microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2017-4-56-61microbe-439Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESВидовая принадлежность, численность и динамика взаимодействия акантамеб из почв Горно-Алтайского высокогорного очага чумы со штаммами Yersinia pestisSpecific Appurtenance, Numbers, and Dynamics of Interaction of Acanthamoeba from Soils of Gorno-Altai High-Mountain Plague Focus with Yersinia pestis StrainsОглодинЕ. Г.OglodinE. G.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

rusrapi@microbe.ruМорозовО. А.MorozovO. A.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

НикифоровК. А.NikiforovK. A.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

КуклеваЛ. М.KuklevaL. M.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

ШараповаН. А.SharapovaN. A.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

РождественскийЕ. Н.RozhdestvenskyE. N.

Российская Федерация, 649002, Горно-Алтайск, ул. Заводская, 2

2, Zavodskaya St., Gorno-Altaisk, 649002, Russian Federation

chuma@mail.gorny.ruБазароваГ. Х.BazarovaG. Kh.

Российская Федерация, 649002, Горно-Алтайск, ул. Заводская, 2

2, Zavodskaya St., Gorno-Altaisk, 649002, Russian Federation

ДенисовА. В.DenisovA. V.

Российская Федерация, 649002, Горно-Алтайск, ул. Заводская, 2

2, Zavodskaya St., Gorno-Altaisk, 649002, Russian Federation

СанаровП. П.SanarovP. P.

Российская Федерация, 649002, Горно-Алтайск, ул. Заводская, 2

2, Zavodskaya St., Gorno-Altaisk, 649002, Russian Federation

ТокмаковаЕ. Г.TokmakovaE. G.

Российская Федерация, 664047, Иркутск, ул. Трилиссера, 78

78, Trilissera St., Irkutsk, 664047, Russian Federation

adm@chumin.irkutsk.ruМакашоваМ. А.MakashovaM. A.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

ГерманчукВ. Г.GermanchukV. G.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

ЕрошенкоГ. А.EroshenkoG. A.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

КутыревВ. В.KutyrevV. V.

Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46.

46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation

ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian FederationАлтайская противочумная станцияРоссияAltai Plague Control StationRussian FederationИркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего ВостокаРоссияIrkutsk Research Anti-Plague Institute of Siberia and Far EastRussian Federation201720122017045661Copyright © Оглодин Е.Г., Морозов О.А., Никифоров К.А., Куклева Л.М., Шарапова Н.А., Рождественский Е.Н., Базарова Г.Х., Денисов А.В., Санаров П.П., Токмакова Е.Г., Макашова М.А., Германчук В.Г., Ерошенко Г.А., Кутырев В.В., 20172017Оглодин Е.Г., Морозов О.А., Никифоров К.А., Куклева Л.М., Шарапова Н.А., Рождественский Е.Н., Базарова Г.Х., Денисов А.В., Санаров П.П., Токмакова Е.Г., Макашова М.А., Германчук В.Г., Ерошенко Г.А., Кутырев В.В.Oglodin E.G., Morozov O.A., Nikiforov K.A., Kukleva L.M., Sharapova N.A., Rozhdestvensky E.N., Bazarova G.K., Denisov A.V., Sanarov P.P., Tokmakova E.G., Makashova M.A., Germanchuk V.G., Eroshenko G.A., Kutyrev V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/439

Цель исследования. Анализ видовой принадлежности, численности и динамики взаимодействия акантамеб из почв Горно-Алтайского высокогорного очага чумы со штаммом Yersinia pestis 367, выделенным на энзоотичной территории этого очага в 2016 г. Материалы и методы. В работе использованы почвенные амебы из Горно-Алтайского высокогорного очага и штамм Y. pestis 367 основного подвида античного биовара, выделенный в этом очаге в 2016 г. Определение систематической принадлежности выделенных амеб проводили с помощью ПЦР с родоспецифическими праймерами и секвенирования полученных ПЦР-фрагментов с дальнейшей идентификацией нуклеотидных последовательностей по базе данных GenBank. Определение локализации клеток Y. pestis в акантамебах проводили с помощью метода флуоресцирующих антител с использованием микроскопа Axio Imager Z2 (Carl Zeiss, Германия). Результаты и выводы. Впервые установлено присутствие акантамеб Acanthamoeba castellanii в почве нор серого сурка Marmota altaica в количестве до 300000 кл./г почвы в Горно-Алтайском высокогорном очаге чумы. Исследована динамика взаимодействия этих микроорганизмов и установлено сохранение возбудителя в вакуолях эндоплазматического ретикулума акантамеб в течение 14 дней. Это предполагает возможность персистенции Y. pestis в амебах рода Acanthamoeba в почвенном биоценозе Горно-Алтайского высокогорного очага чумы.

