microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2010-4(106)-32-36microbe-560Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКАMICROBIOLOGY, DIAGNOSTICSПолучение и иммунологическая характериcтика рекомбинантных белков VP40 и NP филовирусовObtaining and Immunologic Characterization of Filoviruses Recombinant Proteins VP40 and NPИвановаА. В.IvanovaA. V.ali@vector.nsc.ruКазачинскаяЕ. И.KazachinskayaE. I.noemail@neicon.ruКачкоА. В.KachkoA. V.noemail@neicon.ruСубботинаЕ. Л.SubbotinaE. L.noemail@neicon.ruСорокинА. В.SorokinA. V.noemail@neicon.ruРазумовИ. А.RazumovI. A.noemail@neicon.ruНетёсовС. В.NeteosovS. V.nauka@nsu.ruЛоктевВ. Б.LoktevV. B.noemail@neicon.ruГосударственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»РоссияState Scientific Center for Virusology and BiotechnologyRussian FederationНовосибирский Государственный университетРоссияNovosibirsk State UniversityRussian Federation20102008201004(106)3236Copyright © Иванова А.В., Казачинская Е.И., Качко А.В., Субботина Е.Л., Сорокин А.В., Разумов И.А., Нетёсов С.В., Локтев В.Б., 20102010Иванова А.В., Казачинская Е.И., Качко А.В., Субботина Е.Л., Сорокин А.В., Разумов И.А., Нетёсов С.В., Локтев В.Б.Ivanova A.V., Kazachinskaya E.I., Kachko A.V., Subbotina E.L., Sorokin A.V., Razumov I.A., Neteosov S.V., Loktev V.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/560

Получены генетические конструкции, несущие полноразмерные гены матриксных белков VP40 вируса Эбола (ВЭ) и вируса Марбург (ВМ), а также нуклеопротеина (NP) ВЭ. Экспрессия этих генов в прокариотической системе Escherichia coli c последующей аффинной очисткой на Ni-NTA агарозе обеспечивала получение полноразмерных рекомбинантных белков VP40 и NP филовирусов. Исследование иммунологических свойств аффинно-очищенных полноразмерных белков показало, что они сохранили антигенные свойства, присущие нативным белкам филовирусов. Это делает перспективными их использование для совершенствования иммунодиагностики и конструирования экспериментальных вакцин против филовирусных инфекций.

Full-size genes coding matrix proteins VP40 of Ebola virus (VE) and Marburg virus (VM) and nucleoprotein (NP) of VE were cloned. These genes expression in Escherichia coli and purification of their products by affinity chromatography using Ni-NTA agarose permitted to obtain full-size recombinant VP40 and NP proteins of filoviruses. Immunological studies showed the recombinant polypeptides to possess antigenic properties similar to those of the native viral proteins. These proteins can be used for constructing of experimental vaccines against filoviruses and improving immunodiagnostic tests against filoviral infections.

вирус Марбург (ВМ)вирус Эбола (ВЭ)рекомбинантные белкиMarburg virus (MV)Ebola virus (EV)recombinant proteinsReferencesБорисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский В.П., Градобоев В.Н., Лебединская Е.В., Потрываева Н.В., Тиманькова Г.Д. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Эбола. Вопр. вирусол. 1996; 6(41):270-3.Борисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский В.П., Градобоев В.Н., Лебединская Е.В., Потрываева Н.В., Тиманькова Г.Д. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Эбола. Вопр. вирусол. 1996; 6(41):270-3.Букреев А.А., Скрипченко А.А., Гусев Ю.М., Фролов В.Г., Кандрушин Е.В., Красницкая И.М. и др. Перспективный метод препаративной наработки и очистки вируса Марбург. Вопр. вирусол. 1995; 4:161- 5.Букреев А.А., Скрипченко А.А., Гусев Ю.М., Фролов В.Г., Кандрушин Е.В., Красницкая И.М. и др. Перспективный метод препаративной наработки и очистки вируса Марбург. Вопр. вирусол. 1995; 4:161- 5.Казачинская Е.И., Иванова А.В., Сорокин А.В., Качко А.В., Субботина Е.Л., Разумов И.А., Локтев В.Б. Моноклональные антитела и рекомбинантные белки филовирусов. Иммунохимические свойства и оценка возможности их использования для иммунодиагностики. Медицинская иммунология. 2010; 12(3):177-90.