microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2017-3-45-48microbe-410Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYИЗУЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К МЕМБРАННОМУ БЕЛКУ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХОЛЕРЫ, В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕTHE STUDY OF DIAGNOSTIC POTENTIAL OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO THE MEMBRANE PROTEIN OF CHOLERA AGENT IN ENZYME-LINKED IMMUNOASSAYЕвдокимоваВ. В.EvdokimovaV. V.

117/40, M.Gor`kogo St., Rostov-on-Don, 344002

nika-evd@yandex.ruАлексееваЛ. П.AlekseevaL. P.

117/40, M.Gor`kogo St., Rostov-on-Don, 344002

ЗюзинаВ. П.ZyuzinaV. P.

117/40, M.Gor`kogo St., Rostov-on-Don, 344002

КретенчукО. Ф.KretenchukO. F.

117/40, M.Gor`kogo St., Rostov-on-Don, 344002

ЯговкинМ. Э.YagovkinM. E.

117/40, M.Gor`kogo St., Rostov-on-Don, 344002

ФКУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт»РоссияRostov-on-Don Research Anti-Plague InstituteRussian Federation201720092017034548Copyright © Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Зюзина В.П., Кретенчук О.Ф., Яговкин М.Э., 20172017Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Зюзина В.П., Кретенчук О.Ф., Яговкин М.Э.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Zyuzina V.P., Kretenchuk O.F., Yagovkin M.E.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/410

Цель – разработка пероксидазного конъюгата на основе МКА H2F6 и изучение возможности его использования для выявления tcp+ штаммов холерных вибрионов О1/О139 серогрупп в прямых методах ИФА.

Материалы и методы

Материалы и методы. В работе использовали гибридный клон H2F6, синтезирующий в культуральную среду моноклональные антитела, специфичные к белку наружной мембраны холерного вибриона.

Результаты и выводы

Результаты и выводы. На основе МКА сконструирован пероксидазный конъюгат, позволяющий выявлять tcp+ штаммы V. cholerae О1 и О139 в прямом ТИФА и дот-ИФА. Испытания препарата на наборе штаммов холерных вибрионов и гетерологичных микроорганизмов показали его специфичность в отношении V. cholerae О1 и О139. Моноклональный пероксидазный конъюгат H2F6 может быть использован для детекции в иммуноферментных методах эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов О1/О139 серогрупп. 

Objective of the study was to develop peroxidase conjugate on the base of monoclonal antibodies (MCA) H2F6 and to study the possibility of its application for the detection of tcp+ Vibrio cholerae O1/O139 strains using direct ELISA methods.

Materials and methods

Materials and methods. Utilized for the investigation was the hybrid H2F6 clone, which synthesized monoclonal antibodies specific to the outer membrane protein of cholera vibrio into culture medium.

Results and conclusions

Results and conclusions. Peroxidase conjugate was designed on the base of MCA which allows for the detection of tcp+ V. cholerae O1 and O139 strains in direct solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay and dot-ELISA. The preparation was tested on a group of strains of V. cholerae and heterologous microorganisms and showed specificity in relation to V. cholerae O1 and O139. Monoclonal peroxidase conjugate H2F6 can be used for the detection of epidemically significant V. cholerae O1/O139 strains by means of immune-enzyme methods. 

