microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2017-2-67-71microbe-395Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯBIOTECHNOLOGY, IMMUNOLOGYПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДОМ-ПРОДУЦЕНТОВ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗАMANUFACTURING OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO BRUCELLOSIS AGENT ANTIGENSКуклинаГ. В.KuklinaG. V.g.kklna@yandex.ruЕлагинГ. Д.ElaginG. D.ФоменковО. О.FomenkovO. O.ПеченкинД. В.PechenkinD. V.ЕремкинА. В.EremkinA. V.КытмановА. А.KytmanovA. A.Филиал ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской ФедерацииРоссияAffiliated Branch of the Federal State Budgetary Institution «48th Central Research Institute» of the Ministry of Defense of the Russian FederationRussian Federation201720062017026771Copyright © Куклина Г.В., Елагин Г.Д., Фоменков О.О., Печенкин Д.В., Еремкин А.В., Кытманов А.А., 20172017Куклина Г.В., Елагин Г.Д., Фоменков О.О., Печенкин Д.В., Еремкин А.В., Кытманов А.А.Kuklina G.V., Elagin G.D., Fomenkov O.O., Pechenkin D.V., Eremkin A.V., Kytmanov A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/395

Цель работы. Получение гибридом-продуцентов моноклональных антител к антигенам возбудителя бруцеллеза. Материалы и методы. В работе использовали микробные культуры из Государственной коллекции микроорганизмов филиала ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (Киров); мыши линии BALB/с. Гибридизацию проводили по методике G.Kohler и C.Milstein в модификации De St.Fazekas и D.Scheidegger. Исследование специфической активности иммунных сывороток, супернатантов гибридом, асцитных жидкостей, препаратов моноклональных антител проводили методом непрямого иммуноферментного анализа. Результаты и выводы. Получены и охарактеризованы гибридомы-продуценты моноклональных антител к специфическим антигенам возбудителя бруцеллеза. Полученные гибридомы являются активными и стабильными антителопродуцентами при многократном пассировании in vitro и in vivo. Получены асцитные жидкости и приготовлены препараты бруцеллезных моноклональных антител. Проведен обоснованный выбор антител, обеспечивающих наибольшую чувствительность иммуноферментного анализа. Установлено, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами 232B6H7, 232G12F7, 233B2C5, в сочетании с бруцеллезными кроличьими иммуноглобулинами позволяют выявлять микробные клетки типовых штаммов различных видов бруцелл в концентрации от 0,25·106 до 1,0·106 м.к.·см–3 и не взаимодействуют с культурами гетерологичных микроорганизмов в концентрации 1,0·108 м.к.·см–3. Гибридомы-продуценты и препараты специфических бруцеллезных моноклональных антител планируется использовать для разработки и производства средств иммунодетекции.

Objective of study is to prepare hybridomas-producers of monoclonal antibodies to brucellosis agent antigens. Materials and methods. B. abortus, B. melitensis, B. suis strains from the State collection of microorganisms of the 48th Central Research Institute Affiliated Branch and BALB/c mice. Hybridization was performed as described by G.Kohler and C.Milstein in modification by Fazekas De St. and Scheidegger D. The study of specific activity of immune sera, hybridoma supernatants, ascites fluid, and monoclonal antibody preparations was performed using ELISA. Results and conclusions. Obtained and characterized have been hybridomas-producers of monoclonal antibodies to specific antigens of brucellosis agent. They are active and stable antibody producers in the repeated passaging both, in vitro and in vivo. Obtained have also been the ascites fluid and preparations of monoclonal antibodies of brucellosis agent. Carried out has been substantiated selection of antibodies which could provide for the most sensitive ELISA. It is established that the monoclonal antibodies produced by hybridomas 232B6H7, 232G12F7, 233B2C5 in combination with brucellosis rabbit immunoglobulins allow for the identification of microbial cells of type strains of various Brucella species in concentrations ranging from 0,25·106 mc·sm–3 up to 1,0·106 mc·sm–3 and gave negative results with cultures of heterologous microorganisms in the contents of 1,0·108 mc·sm–3. Hybridomas-producers of monoclonal antibodies are planned to be used for the construction and manufacturing of immunodetection test-systems.

