microbeПроблемы особо опасных инфекцийProblems of Particularly Dangerous Infections0370-10692658-719XRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”10.21055/0370-1069-2013-4-95-101microbe-87Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОПРОФИЛАКТИКАBIOTECHNOLOGY, IMMUNOPROPHYLAXISМетоды и технологии культивирования холерного вибриона (обзор)Methods and Technologies of Cholera Vibrio Cultivation (Scientific Review)ЕреминС. А.EreminS. A.rusrapi@microbe.ruАлешинаЮ. А.AleshinaYu. A.rusrapi@microbe.ruКомиссаровА. В.KomissarovA. V.rusrapi@microbe.ruГромоваО. В.GromovaO. V.rusrapi@microbe.ruВасинЮ. Г.VasinYu. G.rusrapi@microbe.ruНикифоровА. К.NikiforovA. K.rusrapi@microbe.ruЛивановаЛ. Ф.LivanovaL. F.rusrapi@microbe.ruВолохО. А.VolokhO. A.rusrapi@microbe.ruЛобовиковаО. А.LobovikovaO. A.rusrapi@microbe.ruБронниковаВ. С.BronnikovaV. S.rusrapi@microbe.ruРоссийский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»РоссияRussian Research Anti-Plague Institute “Microbe”Russian Federation2013201220130495101Copyright © Еремин С.А., Алешина Ю.А., Комиссаров А.В., Громова О.В., Васин Ю.Г., Никифоров А.К., Ливанова Л.Ф., Волох О.А., Лобовикова О.А., Бронникова В.С., 20132013Еремин С.А., Алешина Ю.А., Комиссаров А.В., Громова О.В., Васин Ю.Г., Никифоров А.К., Ливанова Л.Ф., Волох О.А., Лобовикова О.А., Бронникова В.С.Eremin S.A., Aleshina Y.A., Komissarov A.V., Gromova O.V., Vasin Y.G., Nikiforov A.K., Livanova L.F., Volokh O.A., Lobovikova O.A., Bronnikova V.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.microbe.ru/jour/article/view/87

Представлен обзор отечественной и зарубежной литературы, посвященный вопросам культивирования холерного вибриона. Даны сведения о следующих методах, применяемых в технологическом процессе его выращивания: периодическое культивирование, периодическое с подпиткой, отъемно-доливное выращивание микроорганизмов, ферментация с диализом, непрерывное культивирование. Рассмотрены их преимущества и недостатки. Проанализировано влияние таких параметров, как концентрация растворенного кислорода, содержание источника углеводного питания, рН среды, температура, концентрация и физиологическое состояние инокулята, продолжительность технологического процесса на рост этого микроорганизма и синтез его антигенов. Проведенный анализ данных литературы позволяет выбрать способ проведения процесса культивирования холерного вибриона и учесть влияние описанных в обзоре параметров при разработке технологии производства медицинских иммунобиологических препаратов для диагностики и профилактики холеры.

Displayed is the review of domestic and foreign literature sources devoted to matters of cholera vibrio cultivation. Discussed is the information concerning the following methods utilized in the technological process of vibrio growth stimulation: batch cultivation, fed-batch, fermentation and dialysis, periodic and continuous cultivation. Analyzed is the impact of such parameters as dissolved oxygen concentration, count of carbon nutrition source, medium pH, temperature rate , concentration and physiological condition of inoculate, duration of technological process, affecting the growth of this microorganism and synthesis of its antigens. Consequently, literature data analysis has contributed to the selection of proper method for cholera vibrio cultivation and consideration of the factors mentioned above for the development of manufacture technology applied to the production of medical immunoglobulin preparations for diagnostics and prophylaxis of cholera.

