microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2011-4(110)-71-75microbe-709Research ArticleДИАГНОСТИКА, ИММУНОЛОГИЯ, ИММУНОТЕРАПИЯDIAGNOSTICS, IMMUNOLOGY, IMMUNOTHERAPYРазработка и испытания диагностикума на основе моноклональных антител для определения спор возбудителя сибирской язвы в реакции латекс-агглютинацииDevelopment and Testing of Monoclonal Antibodies-Based Diagnostic Preparation for Bacillus anthracis Spores Detection Using Latex Agglutination MethodХлынцеваА. Е.KhlyntsevaA. E.info@obolensk.orgЛуневаН. М.LunevaN. M.noemail@neicon.ruБеловаЕ. В.BelovaE. V.noemail@neicon.ruДятловИ. А.DyatlovI. A.noemail@neicon.ruШемякинИ. Г.ShemyakinI. G.noemail@neicon.ruГосударственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологииРоссияState Research Center of Applied Microbiology and BiotechnologyRussian Federation20112008201104(110)7175Copyright © Хлынцева А.Е., Лунева Н.М., Белова Е.В., Дятлов И.А., Шемякин И.Г., 20112011Хлынцева А.Е., Лунева Н.М., Белова Е.В., Дятлов И.А., Шемякин И.Г.Khlyntseva A.E., Luneva N.M., Belova E.V., Dyatlov I.A., Shemyakin I.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/709

Проведены исследования по иммобилизации моноклональных антител на твердом носителе (латексных микрочастицах) и подбору оптимальной их нагрузки. Наибольшая чувствительность реакции латекс-агглютинации наблюдалась при использовании моноклональных антител 1Е6. Оптимальная нагрузка моноклональных антител на латексных частицах составила 20 мкг на 50 мкл исходной латексной суспензии. Проведена оценка чувствительности и специфичности лиофильновысушенных латексных суспензий с иммобилизованными МКА. Их чувствительность и специфичность не уступала исходной жидкой латексной суспензии. На их основе сконструирован латексный диагностикум для определения спор возбудителя сибирской язвы, разработан и утвержден комплект нормативной документации, включающий в себя инструкцию по применению и технические условия (ТУ 9388-112-78095326-2010, код ОКП 938890). Проведены межлабораторные и комиссионные испытания экспериментальных образцов сконструированного латексного диагностикума. Полученные препараты характеризуются высокой чувствительностью (от 1·105 до 2·106 спор/мл и выше) и специфичностью (не реагируют со спорами различных видов спорообразующих бацилл в концентрации 1·108 спор/мл и ниже).

Immobilization of anti-B. anthracis monoclonal antibodies (MAbs) on latex microparticles was studied, the optimal load of these MAbs was determined to be 20 µg for 50 µl of the stock latex suspension. The highest sensitivity of latex agglutination test was observed for 1E6 MAbs. Latex suspensions with immobilized MAbs were lyophilized. Their sensitivity and specificity were shown to be highly competitive with those of the stock liquid latex suspension. Latex diagnosticum for Bacillus anthracis spores detection was constructed on the basis of these lyophilized reagents, developed and approved was the regulatory documentation that included their application instructions and technical specifications. Carried out were inter-laboratory and commission tests of experimental prototypes of the designed latex diagnosticum. These preparations demonstrated high sensitivity (from 1·105 to 2·106 spores/ml and even more) and specificity (absence of cross-reactions with spores of different species of sporogenous bacilli at concentration of 108 spores/ml).

моноклональные антитела (МКА)латексные микрочастицыреакция латекс-агглютинации (РЛА)чувствительностьспецифичностькомиссионные испытанияmonoclonal antibodies (MAbs)latex microparticleslatex agglutination testsensitivityspecificitycommission testsReferencesХлынцева А.Е., Белова Е.В., Жарникова И.В., Тюменцева И.С., Куличенко А.Н., Дятлов И.А., Шемякин И.Г. Конструирование тест-системы для селективного концентрирования спор Bacillus anthracis на основе магнитных частиц с иммобилизованными моноклональными антителами. Биотехнол. 2010; 4:81-8.Khlyntseva A.E., Belova E.V., Zharnikova I.V., Tyumentseva I.S., Kulichenko A.N., Dyatlov I.A., Shemyakin I.G. [Development of the testsystem for the selective concentration of Bacillus anthracis spores based on the use of magnet particles with immobilized monoclonal antibodies]. Biotekhnologia. 2010; 4:81–8.Andreotti P.K., Ludwig G.V., Peruski A.H. et al. Immunoassay of infectious agents. Biotechniques. 2003; 35:850-9.Andreotti P.K., Ludwig G.V., Peruski A.H. et al. Immunoassay of infectious agents. Biotechniques. 2003; 35:850-9.Steichen C., Chen P., Kearney J.F., Turnbough C.L. Identification of the Immunodominant Protein and Other Proteins of the Bacillus anthracis Exosporium. J. Bacteriol. 2003; 185:1903-10.Steichen C., Chen P., Kearney J.F., Turnbough C.L. Identification of the Immunodominant Protein and Other Proteins of the Bacillus anthracis Exosporium. J. Bacteriol. 2003; 185:1903-10.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.