Опыт длительного хранения штаммов возбудителя туляремии

Поддержание микроорганизмов в жизнеспособном состоянии при сохранении исходных практически важных свойств является важнейшей проблемой микробиологии. Целью настоящих исследований стало изучение сохранности основных биологических свойств лиофилизированных культур 18 штаммов разных подвидов возбудителя туляремии из коллекции микробных культур филиала ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (г. Киров) с различными условиями предварительной подготовки (с анимализацией через организм морских свинок и без нее). Сроки хранения микробов при отрицательных температурах составили от 5 до 50 лет. Материалы и методы. В соответствии с общепринятыми методиками определялась выживаемость микробов в процессе высушивания и последующего хранения, оценивались и сравнивались с паспортными данными морфологические, культуральные, биохимические, антигенные, патогенные свойства культур штаммов F. tularensis с различными сроками хранения и условиями подготовки к лиофилизации. Результаты и обсуждение. Проведенные исследования показали, что, при условии предварительной стабилизации свойств штаммов возбудителя туляремии методом анимализации, хранение в лиофилизированном состоянии при отрицательных температурах под вакуумом продолжительностью до 50 лет практически в полной мере предохраняет их от изменения фенотипических свойств. В то же время после лиофилизации многократно субкультивированных на плотных питательных средах культур без признаков исходного нарушения свойств обнаруживались явления диссоциации, снижение титров культур в реакции агглютинации от 2 до 4 раз, повышение на порядок величин показателя ЛД₅₀.

1. Кудрявцева Т.Ю., Транквилевский Д.В., Мокриевич А.Н., Иопов В.П., Морозова Н.С., Зароченцев М.В., Мазепа А.В., Окунев Л.П., Холин А.В., Косилко С.А., Федоров Ю.М., Храмов М.В., Дятлов И.А. Эпизоотическая и эпидемиологическая ситуация по туляремии в Российской Федерации в 2015 г. и прогноз на 2016 г. проблемы особо опасных инфекций. 2016; 1:28-32. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-1-28-32.

2. Мокриевич А.Н., Тимофеев В.С., Кудрявцева Т.Ю., Уланова Г.И., Карбышева С.Б., Миронова Р.И., Вахрамеева Г.М., Губарева Т.И., Павлов В.М., Дятлов И.А. Выделение среднеазиатского подвида туляремийного микроба на территории Алтайского края. Проблемы особо опасных инфекций. 2013; 1:66-9. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2013-1-66-69.

3. Whipp M.J., Davis J.M., Lum G., de Boer J., Zhou Y, Bearden S.W., Petersen J.M., Chu M.C., Hogg G. Characterization of a novicida-like subspecies of Francisella tularensis isolated in Australia. J. Med. Microbiol. 2003; 52:839-42. https://doi.org/10.1099/jmm.0.05245-0.

4. WHO Guidelines on Tularemia. Epidemic and Pandemic Alert and Response; 2007. 115 p.

5. Guidance for the operation of biological research centres (BRCs) Part 2. Microorgamsmsdomen 2007. [Электронный ресурс]. URL: http//www.oecd.org/sti/biotech/38777417 (дата обращения 05.11.2015 г).

6. Куплетская М.Б., Нетрусов А.И. Жизнеспособность лиофилизированных микроорганизмов после 50 лет хранения. Микробиология. 2011; 80(6):842-6.

7. Похиленко В.Д., Баранов А.М., Детушев К.В. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденция развития. Известия ВУЗов. 2009; 4:99-121.

8. Соловьев В.А., Саяпина Л.В., Осина Н.А., Давыдов Д.С., Бондарев В.П. Характеристика фенотипических и генетических свойств вакцинного штамма Francisella tularensis 15НИИЭГ с длительными сроками хранения. Проблемы особо опасных инфекций. 2015; 4:91-95. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2015-4-91-95.

9. Грачева И.В., Осин А.В Механизмы повреждений бактерий при лиофилизации и протективное действие защитных сред. Проблемы особо опасных инфекций. 2016; 3:5-12. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-3-5-12.

10. Метелкин А.И. Л.С. Ценковский - основоположник отечественной школы микробиологов, 1822-1897. М.: Медгиз; 1950. С. 227-56.

11. Салтыков Р.А., Моторная В.П., Сиротюк Л.В. Опыт 25-летнего изучения стабильности свойств туляремийных вакцинных штаммов. Микробиология. 1972; 12:64-70.

12. Файбич М.М. Стабилизация вакцинных препаратов в процессе высушивания и хранения. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1968; 2:59-66.

13. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных и инфекционных болезней. Практическое руководство. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.