Разработка иммуноферментных тест-систем и иммунохроматографических наборов реагентов, предназначенных для выявления стафилококковых энтеротоксинов типов А и В

Цель. Создание экспериментальных образцов иммуноферментных тест-систем и иммунохроматографических наборов реагентов для выявления стафилококковых энтеротоксинов типов А и В.

Материалы и методы. В работе использованы гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела к стафилококковым энтеротоксинам типов А и В, полученные в филиале ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (г. Киров); мыши линии BALB/c; стафилококковые энтеротоксины типов А и В. Клетки гибридом культивировали в культуральных флаконах и в перитонеальной полости мышей линии BALB/с. Моноклональные антитела выделяли из асцитических жидкостей путем осаждения насыщенным раствором сульфата аммония с последующей очисткой ионообменной хроматографией. Полученные препараты моноклональных антител использовали для конструирования иммуноферментных тестсистем и иммунохроматографических наборов реагентов для выявления стафилококковых энтеротоксинов типов А и В. Специфические компоненты иммуноферментных тест-систем подвергали сублимационному высушиванию в защитной среде.

Результаты и обсуждение. Сконструированы иммуноферментные тест-системы и иммунохроматографические наборы реагентов, позволяющие выявлять стафилококковые энтеротоксины типов А и В в концентрациях 0,5 нг/мл и более, в том числе в пробах продуктов питания. 

1. Pinchuk I.V., Beswick E.J., Reyes V.E. Staphylococcal Enterotoxins. Toxins. 2010; 2(8):2177–97. DOI: 10.3390/toxins 2082177.

2. Tamarapu S., McKillip J.L., Drake M. Development of a multiplex polymerase chain reaction assay for detection and differentiation of Staphylococcus aureus in dairy products. J. Food Prot. 2001; 64(5):664–8. DOI: 10.4315/0362-028x-64.5.664.

3. Hu D.-L., Nakane A. Mechanisms of staphylococcal enterotoxin-induced emesis. Eur. J. Pharmacol. 2014; 722:95–107. DOI: 10.1016/j.ejphar.2013.08.050.

4. Ercoli L., Gallina S., Nia Y., Auvray F., Primavilla S., Guidi F., Pierucci B., Graziotti C., Decastelli L., Scuota S. Investigation of a staphylococcal food poisoning outbreak from a Chantilly cream dessert, in Umbria (Italy). Foodborne Pathog. Dis. 2017; 14(7):407– 13. DOI: 10.1089/fpd.2016.2267.

5. Mossong J., Decruyenaere F., Moris G., Ragimbeau C., Olinger C.M., Johler S., Perrin M., Hau P., Weicherding P. Investigation of a staphylococcal food poisoning outbreak combining case-control, traditional typing and whole genome sequencing methods, Luxembourg, June 2014. Euro Surveill. 2015; 20(45):pii=30059. DOI: 10.2807/1560-7917.ES.2015.20.45.30059.

6. Gill D.M. Bacterial toxins: a table of lethal amounts. Microbiol. Rev. 1982; 46(1):86–94.

7. Ostyn A., Guillier F., Prufer A.-L., Papinaud I., Messio S., Krys S., Lombard B., Hennekinne J.-A. Intra-laboratory validation of the Ridascreen SET Total kit for detecting staphylococcal enterotoxins SEA to SEE in cheese. Lett. Appl. Microbiol. 2011; 52(5):468–74. DOI: 10.1111/j.1472-765X.2011.03025.x.

8. Veras J.F., do Carmo L.S., Tong L.C., Shupp J.W., Cummings C., Dos Santos D.A., Cerqueira M.M.O.P., Cantini A., Nicoli J.R., Jett M. A study of the enterotoxigenicity of coagulase-negative and coagulase-positive staphylococcal isolates from food poisoning outbreaks in Minas Gerais, Brazil. Int. J. Infect. Dis. 2008; 12(4):410–5. DOI: 10.1016/j.ijid.2007.09.018.

9. Fries B.C., Varshney A.K. Bacterial toxins-staphylococcal enterotoxin B. Microbiol. Spectr. 2013; 1(2). DOI: 10.1128/microbiolspec.AID-0002-2012.

10. Любавина И.А., Бровко Ф.А., Валякина Т.И., Вертиев Ю.В., Гришин Е.В. Методы экспресс-анализа стафилококкового энтеротоксина А в продуктах питания. Биоорганическая химия. 2014; 40(2):186–95. DOI: 10.7868/S0132342314020109.

11. Levine W.C., Bennett R.W., Choi Y., Henning K.J., Rager J.R., Hendricks K.A., Hopkins D.P., Gunn R.A., Griffin P.M. Staphylococcal food poisoning caused by imported canned mushrooms. J. Infect. Dis. 1996; 173(5):1263–7. DOI: 10.1093/infdis/173.5.1263.

12. Bergdoll M.S. Staphylococcus aureus. In: Doyle M.P., editor. Foodborne bacterial pathogens. New York: Marcel Dekker, Inc.; 1989. Р. 463–523

13. Asao T., Kumeda Y., Kawai T., Shibata T., Oda H., Haruki K., Nakazawa H., Kozaki S. An extensive outbreak of staphylococcal food poisoning due to low-fat milk in Japan: estimation of enterotoxin A in the incriminated milk and powdered skim milk. Epidemiol. Infect. 2003; 130(1):33–40. DOI: 10.1017/s0950268802007951.

14. Evenson M., Hinds M., Bernstein R., Bergdoll M. Estimation of human dose of staphylococcal enterotoxin A from a large outbreak of staphylococcal food poisoning involving chocolate milk. Int. J. Food Microbiol. 1988; 7:311–6.

15. Do Carmo L.S., Cummings C., Linardi V.R. Dias R.S. De Souza J.M., De Sena M.J., Dos Santos D.A., Shupp J.W., Pereira R.K., Jett M. A case study of a massive staphylococcal food poisoning incident. Foodborne Pathog. Dis. 2004; 1(4):241–6. DOI: 10.1089/fpd.2004.1.241.

16. Флуер Ф.С. Методы определения стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах. Вопросы питания. 2010; 79(1):66–73.

17. Boerema J.A., Clements R., Brightwell G. Evaluation of molecular methods to determine enterotoxigenic status and molecular genotype of bovine, ovine, human and food isolates of Staphylococcus aureus. Int. J. Food Microbiol. 2006; 107(2):192– 201. DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2005.07.008.

18. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugated J. Histochem. Cytochem. 1974; 22(12):1084–91. DOI: 10.1177/22.12.1084.

19. Кэтти Д., редактор. Антитела. Методы: Кн. 1: пер. с англ. М.: Мир; 1991. 287 с.

20. Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold suspensions. Nature Physical Science. 1973; 241(105):20–2. DOI: 10.1038/PHYSCI241020A0.