Усовершенствование технологии концентрирования микробных клеток в производстве вакцины чумной живой, таблетки для рассасывания

Цель работы – усовершенствование технологии концентрирования микробных клеток в производстве вакцины чумной живой, таблетки для рассасывания.

Материалы и методы. Использовали вакцинный штамм Yersinia pestis ЕV линии НИИЭГ. Для глубинного выращивания нативной культуры чумного микроба применяли реактор БИОР-0,25 с автоматизированной системой управления. Концентрат микробной взвеси получали методом микрофильтрации с применением установок АСФ-009 и АСФ-020. Содержание живых микробных клеток определяли циторефрактометрическим методом. Оценку устойчивости Y. pestis штамма ЕV к технологическим факторам осуществляли методом фотометрической регистрации изменений оптической плотности суспензии бактерий в процессе литической реакции клеток на воздействие додецилсульфата натрия. Физико-химические и иммунобиологические свойства вакцины чумной живой, таблетки для рассасывания, определяли в соответствии с ФС.3.3.1.0021.15 Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV издания.

Результаты и обсуждение. Конструктивные особенности внедренного оборудования позволили осуществлять концентрирование микробной суспензии методом мембранной фильтрации, используя в качестве емкости промежуточного хранения реактор БИОР-0,25, что дало возможность исключить три технологические операции. Общая концентрация микробов в суспензии, полученной регламентным и усовершенствованным способами, составляла не менее 150 млрд м.к./мл. Различные гидродинамические режимы в рабочих полостях фильтрующих установок АСФ‑009 и АСФ-020 при концентрировании не повлияли на морфометрические свойства и устойчивость микробных культур к технологическим факторам. На основании экспериментальных данных составлен материальный баланс процесса мембранной фильтрации. Выявлено, что выход концентрата с 1 л нативной культуры по усовершенствованной технологии достигал 0,13 л, продолжительность процесса сократилась до 5 ч, а выход готового препарата за один производственный цикл увеличился в три раза. Таким образом, усовершенствована технология концентрирования микробных клеток Y. pestis при производстве таблетированной формы чумной живой вакцины. 

1. Микшис Н.И., Кутырев В.В. Современное состояние проблемы разработки вакцин для специфической профилактики чумы. Проблемы особо опасных инфекций. 2019; 1:50–63. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-1-50-63.

2. Воробьев А.А., Лебединский В.А. Массовые способы иммунизации. М.: Медицина; 1977. 255 с.

3. Лещенко А.А., Тетерин В.В., Лазыкин А.Г., Ежов А.В., Мохов Д.А., Бирюков В.В., Багин С.В., Логвинов С.В. Экспериментальное обоснование возможности получения концентрата микробных клеток штамма Yersinia pestis EV методом микрофильтрации. Биопрепараты. 2014; 1:31–5.

4. Комиссаров А.В., Никифоров А.К., Алешина Ю.А., Еремин С.А., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Крайнова А.Г. Способ концентрирования нативных холерогенаанатоксина и О-антигена Vibrio cholerae О1 классического биовара штамма 569 в серовара Инаба. Патент РФ № 2451522 С1, опубл. 27.05.2012. Бюл. № 15.

5. Комиссаров А.В., Еремин С.А., Ульянов А.Ю., Алешина Ю.А., Никифоров А.К., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка экспериментальной технологии концентрирования протективных антигенов штамма Vibrio cholerae 569В Инаба методом тангенциальной ультрафильтрации. Проблемы особо опасных инфекций. 2011; 3:75–7. DOI: 0.21055/0370-10692011-3(109)-75-77.

6. Мембранные кассетные модули. ЗАО «Владисарт» – российский производитель фильтрационного оборудования на основе мембран разных видов. [Электронный ресурс]. URL: https://vladisart.ru/products/filtruyschie-elementy/filtr-mkm.html. (дата обращения 20.08.2020).

7. Ежов А.В., Садовой И.Н., Бирюков В.В., Мохов Д.А., Багин С.В., Чернядьев А.В., Коротышев О.В., Тетерин В.В. Возможность использования метода микрофильтрации в технологии вакцины чумной живой сухой. В кн.: Материалы Всероссийской научной конференции «Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология». Киров: ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России»; 2008. Вып. 1. С. 313–6.

8. Дуняшева Т.Ю., Серебрякова Е.В., Ежов А.В., Тетерин В.В. Способ прогнозирования устойчивости клеток чумного микроба штамма EV к лиофилизации. Патент РФ № 2380420 С2, опубл. 27.01.2010. Бюл. № 3.

9. Краснюк И.И., Михайлова Г.В., редакторы. Практикум по технологии лекарственных форм. М.: Академия; 2007. 432 с.

10. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа; 1990. 351 с.

11. Ураков Н.Н., Волков В.Я., Боровик Р.В. Функциональное состояние и механизмы повреждения микроорганизмов в процессе приготовления бактериальных препаратов. Биотехнология. 1988; 4(4):420–32.

12. Фихман Б.А. Микробиологическая рефрактометрия. М.: Медицина; 1967. 280 с.