400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7
7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131
Цель исследования заключалась в моделировании взаимодействия Burkholderia pseudomallei с Tetrahymena pyriformis in vitro и изучении изменений в популяционном составе простейших при совместном культивировании с микроорганизмом.
Материалы и методы. В работе использовали штаммы B. pseudomallei 110, С141, 57576, 107, отличающиеся по вирулентности для мышей линии BALB/c. Аксеническую культуру T. pyriformis выращивали в LB-бульоне при температуре 28 °С. Буркхольдерии соединяли с тетрахименами в соотношении 100:1. Сокультуры инкубировали при температуре 28 °С в LB на протяжении срока наблюдения. Образцы сокультур просматривали при световой микроскопии, оценивая изменения в популяционном составе тетрахимен по количественному соотношению трофозоитов и цист. Для определения динамики размножения культур B. pseudomallei, ассоциированных с T. pyriformis, из сокультур ежедневно производили высев на плотную питательную среду для подсчета выросших колоний.
Результаты и выводы. В ассоциации с тетрахименами B. pseudomallei поглощается клетками простейших, размножается в них и индуцирует инцистирующую активность тетрахимен. При этом вирулентный штамм B. pseudomallei 110 осуществляет переход клеток T. pyriformis в состояние цист на 2–4-е сутки и их полное разрушение на 7–8-е сутки. Авирулентный штамм B. pseudomallei 107 вызывает полное инцистирование простейших не ранее 7 суток, и значительная часть цист остается неразрушенной на 10-е сутки. Динамика роста B. pseudomallei в сокультуре с T. pyriformis характеризуется в первые сутки отчетливым снижением количества жизнеспособных клеток, которое через 24 ч возрастает и постепенно достигает показателей, близких к исходным. Кривые подъема концентрации микроорганизмов зависят от вирулентности штамма: максимальное размножение культуры B. pseudomallei 110 наблюдается спустя 48 ч, тогда как для штамма B. pseudomallei 107 это время составляет не менее 7–8 сут.
Objective of the study was to model the interaction of Burkholderia pseudomallei with Tetrahymena pyriformis in vitro and investigate the changes in the population composition of the protozoa when co-cultured with a microorganism.
Materials and methods. B. pseudomallei 110, C141, 57576, 107 strains differing in virulence for BALB/c mice were used. The axenic culture of T. pyriformis was incubated with microorganisms in 100 to 1 ratio, at 28 °C, in LB. Samples of co-cultures were examined using light microscopy, by counting the number of trophozoites and cysts in the population. Dynamics of multiplication of B. pseudomallei cultures associated with T. pyriformis was determined through seeding bacteria on a dense nutrient medium to count the grown colonies.
Results and conclusions. B. pseudomallei in association with T. pyriformis is ingested by protozoan cells; it multiplies in them and stimulates protozoa encystment. Hereby virulent strain B. pseudomallei 110 induces encystment of T. pyriformis on days 2–4 and complete cell destruction within 7–8 days. Avirulent strain, B. pseudomallei 107, induces full encystment on day 7; significant part of the cysts remains intact on day10. Dynamics of B. pseudomallei growth, co-cultured with T. pyriformis is characterized on day 1 by distinct decrease in the number of viable bacterial cells and increase in it within following 24 hours. Bacteria concentration curves depend on the virulence of the strain: maximum level of B. pseudomallei 110 replication is observed after 48 hours, while that of B. pseudomallei 107 – not less than after 7–8 days.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.