холерный вибрионмоноклональные антителаиммуноблоттингтвердофазный иммуноферментный анализдот-иммуноанализпероксидазный конъюгатcholera vibriomonoclonal antibodiesimmunoblottingsolid-phase enzyme-linked immunosorbent assaydot-immunoassayperoxidase conjugateReferencesАлексеева Л.П., Козлова Г.А., Маркина О.В., Кретенчук О.Ф., Яговкин М.Э., Бурша О.С. Использование моноклональных пероксидазных конъюгатов для идентификации холерных вибрионов О1, О139 в реакции дот-иммуноанализа. Клин. лаб. диагн. 2013; 3:26–9.Alekseeva L.P., Kozlova G.A., Markina O.V., Kretenchuk O.F., Yagovkin M.E., Bursha O.S. [Usage of monoclonal peroxidase conjugates for identification of cholera vibrios O1, O139 in dot-immunoassay]. Klin. Lab. Diagnost. 2013; 3: 26–9.Алексеева Л.П., Телесманич Н.Р., Ломов Ю.М., Храмов М.В., Кругликов В.Д., Агафонова В.В., Фатеева О.Ф., Чеботарев Д.А., Керманов А.В. Сравнительная оценка методов дот- иммуноанализа и иммунохроматографии при выявлении холерных вибрионов О1 серогруппы. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2010; 6:88–93.Alekseeva L.P., Telesmanich N. R., Lomov Yu.M., Khramov M.V., Kruglikov V.D., Agafonova V.V., Fateeva O.F., Chebotarev D.A., Kermanov A.V. [Comparative evaluation of dot-immunoassay and immune-chromatographic methods in case of cholera vibrio O1 detection]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2010; 6: 88–93.Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз; 1962. 180 с.Ashmarin I.P., Vorob’ev A.A. [Statistical Methods in Microbiological Investigations]. Leningrad.: “Medgiz”; 1962; 180 p.Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Кретенчук О.Ф., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Бурша О.С. Иммунофер­ ментные методы анализа в диагностике холеры. Клин. лаб. диагн. 2016; 5:303–7. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-5-303-307.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Kretenchuk O.F., Kruglikov V.D., Arkhangel’skaya I.V., Bursha O.S. [Immune-enzyme analysis in cholera diagnostics]. Klin. Lab. Diagnost. 2016; 5:303–7. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-5-303-307.Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Кретенчук О.Ф., Кругликов В.Д., Архангельская И.В. Моноклональные антитела к термостабильным поверхностным антигенам холерных вибрионов О1- и О139-серогруппы. Эпидемиол. и инф. бол. 2015; 3:51–7.Evdokimova V.V., Alekseeva L.P., Kretenchuk O.F., Kruglikov V.D., Arkhangel’skaya I.V. [Monoclonal antibodies to thermo-resistant surface antigens of cholera vibrio O1 and O139]. Epidemiol. Infek. Bol. 2015; 3:51–7.Кэтти Д., редактор. Антитела. Методы. Т. 1. М.: Мир; 1991. 384 с.Ketty D., editor. [Antibodies. Methods]. Vol. 1. M.: “Mir”; 1991. 384 p.Кэтти Д., редактор. Антитела. Методы. Т. 2. М.: Мир; 1991. 382 с.Ketty D., editor. [Antibodies. Methods]. Vol. 2. M.: “Mir”; 1991. 382 p.Монахова Е.В. Стратегия вирулентности холерных вибрионов и пути ее реализации. Пробл. особо опасных инф. 2013; 4:60–8.Monakhova E.V. [Cholera vibrio virulence strategy and ways of its realization (Scientific review)]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2013; 4:60–8.Онищенко Г.Г., Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С., Водяницкая С.Ю., Прометной В.И., Монахова Е.В., Водопьянов С.О., Телесманич Н.Р., Дудина Н.А. Холера, обусловленная Vibrio cholerae O1 ctxAB– tcpA+. Журн. микробиол., эпидемол. и иммунобиол. 2007; 1:23–9.Onishchenko G.G., Lomov Yu.M., Moskvitina E.A., Podosinnikova L.S., Vodyanitskaya S.Yu., Prometnoy V.I., Monakhova E.V., Vodop’yanov S.O., Telesmanich N.R., Dudina N.A. [Cholera caused by Vibrio cholerae O1 ctxAB- tcpA+]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2007; 1:23–9.Титова С.В., Москвитина Э.А., Кругликов В.Д., Самородова А.В., Тюленева Е.Г., Mонахова Е.В., Писанов Р.В., Водопьянов А.С., Архангельская И.В., Иванова С.М., Ковалева Т.В., Водопьянов С.О. Холера: оценка эпидемиологической обстановки в мире и России в 2006–2015 гг. Прогноз на 2016 г. Пробл. особо опасных инф. 2016; 1:20–7. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-1-20-27.Titova S.V., Moskvitina E.A., Kruglikov V.D., Samorodova A.V., Tyuleneva E.G., Monakhova E.V., Pisanov R.V., Vodop’yanov A.S., Arkhangel’skaya I.V., Ivanova S.M., Kovaleva T.V., Vodop’yanov S.O. [Cholera: analysis of epidemiological situation across the world and in Russia within a period of 2006–2015]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2016; 1:20–7. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-1-20-27.Chen W., Lu J.Zh.G., Yuan Z., Wu Q., Li J., Xu G., He A., Zheng Ji., Zhang Ju. Development of an immunochromatographic lateral flow device for rapid diagnosis of Vibrio cholerae O1 serotype Ogawa. Clinical Biochemistry. 2014; 47(6):448–54. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2013.12.022.Chen W., Lu J.Zh.G., Yuan Z., Wu Q., Li J., Xu G., He A., Zheng Ji., Zhang Ju. Development of an immunochromatographic lateral flow device for rapid diagnosis of Vibrio cholerae O1 serotype Ogawa. Clinical Biochemistry. 2014; 47(6):448–54. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2013.12.022.Jyoung J.Y., Hong S., Lee W., Choi J.W. Immunosensor for the detection of Vibrio cholerae O1 using surface plasmon reso- nance. Siosens. Bioelectron. 2006; 21(12):2315–9. DOI: 10.1016/j.bios.2005.10.015.Jyoung J.Y., Hong S., Lee W., Choi J.W. Immunosensor for the detection of Vibrio cholerae O1 using surface plasmon resonance. Siosens. Bioelectron. 2006; 21(12):2315–9. DOI: 10.1016/j.bios.2005.10.015.Krebs S.J., Taylor R.K. Protection and attachment of Vibrio cholerae mediated by the toxin-coregulated pilus in the infant mouse model. J. Bacteriol. 2011; 193(19):5260–70. DOI: 10.1128/JB.00378-11.Krebs S.J., Taylor R.K. Protection and attachment of Vibrio chole­ rae mediated by the toxin-coregulated pilus in the infant mouse model. J. Bacteriol. 2011; 193(19):5260–70. DOI: 10.1128/JB.00378-11.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head ofbacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680–5.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head ofbacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680–5.Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody a new method of conjugation. J. Histochem Cytochem. 1974; 22:1084–91.Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody a new method of conjugation. J. Histochem Cytochem. 1974; 22:1084–91.Pengsuk C., Longyant S., Rukpratanporn S., Chaivisut­ hangkura P., Sridulyakul P., Sithigorngul P. Differentiation among the Vibrio cholerae serotypes O1, O139, O141 and non-O1, non- O139, non-O141 using specific monoclonal antibodies with dot blotting. J. Microbiol Methods. 2011; 87(2):224–33. DOI: 10.1016/j.mimet.2011.07.022.Pengsuk C., Longyant S., Rukpratanporn S., Chaivisuthangkura P., Sridulyakul P., Sithigorngul P. Differentiation among the Vibrio cholerae serotypes O1, O139, O141 and non-O1, non-O139, non-O141 using specific monoclonal antibodies with dot blotting. J. Microbiol Methods. 2011; 87(2):224–33. DOI: 10.1016/j.mimet.2011.07.022.Pengsuk Ch., Chaivisuthangkura P., Longyant S., Sithi­ gorngul P. Development and evaluation of a highly sensitive immunochromatographic strip test using gold nanoparticle for direct detection of Vibrio cholerae O139 in seafood samples. Biosen. Bioelectron. 2013; 42:229–35. DOI: 10.1016/j.bios.2012.10.011.Pengsuk Ch., Chaivisuthangkura P., Longyant S., Sithigorngul P. Development and evaluation of a highly sensitive immunochromatographic strip test using gold nanoparticle for direct detection of Vibrio cholerae O139 in seafood samples. Biosen. Bioelectron. 2013; 42:229–35. DOI: 10.1016/j.bios.2012.10.011.Thattiyaphong A., Okada K., Khangrang S., Nispa W., Sawanpanyalert P., Honda T. Development of a 5-minute rapid test for detecting Vibrio cholerae O139. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2013; 44(3):448–55.Thattiyaphong A., Okada K., Khangrang S., Nispa W., Sawanpanyalert P., Honda T. Development of a 5-minute rapid test for detecting Vibrio cholerae O139. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2013; 44(3):448–55.Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding – Current status and outlook. J. Immunol. Methods. 1984; 72:313–40.Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding – Current status and outlook. J. Immunol. Methods. 1984; 72:313–40.Tuteja U., Kumar S., Shukla J., Kingston J., Batra H.V. Simultaneous direct detection of toxigenic and non-toxigenic Vibrio cholerae from rectal swabs and environmental samples by sandwich ELISA. J. Med. Microbiol. 2007; 56(Pt 10):1340–5. DOI: 10.1099/jmm.0.47166-0.Tuteja U., Kumar S., Shukla J., Kingston J., Batra H.V. Simultaneous direct detection of toxigenic and non-toxigenic Vibrio cholerae from rectal swabs and environmental samples by sandwich ELISA. J. Med. Microbiol. 2007; 56(Pt 10):1340–5. DOI: 10.1099/jmm.0.47166-0.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.