культивированиеVibrio choleraеантигенытехнологические параметрыcultivationantigenstechnological parametersReferencesАдамов А.К., Наумшина М.С. Холерные вибрионы. Саратов: Изд-во Саратовск. ун-та; 1984: 328 с.Adamov A.K., Naumshina M.S. [Cholera Vibrios]. Saratov: Saratov State University Publishing House; 1984. 328 p.Алтухов М.В., Никитин Г.А., Филлипов Н.Ф. Реакторная установка для культивирования микроорганизмов глубинным методом. Пробл. особо опасных инф. 1969; 2(6):192.Altukhov M.V., Nikitin G.A., Fillipov N.F. [Reactor unit for submerged cultivation of microorganisms]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1969; 2(6):192.Анисимов П.И., Адамов А.К., Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Никитина Г.П. Способ производства вакцины для профилактики холеры. Патент 2080121 РФ, опубл. 27.05.1997. Бюл. № 15.Anisimov P.I., Adamov A.K., Dzhaparidze M.N., Naumov A.V., Nikitina G.P. [Method of cholera prevention vaccine production]. RF Patent 2080121, opubl. 27.05.1997. Byul. № 15.Антонычева М.В., Нижегородцев С.А., Еремин С.А., Аленкина Т.В., Шульгина И.В., Вахрушина Н.И., Белоусов А.Д., Жулидов И.М., Никифоров А.К. Питательная среда для глубинного культивирования холерного вибриона. Патент 2425866 РФ, опубл. 10.08.2011. Бюл. № 22.Antonycheva M.V., Nizhegorodtsev S.A., Eremin S.A., Alenkina T.V., Shul’gina I.V., Vakhrushina N.I., Belousov A.D., Zhulidov I.M., Nikiforov A.K. [Nutrien media for submerged cholera vibrio cultivation]. RF Patent 2425866.Волох О.А., Шепелёв И.А., Заднова С.П., Крепостнова И.М., Еремин С.А. Изучение биокинетических особенностей и оптимизация условий культивирования штаммов холерного вибриона – продуцентов протективных антигенов, перспективных для внедрения в производство. Пробл. особо опасных инф. 2008; 1(95):52–5.Volokh O.A., Shepelev I.A., Zadnova S.P., Krepostnova I.M., Eremin S.A. [A study of biokinetic peculiarities and optimization of the conditions for culturing Vibrio cholerae strains overproducing protective antigens suitable for use in the production]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2008; 1(95):52–5.Горяев А.А., Щелканова Е.Ю., Лозовский Ю.В., Тучков И.В., Смирнова Н.И. Конструирование штамма Vibrio cholerae биовара эльтор гиперпродуцента холерного токсина II типа и определение оптимальных условий для продукции этого белка. Пробл. особо опасных инф. 2008; 1(95):56–9.Goryaev A.A., Shchelkanova E.Yu., Lozovsky Yu.V., Touchkov I.V., Smirnova N.I. [Construction of an El Tor biovariant Vibrio cholerae strain capable of type II cholera toxin hyperproduction and determining the optimal conditions for the production of this protein]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2008; 1(95):56–9.Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Елисеев Ю.Ю., Киреев М.Н., Космаенко О.М. Способ получения O-антигена холерного очищенного. Патент 2143280 РФ, опубл. 27.12.1999. Бюл. № 36.Gromova O.V., Dzhaparidze M.N., Dyatlov I.A., Eliseev Yu.Yu., Kireev M.N., Kosmaenko O.M. [Method of production of cholera O-antigen purified]. RF Patent 2143280.Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Елисеев Ю.Ю., Киреев М.Н., Наумов А.В., Кузьмиченко И.А., Тараненко Т.М. Оральная химическая вакцина против холеры. Патент 2159128 РФ, опубл. 20.11.2000. Бюл. № 33.Gromova O.V., Dzhaparidze M.N., Dyatlov I.A., Eliseev Yu.Yu., Kireev M.N., Naumov A.V., Kuz’michenko I.A., Taranenko T.M. [Oral chemical vaccine against cholera]. RF Patent 2159128.Наумов А.В., Джапаридзе М.Н., Громова О.В., Адамов А.К., Елисеев Ю.Ю., Космаенко О.М., Кузьмиченко И.А., Копырзов В.Н., Заворотных В.И., Захарова Т.Л., Чеховская Г.В. Использование нового штамма Vibrio cholerae О139 в качестве продуцента энтеральной химической вакцины. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1996; 2:52–5.Naumov A.V., Dzhaparidze M.N., Gromova O.V., Adamov A.K., Eliseev Yu.Yu., Kosmaenko O.M., Kuz’michenko I.A., Kopyrzov V.N., Zavorotnykh V.I., Zakharova T.L., Chekhovskaya G.V. [Novel Vibrio cholerae O139 strain as a producer of enteric chemical vaccine]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1996; 2:52–5.Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Мелещенко М.В., Никитина Г.П. Способ получения пероральной химической вакцины. Патент 2076734 РФ, опубл. 10.04.1997. Бюл. № 13.Dzhaparidze M.N., Naumov A.V., Meleshchenko M.V., Nikitina G.P. [Method of manufacturing of peroral chemical vaccine]. RF Patent 2076734.Заднова С.П., Волох О.А., Крепостнова И.М., Щелканова Е.Ю., Ливанова Л.Ф., Захарова Т.Л., Шепелёв И.А., Еремин С.А., Смирнова Н.И. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях. Пробл. особо опасных инф. 2007: 1(93):51–5.Zadnova S.P., Volokh O.A., Krepostnova I.M., Shchelkanova E.Yu., Livanova L.F., Zakharova T.L., Shepelev I.A., Yereomin C.A., Smirnova N.I. [Studying the main pathogenicity and immunogenicity factors production by different Vibrio cholerae strains while cultured under the production conditions]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2007; 1(93):51–5.Заднова С.П., Еремин С.А., Авдеева Н.Г., Волох О.А. Изучение динамики роста штаммов Vibrio cholerae-продуцентов протективных антигенов в условиях глубинного культивирования и выделение токсин-корегулируемых пилей адгезии. Биотехнология. 2004; 3:43–8.Zadnova S.P., Eremin S.A., Avdeeva N.G., Volokh O.A. [Studies of growth rates as regards Vibrio cholerae strains – producers of the protective antigens, under conditions of submerged cultivation. Isolation of toxincoregulated pilus of adhesion]. Biotekhnologiya. 2004; 3:43–8.Захарова Т.Л., Заднова С.П., Ливанова Л.Ф., Киреев М.Н., Смирнова Н.И. Использование рекомбинантных штаммов для одновременного получения нескольких очищенных основных протективных антигенов холерного вибриона. Пробл. особо опасных инф. 2009; 2(100):68–71.Zakharova T.L., Zadnova S.P., Livanova L.F., Kireev M.N., Smirnova N.I. [Recombinant strains application for simultaneous preparation of several purified cholera vibrio antigen]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2009; 2(100):68–71.Куликова В.Л., Караева Л.Т. Сравнительное изучение свойств холерных вакцин, полученных с АКМ-Ш и матрацев. Пробл. особо опасных инф. 1969; 2(6):116–22.Kulikova V.L., Karaeva L.T. [Comparative study of cholera vaccine properties, obtained using AKM-III units and fillers]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1969; 2(6):116–22.Куликова В.Л., Коваленко Н.М., Доброва Г.В., Копырзов В.Н., Космачева Н.Л. Изучение оптимальных условий роста, формирования специфических антигенов и токсинообразования у культуры холерного вибриона при глубинном выращивании. Пробл. особо опасных инф. 1979; 1:65–6.Kulikova V.L., Kovalenko N.M., Dobrova G.V., Kopyzrov V.N., Kosmacheva N.L. [Investigations of optimum growth conditions, specific antigen formation and toxin production base for cholera vibrio culture under submerged cultivation]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1979; 1:65–6.Лавровская В.М., Чибрикова Е.В., Караева Л.Т., Пертова Л.С., Анохина С.В., Анисимова Т.И., Воронкина И.М., Джапаридзе М.Н., Дроздовская Ф.К., Кондрашкова Т.В., Павлова Л.П., Гуртовик А.И. Культивирование холерных вибрионов в условиях аэрации среды и изучение биологических свойств глубинных культур. Пробл. особо опасных инф. 1969; 3(37):179–83.Lavrovskaya V.M., Chibrikova E.V., Karaeva L.T., Pertova L.S., Anokhina S.V., Anisimova T.I., Voronkina I.M., Dzhaparidze M.N., Drozdovskaya F.K., Kondrashkova T.V., Pavlova L.P., Gurtovik A.I. [Cholera vibrio cultivation under conditions of media aeration, and investigations of biological properties of submerged cultures]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1969; 3(37):179–83.Мазрухо А.Б., Михась Н.К., Монахова В.Е., Рожков К.К. Определение оптимальных условий продукции ряда факторов патогенности холерных вибрионов. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000; 1:21–4.Mazrukho A.B., Mikhas’ N.K., Monakhova V.E., Rozhkov K.K. [Identification of optimum conditions for pathogenicity factor production in cholera vibrio]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2000; 1:21–4.Ненков П.Х., Страшимиров И.И., Поликар А.Ч. Двухциклическое культивирование холерных вибрионов в ферментере. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1986; 7:21–4.Nenkov P.Kh., Strashimirov I.I., Polikar A.Ch. [Two-cycle cholera vibrio cultivation in bioreactor]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1986; 7:21–4.Ненков А.Х., Поликар А.Ч., Цакова А. Культивирование холерных вибрионов в ферментере с автоматическим контролем ряда параметров. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1982; 5:47–50.Nenkov P.Kh., Polikar A.Ch., Tsakova A. [Cholera vibrio cultivation in bioreactor operated at automatic mode for a range of factors]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1982; 5:47–50.Смирнова Н.И., Заднова С.П., Топорков А.В., Челдышева Н.Б. Штамм бактерий Vibrio cholerae KM 200 – продуцент холерного токсина и токсин-корегулируемых пилей адгезии. Патент 2193598 РФ, опубл. 27.11.2002. Бюл. № 33.Smirnova N.I., Zadnova S.P., Toporkov A.V., Cheldysheva N.B. [Vibrio cholerae strain KM 200 – producer of cholera toxin ad toxin coregulated pilus of adhesion]. RF Patent 2193598.Смирнова Н.И., Заднова С.П., Топорков А.В. Штамм бактерий Vibrio cholerae 2414 классического биовара серовара Огава – продуцент холерного токсина и токсинкорегулируемых пилей адгезии. Патент 2169187 РФ, опубл. 20.06.2001. Бюл. № 17.Smirnova N.I., Zadnova S.P., Toporkov A.V. [Vibrio cholerae 2414 bacteria strain, Classical biovar, Ogawa serotype – producer of cholera toxin and toxin coregulated pilus of adhesion]. RF Patent 2169187.Смирнова Н.И., Чеховская Г.В. Штамм бактерий Vibrio cholerae КМ 138 серогруппы О139 – продуцент холерного О139 антигена. Патент 2192463 РФ, опубл. 10.11.2002. Бюл. № 31.Smirnova N.I., Chekhovskaya G.V. [Vibrio cholerae KM 138 bacteria strain, O139 serotype – producer of cholera O139 antigen]. RF Patent 2192463.Стрельникова-Ааб Е.Н., Ливанова Л.Ф., Горяев А.А., Челдышова Н.Б., Смирнова Н.И. Авирулентные штаммы Vibrio cholerae О1 – продуценты протективного О1-антигена: получение и свойства. Пробл. особо опасных инф. 2010; 4(106):39–42.Strelnikova-Aab E.N., Livanova L.F., Goryaev A.A., Cheldyshova N.B., Smirnova N.I. [Vibrio cholerae O1 avirulent Ssrains – producers of protective O1 antigen: obtaining and peculiarities]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2010; 4(106): 39–42.Филлиппов А.Ф., Николаев Н.И., Шестеренко А.Ф., Караева Л.Т. Культивирование чумного микроба и холерного вибриона на агаре в аппаратах АКМ-Ш. Пробл. особо опасных инф. 1970; 1(11):158–63.Fillipov A.F., Nikolaev N.I., Shesterenko A.F., Karaeva L.T. [Plague microbe and cholera vibrio agar cultivation using AKM-III]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 1970; 1(11):158–63.Чеховская Г.В., Щелканова Е.Ю., Смирнова Н.И. Бескапсульные мутанты Vibrio cholerae О139 серогруппы: получение, идентификация и использование для приготовления диагностической О139 антисыворотки. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000; 1:34–7.Chekhovskaya G.V., Shchelkanova E.Yu., Smirnova N.I. [Noncapsular Vibrio cholerae mutants, O139 serotype: construction, identification and utilization for diagnostic O139 anti-serum preparation]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2000; 1:34–7.Аkesson M., Hagander P., Axelsson J.P. Probing control of fed-batch cultures: Analysis and tuning. Control Engineering Practice. 2001; 9(7):709–23.А kesson M., Hagander P., Axelsson J.P. Probing control of fedbach cultures: Analysis and tuning. Control Engineering Practice. 2001; 9(7):709–23.Craig G.P. Preparation of the vascular permeability factor of Vibrio cholera. J. Bacteriol. 