Objective of the study is to analyze the appurtenance, numbers, and dynamics of interaction of acanthamoeba from soils of GornoAltai plague focus with Yersinia pestis 367 strain, isolated in 2016 in enzootic territory of this focus. Materials and methods. Utilized were soil amoeba from Gorno-Altai high-mountain focus and the strain Y. pestis 367 of the main subspecies of antique biovar, isolated there in 2016. Determination of systematic relation of the isolated amoeba was carried out using PCR with genus specific primers and sequencing of the obtained PCR fragments followed by identification of nucleotide sequences against GenBank database. Localization of Y. pestis cells in acanthamoeba was performed using fluorescent antibody technique by means of Axio Imager Z2 (Carl Zeiss, Germany). Results and conclusions. For the first time ever established has been the presence of Acanthamoeba castellanii in soils of burrows of Marmota altaica in the numbers of up to 300000 cells/gr in Gorno-Altai high-mountain focus. Investigated has been the dynamics of interaction of these microorganisms. Preservation of the agent in vacuoles of endoplasmatic reticulum within 14 days has been revealed. It is an indicative of the possibility of Y. pestis persistence in amoeba of Acanthamoeba subspecies in soil biocoenosis of Gorno-Altai high-mountain plague focus.

возбудитель чумыакантамебыприродные очаги чумымеханизмы персистенцииAcanthamoebaYersinia pestisplague agentacanthamoebanatural plague focimechanisms of persistenceAcanthamoebaYersinia pestisReferencesДомарадский И.В. Не является ли чума протонозом? (роль Protozoa в эпизоотология чумы). Мед. паразитол. 1999; 2:10–13.Domadarsky I.V. [Is not plague a protozoan disease? (The role of Protozoa in epizootiology of plague)]. Med. Parazitol. 1999; 2:10–3.Кошель Е.И., Анисимова Л.В., Новичкова Л.А., Видяева Н.А., Гусева Н.П., Ерошенко Г.А., Кутырев В.В. Определение систематической принадлежности почвенных амеб из очагов чумы Прикаспия на основе анализа участков рибосомного оперона. Генетика. 2015; 51:39–45. DOI: 10.7868/S0016675815010051.Koshel’ E.I., Anisimova L.V., Novichkova L.A., Vidyaeva N.A., Guseva N.P., Eroshenko G.A., Kutyrev V.V. [Determination of specific appurtenance of soil amoeba from plague foci of Pre-Caspian based on analysis of ribosomal operon regions]. Genetika. 2015; 51:30–45. DOI: 10.7868/S0016675815010051.Кошель Е.И., Ерошенко Г.А., Анисимова Л.В., Новичкова Л.А., Широков А.А., Буров А.М., Кузнецов О.С., Кутырев В.В. Оценка длительности сохранения штаммов Yersinia pestis в клетках почвенных амеб Acanthamoeba sp, в экспериментальных условиях. Пробл. особо опасных инф. 2016; 2:69–74. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-2-69–74.Koshel’ E.I., Eroshenko G.A., Anisimova L.V., Novichkova L.A., Shirokov A.A., Burov A.M., Kuznetsov O.S., Kutyrev V.V. [Exploratory study of the long-term persistence of Yersinia pestis in the cells of soil-inhabiting ameba – Acanthamoeba ssp.]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2016; 2: 69–74. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-2-69-74.Кутырев В.В., Ерошенко Г.А., Попов Н.В., Видяева Н.А., Коннов Н.П. Молекулярные механизмы взаимодействия возбудителя чумы с беспозвоночными животными. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2009; 4:7–12.Kutyrev V.V., Eroshenko G.A., Popov N.V., Vidyaeva N.A., Konnov N.P. [Molecular mechanisms of plague agent interaction with invertebrate animals]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2009; 4:7–12.Кутырев В.