Качественные показатели экспериментальных бруцеллезных антигенных препаратов, предназначенных для клеточных тестов in vitro

Для разработки наиболее диагностически информативных методик постановки антиген-стимулированных клеточных тестов in vitro необходим тщательный подбор стимулирующего агента (антигена), обладающего достаточным активирующим потенциалом и обеспечивающим специфичность реакции.

Цель работы – определение качественных показателей экспериментальных серий бруцеллезных антигенных препаратов, предназначенных для клеточных тестов in vitro.

Материалы и методы. Для проведения исследований получали антигенные комплексы бруцеллезного микроба – на основе вакцинных штаммов трех эпидемически значимых видов Brucella spp. (B. abortus, B. melitensis, B. suis). Количественное определение белков экспериментальных серий полученных препаратов WsAg и PPBC проводили методом специфической флуориметрии. Исследование белкового состава препаратов проводили методом капиллярного электрофореза. Качественный состав определяли методом ионообменной жидкостной хроматографии с рефрактометрической детекцией.

Результаты и обсуждение. В результате исследований определены физико-химические характеристики, изучены хроматографические профили и состав белковых фракций, а также проведена апробация изготовленных экспериментальных серий бруцеллезных антигенных препаратов. Анализируя охарактеризованный белковый и полисахаридный состав полученных образцов WsAg, можно сделать заключение о невозможности использования препарата WsAg для клеточных тестов, так как экспериментально доказана вероятность проявления неспецифических реакций лимфоцитов in vitro. В свою очередь, комплексный бруцеллезный антигенный препарат PPBC обладает выраженной специфической активностью и специфичностью в условиях in vitro и имеет перспективы использования при разработке методических подходов для лабораторной диагностики бруцеллеза и оценке фактической привитости контингентов риска после вакцинации. Полученные характеристики позволят обеспечить надлежащее качество при производстве разработанного экспериментального препарата PPBC,  предназначенного для клеточных тестов in vitro, с учетом современных правил валидации и стандартизации. 

1. Byndloss M.X., Tsolis R.M. Brucella spp. virulence factors and immunity. Annual Review of Animal Biosciences. 2016; 4:111– 27. DOI: 10.1146/annurev-animal-021815-111326.

2. Głowacka P., Żakowska D., Naylor K., Niemcewicz M., Bielawska-Drózd A. Brucella – virulence factors, pathogenesis and treatment. Polish Journal of Microbiology. 2018; 67(2):151–61. DOI: 10.21307/pjm-2018-029.

3. Amjadi O., Rafiei A., Mardani M., Zafari P, Zarifian A. A review of the immunopathogenesis of Brucellosis. Infect. Dis. (Lond). 2019; 51(5):321–33. DOI: 10.1080/23744235.2019.1568545.

4. Smith J.A. Brucella Lipopolysaccharide and pathogenicity: The core of the matter. Virulence. 2018; 9(1):379–82. DOI: 10.1080/21505594.2017.1395544.

5. Avila-Calderón E.D., Flores-Romo L., Sharon W., Donis-Maturano L., Becerril-García M.A., Arreola M.G.A., Reynoso B.A., Güemes F.S., Contreras-Rodríguez A. Dendritic cells and Brucella spp. interaction: the sentinel host and the stealthy pathogen. Folia Microbiol (Praha). 2020; 65(1):1–16. DOI: 10.1007/s12223-019-00691-6.

6. Брико Н.И., Онищенко Г.Г., Покровский В.И. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. М.: ООО «Издательство «Медицинское информационное агентство»; 2019. Т. 1. 880 с.

7. Костюченко М.В., Пономаренко Д.Г., Ракитина Е.Л., Логвиненко О.В., Санникова И.В., Дейнека Д.А., Голубь О.Г. Перспектива оценки антигенреактивности лимфоцитов in vitro для диагностики острого бруцеллеза. Инфекция и иммунитет. 2017; 7(1):91–6. DOI: 10.15789/2220-7619-2017-1-91-96.

8. Костюченко М.В., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Логвиненко О.В., Курчева С.А., Бердникова Т.В., Русанова Д.В., Куличенко А.Н. Изучение формирования клеточного поствакцинального иммунитета против бруцеллеза в лимфоцитарных тестах in vitro c использованием экспериментального антигенного комплекса. Медицинская иммунология. 2019; 21(3):547–54. DOI: 10.15789/1563-0625-2019-3-547-554.

9. Пономаренко Д.Г. Новый подход к комплексной оценке иммунобиологической реактивности контингента, подлежащего вакцинации (ревакцинации) против бруцеллеза. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2015; 3:28–31.

10. Budak F., Bal S.H., Tezcan G., Akalın E.H., Yılmaz A., Hız P., Oral H.B. The microRNA expression signature of CD4+ T cells in the transition of brucellosis into chronicity. PLoS One. 2018; 13(6):e0198659. DOI: 10.1371/journal.pone.0198659.

11. Starska K., Głowacka E., Kulig A., Lewy-Trenda I., Bryś M., Lewkowicz P. Prognostic value of the immunological phenomena and relationship with clinicopathological characteristics of the tumor – the expression of the early CD69+, CD71+ and the late CD25+, CD26+, HLA/DR+ activation markers on T CD4+ and CD8+ lymphocytes in squamous cell laryngeal carcinoma. Part II. J. Folia Histochem. Сytobiol. 2011; 49(4):593–603. DOI: 10.5603/FHC.2011.0082.

12. Shipkova M., Wieland E. Surface markers of lymphocyte activation and markers of cell proliferation. Clinica Chimica Acta. 2012; 413(17–18):1338–49. DOI: 10.1016/j.cca.2011.11.006.

13. Shevach E.M., McHugh R.S., Piccirillo C.A., Thornton A.M. Control of T-cell activation by CD4+ CD25+ suppressor T cells. Immunol. Rev. 2001; 182:58–67. DOI: 10.1034/j.1600-065-x.2001.1820104.x.

14. Moreno-Lafont M.C., López-Santiago R., Zumarán-Cuéllar E., Paredes-Cervantes V., López-Merino A., Estrada-Aguilera A., Santos-Argumedo L. Antigen-specific activation and proliferation of CD4+ and CD8+ T lymphocytes from brucellosis patients. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 2002; 96(3):340–7. DOI: 10.1016/s0035-9203(02)90119-7.

15. Coria L.M., Ibañez A.E., Pasquevich K.A., González Cobiello P.L., Frank F.M., Giambartolomei G.H., Cassataro J. Brucella abortus Omp19 recombinant protein subcutaneously co-delivered with an antigen enhances antigen-specific T helper 1 memory responses and induces protection against parasite challenge. Vaccine. 2016; 34(4):430–7. DOI: 10.1016/j.vaccine.2015.12.012.