microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2012-1(111)-54-56microbe-770Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYИсследование взаимодействия бромистого этидия с клетками бактерий рода Yersinia в лиофилизированных/регидратированных препаратахInvestigation of Ethidium Bromide Interaction with Yersinia Bacterial Cells in Lyophilized/Rehydrated PreparationsГоворуноваВ. А.GovorunovaV. A.info@obolensk.orgГоворуновИ. Г.GovorunovI. G.info@obolensk.orgФирстоваВ. В.FirstovaV. V.info@obolensk.orgЗыринаЕ. В.ZyrinaE. V.info@obolensk.orgГосударственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологииРоссияState Research Center for Applied Microbiology and BiotechnologyRussian Federation20122002201201(111)5456Copyright © Говорунова В.А., Говорунов И.Г., Фирстова В.В., Зырина Е.В., 20122012Говорунова В.А., Говорунов И.Г., Фирстова В.В., Зырина Е.В.Govorunova V.A., Govorunov I.G., Firstova V.V., Zyrina E.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/770

Исследовано взаимодействие бромистого этидия с клетками авирулентных штаммов Y. pestis и Y. pseudotuberculosis в лиофилизированных/регидратированных препаратах. Методом проточной цитофлуориметрии и при регистрации тотальной флуоресценции выявлена гетерогенность популяции по размерам частиц и содержанию в них нуклеиновых кислот. Показана корреляция между концентрацией колониеобразующих единиц в суспензии и приростом флуоресценции после добавки цетилтриметиламмонийбромида. Предложено использовать этот подход в качестве экспресс-метода оценки концентрации жизнеспособных клеток в лиофилизированных/регидратированных препаратах в процессе приготовления и хранения музейных штаммов, сухих живых вакцин и пробиотических препаратов грамотрицательных бактерий.

Investigated was ethidium bromide interaction with the cells of avirulent Y. pestis and Y. pseudotuberculosis strains in lyophilized/rehydrated preparations. The population heterogeneity regarding particle size and concentration of nucleic acid was identified by flow cytofluorimetry and registration of total fluorescence intensity. Shown was the correlation between concentration of colony-forming units (CFU) and fluorescence increase after supplementing suspension with cetyltrimethylammoniumbromide. This approach was suggested as the express method to estimate viable cell count in lyophilized/rehydrated preparations and to control the process of preparing and storage of collection strains, dry live vaccine and probiotic preparations of gramnegative bacteria.