В., Попова А.Ю., Ежлова Е.Б., Дёмина Ю.В., Пакскина Н.Д., Щучинов Л.В., Михайлов В.П., Мищенко А.И., Рождественский Е.Н., Базарова Г.Х., Денисов А.В., Шарова И.Н., Попов Н.В., Кузнецов А.А. Заболевание человека чумой в Горно-Алтайском высокогорном природном очаге в 2014 г. Сообщение 1. Эпидемиологические и эпизоотологические особенности проявлений чумы в Горно-Алтайском высокогорном (Сайлюгемском) природном очаге чумы. Пробл. особо опасных инф. 2014; 4:9–16.Kutyrev V.V., Popova A.Yu., Ezhlova E.B., Demina Yu.V., Pakskina N.D., Shchuchinov L.V., Mikhailov E.P., Mishchenko A.I., Rozhdestvensky E.N., Bazarova G.Kh., Denisov A.V., Sharova I.N., Popov N.V., Kuznetsov A.A. [Infection of an individual with plague in the Gorno-Altai high-mountain natural focus in 2014. Communication 1. Epidemiological and epizootiological peculiarities of plague manifestations in the Gorno-Altai high-mountain (Sailyugemsky) natural plague focus]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2014; 4:9–16.Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство 2-е изд. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.Onishchenko G.G., Kutyrev V.V., editors. [Laboratory Diagnostics of Dangerous Infectious Diseases. Practice Guidelines]. M.: ‘Shiko”, CJSC; 2nd Edition, 2013. 560 p.Попов Н.В., Кошель Е.И., Ерошенко Г.А., Кутырев В.В. Формирование современных представлений о механизмах энзоотии чумы. Пробл. особо опасных инф. 2011; 3(109):5–8.Popov N.V., Koshel E.I., Eroshenko G.A., Kutyrev V.V. [Formation of modern concepts on the mechanism of plague enzooty]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 3(109):5–8.Abd H., Johansson T., Golovliov I., Sandstrom G., Forsman M. Survival and growth of Francisella tularensis in Acanthamoeba castellanii. Appl. Environ. Microbiol. 2003; 69:600–6. PMID: 12514047; PMCID: PMC152416.Abd H., Johansson T., Golovliov I., Sandstrom G., Forsman M. Survival and growth of Francisella tularensis in Acanthamoeba castellanii. Appl. Environ. Microbiol. 2003; 69:600–6. PMID: 12514047; PMCID: PMC152416.Greub G., Raoult D. Microorganisms resistant to free-living amoebae. Clin. Microbiol. Rev. 2004; 17:413–33. PMID: 15084508; PMCID: PMC387402.Greub G., Raoult D. Microorganisms resistant to free-living amoebae. Clin. Microbiol. Rev. 2004; 17:413–33. PMID: 15084508; PMCID: PMC387402.Pelandakis M., Pernin P. Use of multiplex PCR and PCR restriction enzyme analysis for detection and exploration of the variability in the free-living amoeba Naegleria in the environment. Appl. Environ. Microbiol. 2002; 68(4):2061–5. PMID: 11916734; PMCID: PMC123847.Pelandakis M., Pernin P. Use of multiplex PCR and PCR restriction enzyme analysis for detection and exploration of the variability in the freeliving amoeba Naegleria in the environment. Appl. Environ. Microbiol. 2002; 68(4):2061–5. PMID: 11916734; PMCID: PMC123847.Schroeder J., Booton G., Hay J., Niszl I., Seal D., Markus M., Fuerst P., Byers T. Use of subgenic 18S ribosomal DNA PCR and sequencing for genus and genotype identification of Acanthamoebae from humans with keratitis and from sewage sludge. Clin. Microbiol. 2001; 39(5):1903–11. DOI: 10.1128/JCM.39.5.1903-1911.2001.Schroeder J., Booton G., Hay J., Niszl I., Seal D., Markus M., Fuerst P., Byers T. Use of subgenic 18S ribosomal DNA PCR and sequencing for genus and genotype identification of Acanthamoebae from humans with keratitis and from sewage sludge. Clin. Microbiol. 2001; 39(5):1903–11. DOI: 10.1128/JCM.39.5.1903-1911.2001.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.