Выявление маркеров лихорадки денге методом ДОТ-иммуноанапиза

Цель. Разработка диагностического набора для выявления маркеров лихорадки денге на всех стадиях заболевания. Материалы и методы. в сыворотках крови от пациентов с подозрением на лихорадку денге проводили выявление антигена NS1 и специфических IgM и IgG методом иммуно-хроматографии, методом дот-иммуноанализа, иммуноферментного анализа, с использованием коммерческих тест-систем, а также экспериментальным набором «Денге-спектр». Результаты и обсуждение. разработан диагностический набор для выявления маркеров лихорадки денге, основанный на механизме одновременного дифференциального выявления белка NS1 возбудителя и антител класса IgM и класса IgG с образованием специфических комплексов между маркерами из исследуемого образца и известными иммунореагентами захвата, в определенном порядке дискретно зафиксированными на плотной подложке. Установлено, что эффективное выявление специфических IgG и IgМ к вирусу денге может быть осуществлено по схеме, при которой захват IgG производится на суммарном антигене вируса с детекцией с помощью меченных антител против IgG человека, а выявление IgМ осуществляется захватом на антителах против IgМ человека с детекцией меченным суммарным вирусным антигеном. выявление белка NS1 вируса денге может быть выполнено с использованием подложки с иммобилизованными моноклональными антителами к NS1 и иммунозоля золота, связанного с антителами к NS1. при такой постановке дот-анализа лимит определения рекомбинантного аналога белка NS1 составил 100 нг/мл. сравнительные испытания набора на панели клинических образцов показали хорошее совпадение результатов с данными, полученными с использованием импортных коммерческих тестов. разработанный набор может найти применение для скрининга клинических образцов, как в лабораторных, так и в полевых условиях.

1. Guzman M.G., Harris E. Dengue. Lancet. 2015; 385(9966):453-65. DOI: 10.1016/S0140-6736(14)60572-9.

2. Monteiro D.C.S, Souza N.V., Amaral J.C., Lima K.B., Araujo F.M.C., Ramalho I.L.C., Martins V.E.P., Colares J.K.B., Cavalcanti L.P.G., Lima D.M. Dengue: 30 years of cases in an endemic area. Clinics (SaoPaulo). 2019; 74:e675. DOI: 10.6061/clinics/2019/e675.

3. Guo C., Zhou Z., Wen Z., Liu Y., Zeng C., Xiao D., Ou M., Han Y, Huang S., Liu D., Ye X., Zou X., Wu J., Wang H., Zeng E.Y., Jing C., Yang G. Global Epidemiology of Dengue Outbreaks in 1990-2015: A Systematic Review and Meta-Analysis. Front. Cell. Infect. Microbiol. 2017; 7:317. DOI: 10.3389/fcimb.2017.00317.

4. Резолюция Всемирной ассамблеи здравоохранения WHA58.3 Пересмотр Международных медико-санитарных правил. [Электронный ресурс]. URL: http://apps.who.int/gb/archive/e/e_wha58.html (дата обращения 13.09.2019).

5. Sergeeva E.I., Ternovoi V.A., Chausov E.V., Berillo S.A., Demina O.K., Shikov A.N., Plasunova I.V, Kartashov M.J., Agafonov A.P. Imported cases of dengue fever in Russia during 2010-2013. Asian Pac. J. Trop. Med. 2015; 8(2):90-3. DOI: 10.1016/S1995-7645(14)60194-2.

6. Ganushkina L.A., Patraman I.V., Rezza G., Migliorini L., Litvinov S.K., Sergiev V.P. Detection ofAedes aegypti, Aedes albopictus, and Aedes koreicus in the Area of Sochi, Russia. Vector Borne ZoonoticDis. 2016; 16(1):58-60. DOI: 10.1089/vbz.2014.1761.

7. Ларичев В.Ф., Сайфуллин М.А., Акиншина Ю.А., Хуторецкая Н.В., Бутенко А.М. Завозные случаи арбовирусных инфекций в Российской Федерации. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012; (1):35-8.

