Использование реакции латекс-агглютинации в ускоренном определении патогенных буркхольдерий

Цель. Разработка препарата для идентификации Burkholderia pseudomallei и Burkholderia mallei, выращенных на плотной питательной среде, на этапе экспресс-диагностики патогенных булькхольдерий. Материалы и методы. За основу взят метод латекс-агглютинации, в котором в качестве носителя агглютининов применяют взвеси полимеров. Агент, распознающий антиген клеток-мишеней, представлял собой моноклональные антитела, направленные к эпитопам гликопротеина капсулы возбудителя мелиоидоза. жидкий латексный диагностикум готовили из взвеси полимерного полистирола с диаметром микросфер 0,8-1,1 мкм, поверхность которого нагружали предварительно подобранной концентрацией антител. В работе использовали типичные штаммы возбудителей мелиоидоза и сапа с полноценной антигенной структурой, а также близкородственные и гетерологичные микроорганизмы. Из бактериальных культур готовили взвеси с концентрацией 1,0·10⁹ м.к./мл. Реакцию проводили на подогретых до 37 °С стеклянных чашках Петри с визуальной регистрацией результатов по 4-крестовой системе. Результаты и обсуждение. Реакция латекс-агглютинации основана на агглютинации микробных клеток (B. pseudomallei и B. mallei) моноклональными антителами, узнающими эпитопы гликопротеина капсулы патогенных буркхольдерий. проверено 14 моноклональных антител различных по классу и эпитопной направленности. определяющими факторами для выбора антитела являлись специфичность их в реакции агглютинации со штаммы возбудителей мелиоидоза и сапа, а также сохранение агглютинирующей активности после иммобилизации на полимерном носителе. в итоге, в качестве агента, распознающего антиген клеток-мишеней, выбрали моноклональные антитела иммуноглобулина класса G к эпитопам гликопротеина капсулы (АГ 8) возбудителя мелиоидоза. в результате после смешивания проб с диагностикумом в образцах, содержащих бактерии B. pseudomallei и B. mallei, через 10-15 мин образовывался агглютинат, видимый невооруженным глазом. Пробы с близкородственными и гетерологичными микроорганизмами агглютината не имели и регистрировались как отрицательные. Полученный диагностикум характеризуется высокой специфичностью.

1. Gilad J., Schwartz D., Amsalem Y Clinical features and laboratory diagnosis of infection with the potential bioterrorism agents Burkholderia mallei and Burkholderia pseudomallei. Int. J. of Biomed. Sci. 2007; 3:144-52. PMID: 23675037. PMCID: PMC3614684.

2. Van Zandt K.E., Greer M.T., Gelhaus H.C. Glanders: an overview of infection in humans. Orphanet. J. RareDis. 2013; 8:131. DOI: 10.1186/1750-1172-8-131.

3. Dance D. Treatment and prophylaxis of melioidosis. Int. J. Antimicrob. Agents. 2014; 43(4):310-18. DOI: 10.1016/j.ijantimicag.2014.01.005.

4. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.

5. Hoffmaster A.R., AuCoin D., Baccam P., Baggett H.C. Baird R., Bhengsri S., Blaney D.D., Brett P.J., Brooks T.J., Brown K.A., Chantratita N., Cheng A.C., Dance D.A., Decuypere S., Defenbaugh D., Gee J.E., Houghton R., Jorakate P., Lertmemongkolchai G., Limmathurotsakul D., Merlin T.L, Mukhopadhyay C., Norton R., Peacock S.J., Rolim D.B., Simpson A.J., Steinmetz I., Stoddard R.A., Stokes M.M., Sue D., Tuanyok A., Whistler T., Wuthiekanun V, Walke H.T. Melioidosis diagnostic workshop, 2013. Emerg. Infect. Dis. 2015; 21(2). DOI: 10.3201/eid2102.141045.

6. Zakharova I.B., Lopasteyskaya YA., Toporkov A.V., Viktorov D.V Influence of biochemical features of Burkholderia pseudomallei strains on identification reliability by Vitek 2 system. J. Glob. Infect. Dis. 2018; 10(1):7-10. DOI: 10.4103/jgid.jgid39_17.

7. Hantrakun V, Thaipadungpanit J RongkardP., Srilohasin P., Amornchai P., Langla S., Mukaka M., Chantratita N., Wuthiekanun V, Dance D.A.B., Day N.P.J., Peacock S.J., Limmathurotsakul D. Presence of B. thailandensis and B. thailandensis expressing B. pseudomallei-like capsular polysaccharide in Thailand, and their associations with serological response to B. pseudomallei. PLoS Negl. Trop Dis. 2018; 12(1):e0006193. DOI: 10.1371/journal.pntd.0006193.

8. Peeters M., Chung P., Lin H., Mortelmans K., Phe C., San C., Kuijpers L.M.F., Teav S., Phe T., Jacobs J. Diagnostic accuracy of the InBiOS AMD rapid diagnostic test for the detection of Burkholderia pseudomallei antigen in grown blood culture broth. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2018; 37(6):1169-77. DOI: 10.1007/s10096-018-3237-3.

9. Бровкина А.Н. Разработка метода и тест-системы выявления бактерий рода Salmonella на основе латекс-агглютинации. Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. 2011; 72:516-24.

10. Волина Е.Г., Слугин И.В., Верховский О.А., Яшина Н.В., Шкарлат П.Е., Прокопов Н.И., Грицкова И.А. Способ приготовления лептоспирозного диагностикума для постановки реакции латекс-агглютинации. Патент РФ № 2177617, опубл. 27.12.2001.

11. Хлынцева А.Е., Лунева Н.М., Белова Е.В., Дятлов И.А., Шемякин И.Г. Разработка и испытания диагностикума на основе моноклональных антител для определения спор возбудителя сибирской язвы в реакции латекс-агглютинации. Проблемы особо опасных инфекций. 2011; 4(110):71-5. DOI: 10.21055/0370-1069-2011-4(110)-71-75.