бруцеллезмоноклональные антителаиммуноферментный анализbrucellosismonoclonal antibodiesELISAReferencesЖелудков М.М., Цирельсон Л.Е., Горшенко В.В., Кулаков Ю.К. Эпидемические проявления современного бруцеллеза в Российской Федерации. Эпидемиол. и вакцинопрофилакт. 2009; 10:38–40.Zheludkov M.M., Tsirel’son L.E., Gorshenko V.V., KulakovYu.K. [Epidemic manifestations of contemporary brucellosis in the Russian Federation]. Epidemiol. i Vaktsinoprofilakt. 2009; 10:38–40.Лямкин Г.И., Манин Е.А., Головнева С.И., Тихенко Н.И., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая ситуация по бруцеллезу в Российской Федерации в 2012 г. и прогноз на 2013 г. Пробл. особо опасных инф. 2013; 1(115):21–4.Lyamkin G.I., Manin E.A., Golovneva S.I., Tikhenko N.I., Kulichenko A.N. [Epidemiological situation on brucellosis in the Russian Federation in 2012 and the forecast for 2013]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2013; 1(115):21–4.Лямкин Г.И., Худолеев А.А., Хачатурова А.Н., Куличенко А.Н. Обзор эпидемиологической ситуации по бруцеллезу в Российской Федерации в 2014 г. и прогноз на 2015 г. Пробл. особо опасных инф. 2015; 2:22–4.Lyamkin G.I., Khudoleev A.A., Khachaturova A.N., Kulichenko A.N. [Review of epidemiological situation on brucellosis in the Russian Federation in 2014 and the forecast for 2015]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2015; 2:22–4.Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.Onishchenko G.G., Kutyrev V.V., editors. [Laboratory Diagnostics of Dangerous Infectious Diseases. Practice Guidelines]. M.: CJSC “Shiko”; 2013. 560 p.Фельдшерова А.А., Эльгорт Д.А., Коноплева М.В., Хац Ю.С., Третьяков О.Ю., Кулаков Ю.К., Толмачева Т.А., Желудков М.М., Суслов А.П. Высокочувствительная иммуноферментная тест-система на основе моноклональных антител для выявления антигенов бруцелл. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007; 1:52–7.Fel’dsherova A.A., El’gort D.A., Konopleva M.V., Hats Yu.S., Tret’yakov O.Yu., Kulakov Yu.K., Tolmacheva T.A., Zheludkov M.M., Suslov A.P. [Highly sensitive immuno-enzyme test system based on monoclonal antibodies to detect brucella antigens]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Infek. Bol. 2007; 1:52–7.Цирельсон Л.Е., Желудков М.М. Бруцеллез в России: профессиональные заболевания и трудовой прогноз. Эпидемиол. и инф. бол. 2011; 5:43–7.Tsirel’son L.E., Zheludkov M.M. [Brucellosis in Russia: occupational diseases and labor forecast]. Epidemiol. Infek. Bol. 2011; 5:43–7.Fazekas De St., Groth S., Scheidegger D. Production of monoclonal antibodies: strategy and tactics. J. Immunol. Meth. 1980; 35:1–21.Fazekas De St., Groth S., Scheidegger D. Production of monoclonal antibodies: strategy and tactics. J. Immunol. Meth. 1980; 35:1–21.Gerbier G., Garin-Bastuji B., Pouillot R. False-positive serological reactions in bovine brecellosis: evidence of the role of Yersinia enterocolitica O:9. Vet. Res. 1997; 28:375–83.Gerbier G., Garin-Bastuji B., Pouillot R. False-positive serological reactions in bovine brecellosis: evidence of the role of Yersinia enterocolitica O:9. Vet. Res. 1997; 28:375–83.Kohler G., Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975; 256(5517):495–97.Kohler G., Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975; 256(5517):495–97.Nakane P.K., Kawaoi A.J. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. Histochem. Cytochem. 1974; 22(12):1084–91.Nakane P.K., Kawaoi A.J. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. Histochem. Cytochem. 1974; 22(12):1084–91.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.