microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2012-2(112)-39-42microbe-792Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYKлонирование и экспрессия гена ace Vibrio cholerae в Escherichia coliCloning and Expression of ace Gene of Vibrio cholerae in Escherichia coliМонаховаЕ. В.MonakhovaE. V.plague@aaanet.ruПисановР. В.PisanovR. V.plague@aaanet.ruВеркинаЛ. М.VerkinaL. M.plague@aaanet.ruМироноваА. В.MironovaA. V.plague@aaanet.ruРостовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институтРоссияRostov-on-Don Research Anti-Plague InstituteRussian Federation20122004201202(112)3942Copyright © Монахова Е.В., Писанов Р.В., Веркина Л.М., Миронова А.В., 20122012Монахова Е.В., Писанов Р.В., Веркина Л.М., Миронова А.В.Monakhova E.V., Pisanov R.V., Verkina L.M., Mironova A.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/792

Ген accessory cholera enterotoxin (ace) Vibrio cholerae, амплифицированный с помощью ПЦР, клонирован в составе векторной плазмиды pQE30 по сайтам BamHI-HindIII. Экспрессия гена происходит под контролем Т5-промотора. Штамм Escherichia coli M15[pREP4]pAce90 (КМ 194), содержащий рекомбинантную плазмиду, является активным продуцентом белка 6His-Ace, который обладает биологической активностью на модели мышей-сосунков, вызывая накопление жидкости в кишечнике. Продукт присутствует в клетках кишечной палочки в виде телец включения. Сконструированный штамм-продуцент может быть использован для получения препаратов Ace в целях изучения его значимости как фактора патогенности холерных вибрионов.

Accessory cholera enterotoxin (ace) gene of Vibrio cholerae, amplified by PCR, is cloned into the BamHI-HindIII sites using plasmid pQE30. Expression of ace gene is under the control of T5 promotor. The Escherichia coli strain M15[pREP4]pAce90 (KM 194), containing recombinant plasmid, is an active producer of 6His-Ace protein, which possesses biological activity in the models of suckling mice and causes accumulation of fluid in the intestine. The product is contained in inclusion bodies found in the cells of coliform bacterium. The engineered producer strain can be used to obtain Ace preparations with a view to study its significance as pathogenicity factor in cholera vibrio.

