Оценка адсорбционной активности бактериальных клеток на модели Yersinia pseudotuberculosis

В настоящее время в ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора осуществляется выпуск диагностических иммуноглобулинов, используемых в лабораторной диагностике возбудителя чумы. Одним из важных этапов получения данной категории препаратов является процесс адсорбции и удаления перекрестнореагирующих антител для повышения специфичности препарата. С этой целью используются инактивированные клетки штаммов Yersinia pseudotuberculosis.

Цель работы – оценка возможности применения иммунохимических методов для анализа адсорбционных свойств бактериальных клеток, с последующим анализом влияния условий культивирования, способа культивирования, варианта используемого штамма на адсорбционные свойства бактериальных клеток.

Материалы и методы. Культивирование проводили на плотной и жидкой питательных средах, инактивацию клеток проводили путем температурного и химического воздействия. Оценку адсорбционной активности осуществляли методами иммуноблоттинга и ингибирующего иммуноферментного анализа. Статистическую обработку результатов проводили с применением двухфакторного дисперсионного анализа.

Результаты и обсуждение. Показана применимость методов иммуноблоттинга и ингибирующего ИФА для качественной и количественной оценки адсорбционных свойств бактериальных клеток. Установлено, что на адсорбционные свойства бактериальных клеток влияет способ инактивации и внесение субстратной подкормки, способ культивирования не оказывает воздействия на адсорбционные свойства клеток.

1. Khushiramani R., Tuteja U., Shukla J., Batra H.V. Characterization of outer membrane proteins of Yersinia pestis and Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from India. Indian J. Exp. Biol. 2004; 42(5):508–14.

2. Chen Y., Duan R., Li X., Li K., Liang J., Liu C., Qiu H., Xiao Y., Jing H., Wang X. Homology analysis and cross-immunogenicity of OmpA from pathogenic Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia pestis. Mol. Immunol. 2015; 68(2 Pt. A):290–9. DOI: 10.1016/j.molimm.2015.09.016.

3. Keasey S.L., Schmid K.E., Lee M.S., Meegan J., Tomas P., Minto M., Tikhonov A.P., Schweitzer B., Ulrich R.G. Extensive antibody cross-reactivity among infectious gram-negative bacteria revealed by proteome microarray analysis. Mol. Cell. Proteomics. 2009; 8(5):924–35. DOI: 10.1074/mcp.M800213-MCP200.

4. Sharma N., Hanif S., Upadhyay D., Chhikara M.K. Inhibition ELISA as a putative tool for the identification and quantification of meningococcal A and X polysaccharides at various stages of vaccine development. J. Immunol. Methods. 2019; 473:112634. DOI: 10.1016/j.jim.2019.112634.

5. Салихов Р.Р., Борисова С.В., Авдеева Н.Г., Самохвалова Ю.И., Волох О.А. Оптимизация условий культивирования Yersinia pseudotuberculosis в процессе получения клеточной массы. Проблемы особо опасных инфекций. 2021; 4:137–42. DOI: 10.21055/0370-1069-2021-4-137-142.

6. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electroforetic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1979; 76(9):4350–4. DOI: 10.1073/pnas.76.9.4350.

7. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.

8. Кобзарь А.И. Прикладная математическая статистика. Для инженеров и научных работников. М.: Физматлит; 2006. 816 с.