1966; 92(3):793–5.Craig G.P. Preparation of the vascular permeability factor of Vibrio cholera. J. Bacteriol. 1966; 92(3):793–5.Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence II. Infect. Immun. 1971: 7(5):611–8.Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence II. Infect. Immun. 1971: 7(5):611–8.Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence III. Infect. Immun. 1983; 7(4):567–72.Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence III. Infect. Immun. 1983; 7(4):567–72.Germanier R., Forer E., Varallyay S., Inderbitzin T.M. Preparation of a Purified Antigenic Cholera Toxoid. Infect. Immun. 1976; 13(6):1692–8.Germanier R., Forer E., Varallyay S., Inderbitzin T.M. Preparation of a Purified Antigenic Cholera Toxoid. Infect. Immun. 1976; 13(6):1692–8.De Мary L., Andersson L., Hagander P. Probing control of glucose feeding in Vibrio cholerae cultivation. Bioprocess Biosyst. Eng. 2004; 25(4):221–8.De Мary L., Andersson L., Hagander P. Probing control of glucose feeding in Vibrio cholerae cultivation. Bioprocess Biosyst. Eng. 2004; 25(4):221–8.Evans D.J., Richardson S.H. In vitro production of choleragen and the vascular permeability factor by Vibrio cholera. J. Bacteriol. 1968; 96(1):126–30.Evans D.J., Richardson S.H. In vitro production of choleragen and the vascular permeability factor by Vibrio cholera. J. Bacteriol. 1968; 96(1):126–30.Fedorka-Gray P.J. Production of cholerae toxin-like toxin by vibriomimicus and non-O1 Vibrio cholera: Batch culture conditions for optimum yields and isolation of hypertoxigenic lincomycin resistant mutans. Infect. Immun. 1983; 42(2):501–9.Fedorka-Gray P.J. Production of cholerae toxin-like toxin by vibriomimicus and non-O1 Vibrio cholera: Batch culture conditions for optimum yields and isolation of hypertoxigenic lincomycin resistant mutans. Infect. Immun. 1983; 42(2):501–9.Finkelstein R.A., LosPalluto J.J. Patogenesis of experimental cholera-prepation and isolation of choleragen and choleragenoid. J. Exp. Med. 1969; 130(1):185–203.Finkelstein R.A., LosPalluto J.J. Patogenesis of experimental cholera-prepation and isolation of choleragen and choleragenoid. J. Exp. Med. 1969; 130(1):185–203.Finkelstein R.A., LosPalluto J.J. Production of highly purified choleragen and choleragenoid. J. Infect. Dis. 1970; 121:63–72.Finkelstein R.A., LosPalluto J.J. Production of highly purified choleragen and choleragenoid. J. Infect. Dis. 1970; 121:63–72.Finkelstein R.A. Patogenesis of experimental cholera: biologic activities of purified procholeragen A. J. Immunol. 1966; 96(3):440–9.Finkelstein R.A. Patogenesis of experimental cholera: biologic activities of purified procholeragen A. J. Immunol. 1966; 96(3):440–9.Jang H., Hyo S.K., Jeong A.K. Improved Purification Process for Cholera Toxin and its Application to the Quantification of Residual Toxin in Cholera Vaccines. J. Microbiol. Biotechnol. 2009; 19(1):108–12.Jang H., Hyo S.K., Jeong A.K. Improved Purification Process for Cholera Toxin and its Application to the Quantification of Residual Toxin in Cholera Vaccines. J. Microbiol. Biotechnol. 2009; 19(1):108–12.Navratil M., Norberg A., Lembren L., Mandenius C.F. On-line multi-analyzer monitoring of biomass, glucose and acetate for growth rate control of a Vibrio cholerae fed-batch cultivation. J. Biotechnol. 2005; 115(1):67–79.Navratil M., Norberg A., Lembren L., Mandenius C.F. On-line multianalyzer monitoring of biomass, glucose and acetate for growth rate control of a Vibrio cholerae fed-batch cultivation. J. Biotechnol. 2005; 115(1):67–79.Nandi S., Maiti D., Saha A., Bhadra R.K. Genesis of variants of Vibrio cholerae O1 biotype El Tor: role of the CTXphi array and its position in the genome. Microbiology. 2003; 149(1):89–97.Nandi S., Maiti D., Saha A., Bhadra R.K. Genesis of variants of Vibrio cholerae O1 biotype El Tor: role of the CTXphi array and its position in the genome. Microbiology. 