Оптимизация накопления вируса вакцины при разработке противооспенных препаратов на основе культур клеток

Цель. Оптимизация культивирования вируса вакцины в суспензионной культуре клеток ВНК-21 с целью повышения инфекционной активности вируссодержащей суспензии как основы для получения противооспенных вакцинных препаратов. Материалы и методы. В исследованиях использовали суспензионную культуру перевиваемой линии клеток ВНК-21 72-часового возраста и питательную среду типа МЕМ в соответствии с инструкцией по ее приготовлению. Для инфицирования клеток ВНК-21 использовали вирус вакцины, штамм Б-51. Вирус адаптирован путем трех последовательных пассажей на хорион-алантоисной оболочке развивающихся куриных эмбрионов коммерческой дермовакцины серии 449а в ФГБУ «48 ЦНИИ » Минобороны России. Информация о его генетической характеризации отсутствует. Культивирование и осаждение инфицированных клеток ВНК-21 проводили в ферментере c объемом заполнения 1 л при температуре (36,5±0,5) °С и аэрации воздушной смесью с различным содержанием СО₂. Результаты и обсуждение. Повышена интенсивность газового массообмена при одновременном сохранении щадящих гидродинамических условий перемешивания суспензионных культур клеток в ферментере. Увеличена в два раза до (4,48±0,63)·10⁹ кл./л концентрация суспензионной культуры клеток ВНК-21 в конце цикла выращивания. Повышена в 3–5 раз концентрация вируса вакцины с (8,1±0,3) lg БOE/мл до уровня инфекционной активности (8,8±0,3) lg БOE/мл. Удельная множественность инфицирования клеток в пересчете на клетку составила 1–5 БОЕ /кл., а по урожаю вируса – 20–100 БОЕ /кл. Увеличение инфекционной активности вируса в концентрированной суспензии инфицированных клеток ВНК-21 подтверждает перспективность предлагаемых путей совершенствования стадии накопления вируса вакцины при разработке противооспенных препаратов на основе культур клеток.

1. Овчинников А.В., Пащенко Ю.И., Блатов В.А., Ручко С.В., Чуркин И.А., Марков В.И., Бондарев В.П., Хамитов Р.А., Осин В.В., Тонеев В.В., Лебедев Р.П., Степанов А.А. Моделирование гидродинамических условий культивирования животных клеток. Биотехнология. 2010; 1:85–95.

2. Войнов В.А., Жукова О.П., Лукачева О.Н. Массоотдача в проточном газожидкостном биореакторе. Биотехнология. 2014; 1:62– 6.

3. Иванов А.К., Иванов Д.А., Руденко А.П. Массообмен в газожидкостных биореакторах с роторами геликоидного типа. Биотехнология. 2014; 2:69–73.

4. Генералов С.В., Абрамова Е.Г., Матвеева И.М., Жулидов И.М., Свинцов Р.А. Крупномасштабное культивирование фиксированного вируса бешенства штамма Москва 3253 на перевиваемой линии клеток Vero (B): методы и сравнительный анализ. Биотехнология. 2014; 5:38–43.

5. Васильев Н.Н., Амбросов В.А., Складнев А.А. Моделирование процессов микробиологического синтеза. М: Лесная промышленность; 1975. 341 с.

6. Пащенко Ю.И., Прохор В.Ф., Хамитов Р.А., Максимов В.А. Кинетические закономерности и особенности размножения лимфобластоидных клеток Raji в суспензии. Биотехнология. 2006; 5:88–90.

7. Сирица И.И., Лымарь В.Т., Лобанова Т.Н. Проточнофильтрационный способ культивирования клеток млекопитающих. Цитология. 1996; 38(2):247–8.

8. Зверев А.А., Зефиров Т.Л. Статистические методы в биологии: Учебно-методическое пособие. Казань: КФУ; 2013. 42 с.