accessory cholera enterotoxinхолерный вибрионклонирование геноврекомбинантная плазмидаaccessory cholera enterotoxincholera vibriogene cloningrecombinant plasmidReferencesМанниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии: Молекулярное клонирование. М.: Мир; 1984. 480 с.Maniatis T., Frich E., Sembruk G. [Methods of Genetic Engineering. Molecular Cloning.]. M.: Mir; 1964. 479 p.Монахова Е.В., Ломов Ю.М., Михась Н.К., Писанов Р.В. Структура и изменчивость неполного СТХ-элемента холерных вибрионов. Пробл. особо опасных инф. 2007; 1(93):58-61.Monakhova E.V.,Lomov Yu.M., Mikhas’ N.K., Pisanov R.V. [Structure and variability of the deficient CTX-element of the cholera vibrios]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2007; 93:58–61.Монахова Е.В., Ломов Ю.М., Писанов Р.В., Алексеева Л.П., Маркина О.В., Миронова А.В. и др. Клонирование гена цитотонического фактора Cef (CHO-cell elongating factor) Vibrio cholerae в Escherichia coli и его экспрессия под контролем PBAD-промотора. Биотехнология. 2005; 5:12-8.Monakhova E.V.,Lomov Yu.M., Pisanov R.V., Alekseeva L.P., Markina O.V., Mironova A.V. et al. [Cloning of the Vibrio cholerae CHO-cell elongat- ing factor under control of PBAD promoter]. Biotekhnologia. 2006; 5:12–18.Монахова Е.В., Ломов Ю.М., Писанов Р.В., Веркина Л.М., Миронова А.В. Рекомбинантная плазмида, экспрессирующая клонированный ген ace Vibrio cholerae, и штамм Escherichia coli - продуцент accessory cholera enterotoxin Vibrio cholerae. Патент РФ № 2313576, опубл. 27.12.2007.Monakhova E.V., Lomov Yu.M., Pisanov R.V., Verkina L.M., Markina O.V., Mironova A.V. [Recombinant plasmid expressing the cloned ace gene of Vibrio cholerae, and Escherichia coli strain – the producer of accessory cholera enterotoxin of Vibrio cholerae]. RF Patent № 2313576.Монахова Е.В., Миронова А.В., Алексеева Л.П., Мазрухо А.Б. Изучение вирулентности холерных вибрионов, содержащих pre-CTXφ: генотипическая и фенотипическая характеристика. Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2008; 4:27-32.Monakhova E.V., Mironova A.V., Alekseeva L.P., Mazrukho A.B. [The study of pre-CTXϕ carrying Vibrio cholerae virulence: genotypic and phenotypic characteristics]. Zh. Microbiol. Epidemiol. Immunobiol. 2008; 4:27–32.Faruque S.M., Albert M.J., Mekalanos J.J. Epidemiology, genetics and ecology of toxigenic Vibrio cholerae. Microbiol. Mol. Biol. Rew. 1998; 62:1301-14.Faruque S.M., Albert M.J., Mekalanos J.J. Epidemiology, genetics and ecology of toxigenic Vibrio cholerae. Microbiol. Mol. Biol. Rew. 1998; 62:1301-14.Somarny W.M., Mariana N.S., Neela V., Rozita R., Raha A.R. Optimization of parameters for accessory cholera enterotoxin (Ace) protein expression. J. Med. Sci. 2002; 2:74-6.Somarny W.M., Mariana N.S., Neela V., Rozita R., Raha A.R. Optimization of parameters for accessory cholera enterotoxin (Ace) protein expression. J. Med. Sci. 2002; 2:74-6.Somarny W.M., Mariana N.S., Rozita R., Raha A.R. Cloning and expression of Vibrio cholerae virulence gene, accessory cholera enterotoxin (ace). Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 2004; 35:856-62.Somarny W.M., Mariana N.S., Rozita R., Raha A.R. Cloning and expression of Vibrio cholerae virulence gene, accessory cholera enterotoxin (ace). Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 2004; 35:856-62.Trucksis M., Conn T.L., Wasserman S.S., Sears C.L. Vibrio cholerae ACE stimulates Ca+-dependent Cl-/HCO3- secretion in T84 cells in vitro. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2000; 279:567-77.Trucksis M., Conn T.L., Wasserman S.S., Sears C.L. Vibrio cholerae ACE stimulates Ca+-dependent Cl-/HCO3- secretion in T84 cells in vitro. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2000; 279:567-77.Trucksis M., Conn T.L., Fasano A., Kaper J.B. Production of Vibrio cholerae accessory cholera enterotoxin (Ace) in the yeast Pichia pastoris. Infect. Immun. 1997; 65:4984-8.Trucksis M., Conn T.L., Fasano A., Kaper J.B. Production of Vibrio cholerae accessory cholera enterotoxin (Ace) in the yeast Pichia pastoris. Infect. Immun. 1997; 65:4984-8.Trucksis M., Galen G.E., Michalski J., Fasano A., Kaper J. B. Accessory cholera enterotoxin (Ace), the third toxin of a V. cholerae virulence cassette. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993; 90:5267-71.Trucksis M., Galen G.E., Michalski J., Fasano A., Kaper J. B. Accessory cholera enterotoxin (Ace), the third toxin of a V. cholerae virulence cassette. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993; 90:5267-71.Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic conversion by a filamentous phage encoding cholera toxin. Science. 1996; 272:1910-4.Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic conversion by a filamentous phage encoding cholera toxin. Science. 1996; 272:1910-4.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.