patent No 2242765, 20.12.2004.Михайлов Л.М., Калиновский А.И., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Балахонов С.В., Шестопалов М.Ю., Татарникова О.Г., Репина Л.П., Болдина А.А., Капустин Ю.М. Антисыворотки к бруцеллам в L-форме. Бюл. ВСНЦ СО РАМН. 2004; 1(2):143–6.Mikhailov L.M., Kalinovsky A.I., Andreevskaya N.M., Mikhailova V.A., Balakhonov S.V., Shestopalov M.Yu., Tatarnikova O.G., Repina L.P., Boldina A.A., Kapustin Yu.M. [Anti-sera to Brucella L-from]. Bulletin of the East-Siberian Scientific Center, RAMS Siberian Branch. 2004; 1(2):143–6.Михайлов Л.М., Калиновский А.И., Баранникова Н.Л., Балахонов С.В., Марков Е.Ю., Николаев В.Б., Козулина К.Ю., Шестопалов М.Ю., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Татарникова О.Г., Кузнецов В.И. Способ получения антигенно- го препарата из бруцелл в L-форме. Патент РФ 2416429, опубл. 20.04.2011. Бюл. 11.Mikhailov L.M., Kalinovsky A.I., Barannikova N.L., Balakhonov S.V., Markov E.Yu., Nikolaev V.B., Kozulina K.Yu., Shestopalov M.Yu., Andreevskaya N.M., Mikhailova V.A., Tatarnikova O.G., Kuznetsov V.I. [Method for the production of antigen preparation from Brucella L-form]. RF Patent No 2416429, 20.04. 2011.Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. Изд. 2-е. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.Onishchenko G.G., Kutyrev V.V., editors. [Laboratory Diagnostics of Dangerous Infectious Diseases. Practice Guidelines]. 2nd Edition, M.: CJSC “Shiko”; 2013. 560 p.Саяпина Л.В., Комратов А.В., Храмов М.В., Торопчин М.И., Фадейкина О.В., Волкова Р.А., Русанова Д.В., Немировская Т.И., Лямкин Г.И. Аттестация отраслевого стандартного образца сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для реакции агглютинации. Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. 2014; 4(52):42–7.Sayapina L.V., Komratov A.V., Khramov M.V., Toropchin M.I., Fadeykina O.V., Volkova R.A., Rusanova D.V., Nemirovskaya T.I., Lyamkina G.I. [Certification of the departmental standard specimen of diagnostic polyvalent Brucella serum for agglutination assay]. Biopreparaty. Profilakt. Diagnost. Lechenie. 2014; 4(52):42–7.Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот. Биохимия. 1958; 23(5):656–62.Spirin A.S. [Spectrophotometric evaluation of the aggregate nucleic acid amount]. Biokhimiya. 1958; 23(5): 656–62.Хансон Р. Химический состав бактериальной клетки. В кн.: Методы общей бактериологии. Кн. 2. М.; 1984. С. 283–373.Hanson R. [Chemical composition of bacterial cell]. In: [Methods of General Bacteriology]. Vol. 2. M.; 1984. P. 283–373.Berman D.T., Kurtz R.S. Relationship of biological activi- ties to structures of Brucella abortus endotoxin and LPS. Ann. Inst. Pasteur Microbiol. 1987; 138(1):98–101.Berman D.T., Kurtz R.S. Relationship of biological activities to struc- tures of Brucella abortus endotoxin and LPS. Ann. Inst. Pasteur Microbiol. 1987; 138(1):98–101.Chenais, E. Bagge, E. Lambertz, S.T. Artursson, K. Yersinia enterocolitica serotype O:9 cultured from Swedish sheep showing serologically false-positive reactions for Brucella melitensis. Infect. Ecol. Epidemiol. 2012; 2:19027. DOI:10.3402/iee.v2i0.19027.Chenais, E. Bagge, E. Lambertz, S.T. Artursson, K. Yersinia entero- colitica serotype O:9 cultured from Swedish sheep showing serologically false-positive reactions for Brucella melitensis. Infect. Ecol. Epidemiol. 2012; 2:19027. DOI:10.3402/iee.v2i0.19027.Kubler-Kielb J., Vinogradov E. Reinvestigation of the structure of Brucella O-antigens. Carbohydr. Res. 2013; 378:144–7.Kubler-Kielb J., Vinogradov E. Reinvestigation of the structure of Brucella O-antigens. Carbohydr. Res. 2013; 378:144–7.Kubler-Kielb J., Vinogradov E. The study of the core part and non-repeating elements of the O-antigen of Brucella lipopoly saccharide. Carbohydr. Res. 2013; 366:33–7.Kubler-Kielb J., Vinogradov E. The study of the core part and non-repeating elements of the O-antigen of Brucella lipopolysaccharide. Carbohydr. Res. 2013; 366:33–7.Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951; 193(1):265–75.Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein meas- urement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951; 193(1):265–75.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.