Казачинская Е.И., Иванова А.В., Сорокин А.В., Качко А.В., Субботина Е.Л., Разумов И.А., Локтев В.Б. Моноклональные антитела и рекомбинантные белки филовирусов. Иммунохимические свойства и оценка возможности их использования для иммунодиагностики. Медицинская иммунология. 2010; 12(3):177-90.Никифоров В.В., Туровской Ю.И., Калинин П.П., Акинфеева Л.А., Каткова Л.Р., Бармин В.С. и др. Случай лабораторного заражения лихорадкой Марбург. Микробиология. 1994; 3:104-10.Никифоров В.В., Туровской Ю.И., Калинин П.П., Акинфеева Л.А., Каткова Л.Р., Бармин В.С. и др. Случай лабораторного заражения лихорадкой Марбург. Микробиология. 1994; 3:104-10.Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Чепурнова Т.С., Волчков В.Е., Истомина Н.И. и др. Получение очищенного вируса Эбола. Вопр. вирусол. 1994; 6:254-7.Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Чепурнова Т.С., Волчков В.Е., Истомина Н.И. и др. Получение очищенного вируса Эбола. Вопр. вирусол. 1994; 6:254-7.Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Чепурнова Т.С, Воробьева М.С. Получение кроличьих антисывороток к вирусу Эбола. Вопр. вирусол. 1994; 6(39):286-8.Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Чепурнова Т.С, Воробьева М.С. Получение кроличьих антисывороток к вирусу Эбола. Вопр. вирусол. 1994; 6(39):286-8.Becker S., Feldmann H., Will C., Slenczka W.E. Avidence for occurrence of filovirus antibodies in humans and imported monkeys: do subclinical filovirus infections occur worldwide. J Med Microbiol. Immunol. 1992; 181:43-55.Becker S., Feldmann H., Will C., Slenczka W.E. Avidence for occurrence of filovirus antibodies in humans and imported monkeys: do subclinical filovirus infections occur worldwide. J Med Microbiol. Immunol. 1992; 181:43-55.Bukreyev A.A., Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The complete nucleotide sequence of the Popp (1967) strain of Marburg virus: a comparison with the Musoke (1980) strain. Arch. Virol. 1995; 140:1589-90.Bukreyev A.A., Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The complete nucleotide sequence of the Popp (1967) strain of Marburg virus: a comparison with the Musoke (1980) strain. Arch. Virol. 1995; 140:1589-90.Elliott L.H., Kiley M.P., McCormick J.B. Descriptive analysis of Ebola virus protein. Virology. 1985; 147:169-76.Elliott L.H., Kiley M.P., McCormick J.B. Descriptive analysis of Ebola virus protein. Virology. 1985; 147:169-76.Feldmann H., Geisbert T.W., Jahring P.B., Klenk H.D., Netesov S.V., Peters C.J. Filoviridae. In: Fauquet C.M., Mayo M.A., Maniloff J., Desselberger U., Ball L.A., editors. Virus Taxonomy: VIIIth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. London, UK: Elsevier Academic Press; 2004. P. 645-53.Feldmann H., Geisbert T.W., Jahring P.B., Klenk H.D., Netesov S.V., Peters C.J. Filoviridae. In: Fauquet C.M., Mayo M.A., Maniloff J., Desselberger U., Ball L.A., editors. Virus Taxonomy: VIIIth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. London, UK: Elsevier Academic Press; 2004. P. 645-53.Ikegami T., Niikura M., Saijo M., Miranda A.B., Calaor M., Hernandez D.L. Antigen capture enzyme-linked immunosorbent assay for specific detection of Reston Ebola virus nucleoprotein. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2003; 10(4):552-7.Ikegami T., Niikura M., Saijo M., Miranda A.B., Calaor M., Hernandez D.L. Antigen capture enzyme-linked immunosorbent assay for specific detection of Reston Ebola virus nucleoprotein. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2003; 10(4):552-7.Jonathan S., Towner, Tara K. et al. Newly Discovered Ebola Virus Associated with Hemorrhagic Fever Outbreak in Uganda. PLoS Pathog. 2008; 4(11):e1000212.Jonathan S., Towner, Tara K. et al. Newly Discovered Ebola Virus Associated with Hemorrhagic Fever Outbreak in Uganda. PLoS Pathog. 