Морфотипы культур Burkholderia pseudomallei, формирующиеся in vitro в условиях стресса

Цель заключалась в определении разнообразия морфотипов, образующихся in vitro из исходного морфологического варианта Burkholderia pseudomallei 110 в условиях стрессового воздействия, и исследовании у них некоторых фенотипических свойств. Материалы и методы. В работе использован вирулентный штамм B. pseudomallei 110 австралийского серотипа. Культуры буркхольдерий соединяли с аксенической культурой Tetrahymena pyriformis в соотношении 100:1 в LB бульоне и стерильной речной воде и инкубировали при 28 °C; пассаж монокультур и культур в клетках тетрахимен повторяли с периодичностью 3–4 сут. Морфотипы идентифицировали на среде Эшдауна после культивирования 3–4 сут при 32 °C и классифицировали фотографии колоний, основываясь на схеме N.Chantratita et al. У всех морфотипов определяли активность внеклеточных ферментов и вирулентность на золотистых хомячках. Результаты и выводы. Идентифицировано семь морфотипов колоний B. pseudomallei 110. Четыре из них, обладавшие признаками морфотипов I, III, IV и VII, описанных N.Chantratita et al., обозначены как Chl (Chantratita like variant). Исследование морфотипов в различных образцах монокультур и ассоциированных с T. pyriformis обнаружило их варьирование в зависимости от среды культивирования (LB бульон или вода), а также различное соотношение в отдельных пробах. Наибольшее количество морфологических вариантов (4 из 7) образовывалось при пассаже монокультур B. pseudomallei 110 в LB бульоне; в воде исходная культура почти целиком (95 %) трансформировалась в морфотип I Chl. В других условиях культивирования формировался доминирующий V морфотип, который при пассаже в клетках тетрахимен сочетался преимущественно с I Chl. Морфотипы отличались продукцией внеклеточных ферментов, подвижностью и снижением вирулентности.

Burkholderia pseudomallei, Tetrahymena pyriformis, морфотипы, фенотипические свойства

1. Белов А.Б., Куликалова Е.С. Сапронозы: экология возбудителей, эпидемиология, терминология и систематика. Эпидемиол. и вакцинопроф. 2016; 1(86):5–16.

2. Захарова И.Б., Романова А.В., Тетерятникова Н.Н., Замараев В.С., Викторов Д.В. Молекулярное типирование и анализ полиморфизма генов β-лактамаз патогенных видов Burkholderia. Вест. Волгоградского гос. мед. ун-та. 2012; 2(42):98–101.

3. Ashdown L. R. An improved screening technique for isolation of Pseudomonas pseudomallei from clinical specimens. Pathology. 1979; 11(2):293–7.

4. Chantratita N., Wuthiekanun V., Boonbumrung K., Tiyawisutsri R., Vesaratchavest M., Limmathurotsakul D., Chierakul W., Wongratanacheewin S., Pukritiyakamee S., White N. J. Biological relevance of colony morphology and phenotypic switching by Burkholderia pseudomallei. J. Bacteriol. 2007; 189:807–17. DOI: 10.1128/JB.01258-06.

5. Chen Yao-Shen, Lin Hsi-Hsun, Hung Chih-Chang, Mu Jung-Jung, Hsiao Yu-Shan and Chen Ya-Lei. Phenotypic characteristics and pathogenic ability across distinct morphotypes of Burkholderia pseudomallei DT. Microbiol. Immunol. 2009; 53:184–9. DOI: 10.1111/j.1348-0421.2008.00105.x.

6. Gierok P., Kohler C., Steinmetz I., Lalk M. Burkholderia pseudomallei colony morphotypes show a synchronized metabolic pattern after acute infection. PLOS Negl. Trop. Dis. 2016;10(3):e0004483. DOI: 10.1371/journal.pntd.0004483.

7. Howard K., Inglis T.J. Novel selective medium for isolation of Burkholderia pseudomallei. J. Clin. Microbiol. 2003; 41:3312–16.

8. Inglis T.J., Sagripanti J.L. Environtmental factors that affect the survival and persistance of Burkholderia pseudomallei. Appl. Environ. Microbiol. 2006; 72:6865–75. DOI: 10.1128/AEM.01036-06.

9. Lee S.H., Chong C.E., Lim B.S., Chai S.J., Sam K.K., Mohamed R. Nathan S. Burkholderia pseudomallei animal and human isolates from Malaysia exhibit different phenotypic characteristics. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2007; 58:263–70. DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2007.01.002.

10. Tandhavanant S., Thanwisai A., Limmathurotsakul D., Korbsrisate S., Day N. P., Peacock S. J., Chantratita N. Effect of colony morphology variation of Burkholderia pseudomallei on intracellular survival and resistance to antimicrobial environments in human macrophages in vitro. BMC Microbiol. 2010; 10:303. DOI: 10.1186/1471-2180-10-303.