410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
410005, Саратов, ул. Университетская, 46
46, Universitetskaya St., Saratov, 410005
Цель работы. Применение 2D-электрофореза для получения белкового спектра фракций экзопротеинов, а также идентификации и сравнения активности экспрессии биомаркеров основных факторов патогенности возбудителей чумы и холеры. Материалы и методы. 2D-гели фракций экзопротеинов получали на модели штаммов V. choleraе Inaba 569В, V. choleraе El Tor M888 Ctx+ и Ctx– , а также Y. pestis EV НИИЭГ. В качестве биомаркеров основных экзопротеинов возбудителей чумы и холеры использовали капсульный антиген F1 и холерный токсин. Результаты и выводы. При исследовании холерного токсина 2D-электрофорезом на IPG стрипах с градиентом рН 3–10 антиген разделялся на ряд белковых пятен, два из которых близки к параметрам домена А1 (МW 20,309 кДа и pI 6,51) и мономера субъединицы В (МW 11,091 кДа и pI 7,68). При сравнении белкового спектра фракций экзопротеинов штаммов V. choleraе Inaba 569В, V. choleraе El Tor M888 Ctx+ и Ctx– обнаружены пятна с аналогичными параметрами, за исключением штамма V. choleraе M888 Ctx– . При анализе 2D-гелей образцов капсульного антигена и фракций экзопротеинов штамма Y. pestis EV было отмечено, что белковые пятна, соответствующие параметрам субъединичной формы и димеру антигена, присутствуют в образце 37 °С культуры. В образце 28 °С культуры присутствует субъединица F1 в значительно меньшей концентрации. На модели токсигенного штамма V. choleraе Inaba 569В, изогенной системы штаммов V. choleraе El Tor M888 Ctx+ и Ctx– , штамма Y. pestis EV НИИЭГ показана высокая эффективность 2D-электрофореза для получения белкового спектра фракций экзопротеинов этих культур, а также идентификации и сравнения экспрессии биомаркеров основных экзопротеинов возбудителей чумы и холеры.
Objective of the study is to apply 2D-electrophoresis for imaging protein spectrum of exoprotein fractions, as well as identification and comparison of biomarker expression of the key pathogenicity factors in plague and cholera agents. Materials and methods. 2D gels of exoprotein fractions were obtained on the model of Vibrio cholerae Inaba 569B, V. cholerae El Tor M888Ctx+ and Ctx– strains, and also Y. pestis EV NIIEG strain. Capsular antigen F1 and cholera toxin were used as biomarkers of major exoproteins of plague and cholera agents. Results and conclusions. While studying cholera toxin through 2D-electrophoresis on IPG strips with pH 3–10 gradient, the antigen fell into a number of protein spots, two of which were close to A1 domain parameters (MW 20.309 kDa and pI 6.51) and B-subunit monomer (MW 11.091 kDa and pI 7.68). Comparative protein spectrum analysis of the exoprotein fractions of V. cholerae Inaba 569B, V. cholerae El Tor M888 Ctx+ and Ctx– has revealed the spots with similar parameters, excluding the strain V. cholerae M888 Ctx– . Investigation of 2D gels of capsular antigen and exoprotein fractions of Y. pestis EV strain has demonstrated that protein spots corresponding to the parameters of the subunit form and diameter of the antigen are present in 37 °C culture patterns. 28 °C culture sample contains F1 subunit in a far lesser concentrations. On the model of toxigenic V. cholerae Inaba 569B strain, isogenic system of V. cholerae El Tor M888 Ctx+ and Ctx– strains, and Y. pestis EV NIIEG strain, high efficiency of 2D-electrophoresis in protein spectrum construction for exoprotein fractions of the cultures, as well as identification and comparison of biomarker expression of major exoproteins of plague and cholera agents is established.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.