8. Slon Campos J.L., Poggianella M., Marchese S., Mossenta M., Rana J., Arnoldi R, Bestagno M., Burrone O.R. DNA-immunisation with dengue virus E protein domains I/II, but not domain III, en¬hances Zika, West Nile and Yellow Fever virus infection. PLoS One. 2017; 12L7):e0181734. DOI: 10.1371/journal.pone.0181734.

9. Бахметьева С.В., Пуховская Н.М., Здановская Н.И., Иванов Л.И., Белозерова Н.Б., Уткина О.М., Журавлев Я.А., Ларичев В.Ф. Этиологическая расшифровка завозных случаев тропических лихорадок в дальневосточном регионе. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2014; 25:91-3.

10. Keasey S.L., Pugh C.L., Jensen S.M.R., Smith J.L., Hontz R.D., Durbin A.P., Dudley, D.M., O’Connor D.H., Ulrich R.G. Antibody Responses to Zika Virus Infections in Environments of Flavivirus Endemicity. Clin. Vaccine Immunol. 2017; 24(4):pii: e00036-17. DOI: 10.1128/CVI.00036-17.

11. Lindenbach B.D., Murray C.L., Thiel H-J., Rice C.M. Flaviviridae. In: Knipe D.M., Howley P.M., editors. Fields virology. 6th ed. Lippincott Williams & Wilkins; 2013. P. 712-46.

12. Kuhn R.J., Zhang W., Rossmann M.G., Pletnev S.V., Corver J., Lenches E., Jones C.T., Mukhopadhyay S., Chipman P.R., Strauss E.G., Baker T.S., Strauss J.H. Structure of dengue virus: implications for flavivirus organization, maturation, and fusion. Cell. 2002; 108(5):717-25. DOI: 10.1016/s0092-8674i02)00660-8.

13. Balsitis S.J., Williams K.L., Lachica R., Flores D., Kyle J.L., Mehlhop E., Johnson S., Diamond M.S., Beatty P.R., Harris E. Lethal antibody enhancement of dengue disease in mice is prevented by Fc modification. PLoS Pathog. 2010; 6(2):e100070. DOI: 10.1371/journal.ppat.1000790.

14. Ho L.J., Wang J.J., Shaio M.F., Kao C.L., Chang D.M., Han S.W., Lai J.H. Infection of human dendritic cells by dengue virus causes cell maturation and cytokine production. J. Immunol. 2001; 166(3):1499-506. DOI: 10.4049/jimmunol.166.3.1499.

15. Zellweger R.M., PrestWood T.R., Shresta S. Enhanced infection of liver sinusoidal endothelial cells in a mouse model of antibody-induced severe dengue disease. Cell Host Microbe. 2010; 7(2):128-39. DOI: 10.1016/j.chom.2010.01.004.

16. Акиншина Ю.А., Ларичев В.Ф., Сайфуллин М.А., Марданлы С.Г., Бутенко А.М. Сравнительное применение экспериментальной ЙФА-тест-системы НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского «ИФА-IGM-ДEНГE» (Россия) и фирмы Euroimmun ANTI-DENGUE VIRUS ELISA IGM (Германия) для серодиагностики лихорадки денге. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2017; 22(1):4-8. DOI: 10.18821/1560-9529-2017-22-1-4-8.

17. Poltavchenko A.G., Zaytzev B.N., Ersh A.V., Korneev D.V., Taranov O.S., Filatov P.V., Nechitaylo O.V. The selection and optimization of the detection system for self-contained multiplexed dot-immunoassay. J. Immunoassay Immunochem. 2016; 37(5):540-554. DOI: 10.1080/15321819.2016.1174134.

18. Poltavchenko A.G., Zaitsev B.N., Ersh A.V., Taranov O.S., Korneev D.V., Nikonov A.M. Selection of Substrate Material for Protein Matrices. Prot. Met. Phys. Chem. Surf. 2016; 52(2):301-7. DOI: 10.1134/S2070205116020234.

19. Niu C., Huang Y, Wang M., Huang D., Li J., Huang S., Yang F., Wan C., Zhang R. Differences in the Transmission of Dengue Fever by Different Serotypes of Dengue Virus. Vector Borne Zoonotic Dis. 2019. DOI: 10.10g9/vbz.2019.2477.