Yersinia pestisYersinia pseudotuberculosisбромистый этидийфлуоресценцияжизнеспособностьцитометрияYersinia pestisYersinia pseudotuberculosisethidium bromidefluorescenceviabilitycytometryReferencesГоворунов И.Г., Косарев Н.В., Евтодиенко Ю.В., Пучков Е.О. Исследование проницаемости мембран оболочки Escherichia coli для бромистого этидия. Микробиол. 1982; 51(5):731-4.Govorunov I.G., Kosarev N.B., Evtodienko Yu.V., Puchkov E.O. [Permeability of the membranes of the Escherichia coli envelope for ethidium bromide]. Mikrobiologia. 1982; 51(5):731–4.Ирхин А.И., Кондрашенко Т.Н., Пучков Е.О. Чувствительность мембран клеток Escherichia coli к детергентам разных классов. Микробиол. 1989; 58(2):217-21.Irkhin A.I., Kondrashenko T.N., Puchkov E.O. [Sensitivity of Escherichia coli cell membranes to various classes of detergents]. Mikrobiologia. 1989; 58(2):217–21.Косарев Н.В., Пучков Е.О. Способ определения концентрации бактерий в суспензии. А.с. СССР 1231077., опубл. 15.05.1986. Бюл. 18.Kosarev N.V., Puchkov E.O. [Methods for the Measurement of Bacterial Concentration in Suspension]. SU Inventor Certificate 1231077.Пучков Е.О. Методы определения содержания и жизнеспособности микроорганизмов. Биотехнол. 1988; 4(1):132-42.Puchkov E.O. [Methods for the assessment of the presence and vi- ability of microorganisms]. Biotekhnologia. 1988; 4(1):132-42.Пучков Е.О., Говорунов И.Г., Евтодиенко Ю.В., Косарев Н.В. Действие шока, вызванного низкой температурой, и внеклеточного образования льда на внешнюю и цитоплазматическую мембраны E. coli К-12. Микробиол. 1983; 52(1):136-9.Puchkov E.O., Govorunov I.G., Evtodienko Yu.V., KosarevN.B. [Effect of low temperature shock and extracellular ice formation on the ex- ternal and cytoplasmic membranes of Escherichia coli cells]. Mikrobiologia. 1983; 52(1):136–9.Санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» СП 1.3.1285-03. Бюл. норм. и метод. документов Госсанэпиднадзора. 2003, 3(13):61-144.Sanitary Regulations “Safety work with microorganisms of patho- genicity (risk) groups I–II” SR 1.3.1285-03. Bull. Norm. Metod. Doc. Gossanepidnadzora. 2003; 3(13):61–144.Тихонравов В.В., Агеев В.А., Ковтун В.П., Ковтун А.Л., Шведов В.В. Способ определения количества бактерий в биопрепарате. Патент России 2117291, опубл. 10.08.1998. Бюл. 22.Tikhonravov V.V., Ageev V.A., Kovtun V.P., Kovtun A.L., Shvedov V.V. [The method for assessment of the number of bacteria in biological prepara- tion]. RF Patent 02117291.Davey H.M., Kell D.B. Flow cytometry and cell sorting of heterogeneous microbial populations: the importance of single-cell analyses. Microbiol. Rev. 1996; 60:641-96.Davey H.M., Kell D.B. Flow cytometry and cell sorting of heterogeneous microbial populations: the importance of single-cell analyses. Microbiol. Rev. 1996; 60:641-96.Greenstocka C.L., Ruddocka G.W. Interaction of ethidium bromide with DNA as studied by kinetic spectrophotometry. Chemico-Biological Interactions. 1975; 11(5):441-7.Greenstocka C.L., Ruddocka G.W. Interaction of ethidium bromide with DNA as studied by kinetic spectrophotometry. Chemico-Biological Interactions. 1975; 11(5):441-7.Martins M., Viveiros M., Couto I., Costa S.S., Pacheco T., Fanning S. et. al. Identification of Efflux Pump-mediated Multidrug-resistant Bacteria by the Ethidium Bromide-agar Cartwheel Method. In Vivo. 2011; 25:171-8.Martins M., Viveiros M., Couto I., Costa S.S., Pacheco T., Fanning S. et. al. Identification of Efflux Pump-mediated Multidrug-resistant Bacteria by the Ethidium Bromide-agar Cartwheel Method. In Vivo. 2011; 25:171-8.Puchkov E., Melkozernov A. Fiuorimetric assessment of Pseudomonas fluorescens viability after freeze-thawing using ethidium bromide. Lett. Appl. Microbiol. 1995; 21:368-72.Puchkov E., Melkozernov A. Fiuorimetric assessment of Pseudomonas fluorescens viability after freeze-thawing using ethidium bromide. Lett. Appl. Microbiol. 1995; 21:368-72.Viveiros M., Martins A., Paixão L., Rodrigues L., Martins M., Couto I. et al. Demonstration of intrinsic efflux activity of Escherichia coli K-12 AG100 by an automated ethidium bromide method. International Journal of Antimicrobial Agents. 2008; 31:458-62.Viveiros M., Martins A., Paixão L., Rodrigues L., Martins M., Couto I. et al. Demonstration of intrinsic efflux activity of Escherichia coli K-12 AG100 by an automated ethidium bromide method. International Journal of Antimicrobial Agents. 2008; 31:458-62.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.