2003; 149(1):89–97.Osek J., Lebens M., Holmgren J. Improved medium for largescale production of recombinant cholera toxin B subunit for vaccine purposes. J. Microbiol. Methods. 1995; 24:117–23.Osek J., Lebens M., Holmgren J. Improved medium for largescale production of recombinant cholera toxin B subunit for vaccine purposes. J. Microbiol. Methods. 1995; 24:117–23.Panda A.K., Ghorpade A., Mukhopadhyay A. High cell density fermentation of recombinant Vibrio cholerae for production of B subunit of the Escherichia coli enterotoxin. Biotechnol Bioeng. 1995; 45:245–50.Panda A.K., Ghorpade A., Mukhopadhyay A. High cell density fermentation of recombinant Vibrio cholerae for production of B subunit of the Escherichia coli enterotoxin. Biotechnol Bioeng. 1995; 45:245–50.Pike P., Chandler C. Patial purification and properties of somatic antigen spontaneously released from Vibrio cholerae. Infeсt. Immun. 1975; 12(1): 187–92.Pike P., Chandler C. Patial purification and properties of somatic antigen spontaneously released from Vibrio cholerae. Infeсt. Immun. 1975; 12(1): 187–92.Richardson S.H. Factors influencing in vitroskin permeability factor production Vibrio cholerae. J. Bacteriol. 1969; 100(1):27–34.Richardson S.H. Factors influencing in vitroskin permeability factor production Vibrio cholerae. J. Bacteriol. 1969; 100(1):27–34.Ravichandran M., Ali S.A., Rashid N.H. Vibrio cholerae strains VCUSM1 and VCUSM4, method of producing same, and vaccine derivates thereof. Patent 7838016 US, Nov. 23, 2010. United States Patent.Ravichandran M., Ali S.A., Rashid N.H. Vibrio cholerae strains VCUSM1 and VCUSM4, method of producing same, and vaccine derivatesthereof. Patent 7838016 US, Nov. 23, 2010. United States Patent.Riesenberg D., Guthke R. High-cell-density cultivation of microorganisms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999; 51:422–30.Riesenberg D., Guthke R. High-cell-density cultivation of microorganisms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999; 51:422–30.Spira W.M., Fedorka-Gray P.J. Enterotoin production by Vibrio cholerae and Vibrio mimicus grown in continuous culture wich microbial cell recycle. Appl. Environ. Microbiol. 1983; 46:704–9.Spira W.M., Fedorka-Gray P.J. Enterotoin production by Vibrio cholerae and Vibrio mimicus grown in continuous culture wich microbial cell recycle. Appl. Environ. Microbiol. 1983; 46:704–9.Spira W.M., Fedorka-Gray P.J. Production of cholerae toxin-like toxin by vibriomimicus and non-O1 Vibrio cholerae: Batch culture conditions for optimum yields and isolation of hypertoxigenic lincomycin resistant mutans. Infect. Immun. 1983; 42(2):501–9.Spira W.M., Fedorka-Gray P.J. Production of cholerae toxin-like toxin by vibriomimicus and non-O1 Vibrio cholerae: Batch culture conditions for optimum yields and isolation of hypertoxigenic lincomycin resistant mutans. Infect. Immun. 1983; 42(2):501–9.Sanchez J., Holmgren J. Recombinant system for overexpression of cholera toxin B subunit in Vibrio cholerae as a basis for vaccine development. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989; 86:481–5.Sanchez J., Holmgren J. Recombinant system for overexpression of cholera toxin B subunit in Vibrio cholerae as a basis for vaccine development. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989; 86:481–5.Suzuki H., Kishimoto M., Kamoshita T. On-line control of feeding of medium components to attain high cell density. Bioprocess Eng. 2000; 22:433–40.Suzuki H., Kishimoto M., Kamoshita T. On-line control of feeding of medium components to attain high cell density. Bioprocess Eng. 2000; 22:433–40.Walle M. van de, Fass R., Shiloach J. Production of cholera toxin subunit B by a mutant strain of Vibrio cholerae. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990; 33:389–94.Walle M. van de, Fass R., Shiloach J. Production of cholera toxin subunit B by a mutant strain of Vibrio cholerae. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990; 33:389–94.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.