Конструирование диагностикума полимерного холерного антигенного на основе липополисахарида Vibrio cholera О1 серогруппы

Представители рода Vibrio cholerае отличаются структурой липополисахарида, в частности его О-полисахаридных цепей (О-антиген), определяющей серологическую специфичность вибрионов. в настоящее время для получения препарата липополисахарида используется водно-фенольный метод. однако данная методика относится к жестким химическим методам, приводит к изменению исходной молекулярной организации биополимера, нарушая его структуру и биологические свойства. современные технологии при разработке диагностических препаратов для иммуносуспензионной реакции агломерации объемной позволяют получать синтетические носители с различными реакционными группами на поверхности частиц, способными связывать антигены/антитела. Цель исследования - создание холерного антигенного диагностикума на основе липополисахарида Vibrio cholerae О1 серогруппы. Материалы и методы. В качестве сенситина использован липополисахарид, полученный с помощью авторской модификации метода ферментативной очистки из клеточных оболочек холерного вибриона с использованием ультразвуковой дезинтеграции. Результаты и обсуждение. Полученный сенситин содержит небольшие примеси белка (1,5 %) и нуклеиновых кислот (0,1 %). Диагностический препарат характеризуется высокой аналитической чувствительностью в реакции агломерации объемной с холерными коммерческими и экспериментальными кроличьими сыворотками к Vibrio cholerae О1 серогруппы (1:640 - 1:5120) и аналитической специфичностью (диагностикум не взаимодействует с гетерологичными сыворотками, с сыворотками к возбудителям острых кишечных инфекций, а также с сыворотками здоровых доноров). сконструирован диагностикум полимерный холерный антигенный, предназначенный для выявления антител к холерному липополисахариду в сыворотках крови больных, переболевших, подозрительных на заболевание или вакцинированных людей.

1. Faruque S.M., Albert M.J., Mekalanos J.J. Epidemiology, genetics and ecology of toxigenic Vibrio cholerae. Microbiol. Molecul. Biol. Rev. 1998; 62(4):1301-14. PMID: 9841673. PMCID: PMC98947.

2. Гюлазян H.M., Белая О.Ф Малов В.А., Пак С.Г., Волчакова Е.В. Липополисахариды/эндотоксины грамотрицательных бактерий: роль в развитии интоксикации. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2014; 19(2):11-6.

3. Leung D.T., Uddin T., Xu P., AktarA., Johnson R.A., Rahman M.A., Alam M.M., Bufalo M.K., Eckhoff G., Wu-Freeman Y, Yu Y, Sultana T., Khanam F., Saha A., Chowdhury F., Khan A.I., Charles R.C., LaRocque R.C., Harris J.B., Calderwood S.B., Covac P, Qadri F., Ryan E.T. Immune responses to the O-specific polysaccharide antigen in children who received a killed oral cholera vaccine compared to responses following natural cholera infection in Bangladesh. Clin. Vaccine Immunol. 2013; 20(6):780-8. DOI: 10.1128/CVI.00035-13.

4. Uddin T., Aktar A., Xu P., Johnson R.A., Rahman M.A., Leung D.T., Afrin S., Akter A., Alam M.M., Rahman A., Chowdhuty F., Khan A.I., Bhuiyan T.R., Bufano M.K., Rashu R., Yu Y., Wu-Freeman Y., Harris J.B., LaRocque R.C., Charles R.C., Covac P, Calderwood S.B., Ryan E.T., Qadri F. Immune responses to O-spesific polysaccharide and lipopolysaccharide of Vibrio cholerae O1 Ogawa in adult Bangladeshi recipients of an oral killed vaccine and comparison to responses in patients with cholera. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2014; 90(5):873-81. DOI: 10.4269/ajtmh.13-0498.

5. Darveau R.P., Hancock R.E. Procedure for isolation of bac-terial lipopolysaccharides from both smooth and rough Pseudomonas aeruginosa and Salmonella thyphimurium strains. J. Bacteriol. 1983; 155(2):831-8. PMID: 6409884, PMCID: PMC217756.

6. Полунина Т.А., Гусева Н.П., Кузьмиченко И.А., Девдариани З.Л., Заднова С.П., Степанов А.В., Киреев М.Н. Способ получения липополисахарида возбудителя чумы. Патент РФ № 2483112, опубл. 27.05.2013 г.

7. Марков Е.Ю., Николаев В.Б. Способ получения бактериальных липополисахаридов. Патент РФ № 2051969, опубл. 10.01.1996 г. Бюлл. № 1.

8. Westphal V.O., Luderitz O., Bister F. Uber die Extraktion von Bacterien mit Phenol/Wasser. Zeitschrift fur Naturforschung B. 1952; 7(3):148-55. DOI: 10.1515/znb-1952-0303.

9. Galanos C., Luderitz O., Westphal O. A New method for the extraction of R lipopolysaccharides. Eur. J. Biochem. 1969; 9(2):245-9. DOI: 10.1m/j.1432-1033.1969.tb00601.x.

10. Ломов Ю.М., Терентьев А.Н., Карбышев Г.Л. Перспективы создания препаратов для индикации возбудителей О0И и других актуальных инфекций. В кн.: Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М.: ОО0 «Санэпидмедиа»; 2007; С. 60-1.

11. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. изд. 2-е, переработанное и дополненное. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.

12. Lowry O.H., Rosebrough N.J. Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951; 193(1):265-75.

13. определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах. оФС. 1.7.2.0018.15 (общая фармакопейная статья). [Электронный ресурс]. URL: https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-7-2-0018-15-opredelenie-nukleinovyh-kislot-po-metodu-spirina-v-immunobiologicheskih-lekarstvennyh-preparatah/ofs-1-7-2-0018-15-opredelenie-nukleinovyh-kislot-po-metodu-spirina-v-immunobiologicheskih-lekarstvennyh-preparatah/ (дата обращения 15.06.2019).

14. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680-5. DOI: 10.1038/227680a0/.

15. Ramamurthy T., Das B., Chakraborty S., Mukhopadhyay A.K., Sack D.A. Diagnostic techniques for rapid detection of Vibrio cholerae O1/O139. Vaccine. 2019; pii: S0264-410X(19)31020-5. DOI: 10.1016/j.vaccine.2019.07.099.

16. Власов В.В. Эпидемиология: учебное пособие для вузов. М.: «ГЭОТАР-МЕД»; 2006. 462 с.