2008; 4(11):e1000212.Kalstrom G., Warfield K.L., Swenson D.L., Shannon M., Panchal R., Ruthel G. et al. Analysis of Ebola virus and VLP release using an immunocapture assay. J. Virol. Meth. 2005; 127(1): 1-9.Kalstrom G., Warfield K.L., Swenson D.L., Shannon M., Panchal R., Ruthel G. et al. Analysis of Ebola virus and VLP release using an immunocapture assay. J. Virol. Meth. 2005; 127(1): 1-9.Leroy E.M., Souquière S., Rouquet P., Drevet D. Re-emergence of ebola haemorrhagic fever in Gabon. Lancet. 2002; 359(9307):712.Leroy E.M., Souquière S., Rouquet P., Drevet D. Re-emergence of ebola haemorrhagic fever in Gabon. Lancet. 2002; 359(9307):712.Licata J.M., Johnson R.F., Han Z., Harty R.N. Contribution of Ebola virus glycoprotein, nucleoprotein, and VP24 to budding of VP40 virus-like particles. Virology. 2004; 78(14):7344-51.Licata J.M., Johnson R.F., Han Z., Harty R.N. Contribution of Ebola virus glycoprotein, nucleoprotein, and VP24 to budding of VP40 virus-like particles. Virology. 2004; 78(14):7344-51.Muhlberger E., Lotfering B., Klenk H-D., Becker S. Three of the four nucleocapsid proteins of Marburg virus, NP, VP35, and L, are sufficient to mediate replication and transcription of Marburg virus-specific monocistronic minigenomes. J. Virol. 1998. 72(11):8756-84.Muhlberger E., Lotfering B., Klenk H-D., Becker S. Three of the four nucleocapsid proteins of Marburg virus, NP, VP35, and L, are sufficient to mediate replication and transcription of Marburg virus-specific monocistronic minigenomes. J. Virol. 1998. 72(11):8756-84.Noda T., Watanabe S., Sagara H., Kawaoka Y. Mapping of the VP40-binding regions of the nucleoprotein of Ebola virus. J. Virol. 2007; 81(7):3554-62.Noda T., Watanabe S., Sagara H., Kawaoka Y. Mapping of the VP40-binding regions of the nucleoprotein of Ebola virus. J. Virol. 2007; 81(7):3554-62.Ruigrok R.W., Schoehn G., Dessen A., Forest E., Volchkov V., Dolnik O. et al. Structural characterization and membrane binding properties of the matrix proteinVP40 of Ebola virus. J. Mol. Biol. 2000; 300:103-12.Ruigrok R.W., Schoehn G., Dessen A., Forest E., Volchkov V., Dolnik O. et al. Structural characterization and membrane binding properties of the matrix proteinVP40 of Ebola virus. J. Mol. Biol. 2000; 300:103-12.Saijo M., Niikura M., Morikawa S., Ksiazek T.G., Meyer R.F., Peters C.J. et al. Enzyme-linked immunosorbent asseys for detection of antibodies to Ebola and Marburg viruses using recombinant nucleoproteins. J. Clin. Microbiol. 2001; 39(1):1-7.Saijo M., Niikura M., Morikawa S., Ksiazek T.G., Meyer R.F., Peters C.J. et al. Enzyme-linked immunosorbent asseys for detection of antibodies to Ebola and Marburg viruses using recombinant nucleoproteins. J. Clin. Microbiol. 2001; 39(1):1-7.Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12):5463.Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12):5463.Swenson D., Wang D., Luo M., Warfield K.L., Woraratanadharm J., Holman D.H. et al. Complete protection of nonhuman primates against multistrain Ebola and Marburg virus infections. Clin. Vaccine. Immunol. 2008; 15(3):460-7.Swenson D., Wang D., Luo M., Warfield K.L., Woraratanadharm J., Holman D.H. et al. Complete protection of nonhuman primates against multistrain Ebola and Marburg virus infections. Clin. Vaccine. Immunol. 2008; 15(3):460-7.Towner J.S., Khristova M.L., Sealy T.K., Vinscent M.J., Erickson B.R., Bawiec D.A. et al. Marburgvirus genomics and association with a large hemorrhagic fever outbreak in Angola. J. Virol. 2006; 80(13):6497-516.Towner J.S., Khristova M.L., Sealy T.K., Vinscent M.J., Erickson B.R., Bawiec D.A. et al. Marburgvirus genomics and association with a large hemorrhagic fever outbreak in Angola. J. Virol. 2006; 80(13):6497-516.Watanabe S., Noda T., Kawaoka Y. Functional mapping of nucleoprotein of Ebola virus. J. Virol. 2006; 80(8):3743-51.Watanabe S., Noda T., Kawaoka Y. Functional mapping of nucleoprotein of Ebola virus. J. Virol. 2006; 80(8):3743-51.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.