Получение и характеристика иммунных асцитических жидкостей к штаммам Vibrio cholerae R-варианта

Цель работы – получить иммунные асцитические жидкости (ИАЖ) мышей к целым клеткам холерных вибрионов R-варианта и оценить возможность их применения для обнаружения и характеристики атипичных холерных вибрионов. Материалы и методы. Проводили цикл иммунизации нелинейных белых мышей, включающий четыре инъекции антигена с адъювантом и без него, индукцию накопления асцитической жидкости путем внутрибрюшинной инокуляции мышиных миеломных клеток. Экспериментальные ИАЖ изучали в серологических и иммунологических реакциях на наборе штаммов Vibrio cholerae R-варианта, V. cholerae nonO1/nonO139, V. cholerae О1 и гетерологичных микроорганизмах. Результаты и обсуждение. Полученные ИАЖ отличаются высокими титрами антител в непрямом иммуноферментном анализе (до 1:640000), а в реакции слайд-агглютинации агглютинируют атипичные холерные вибрионы в разведении от 1:8 до 1:32. Обнаружены перекрестные реакции в трех изучаемых группах штаммов V. cholerae, что свидетельствует о наличии у них сходных антигенов. По результатам электрофоретического разделения и иммуноблоттинга лизатов клеток штаммов установлено наличие общих мажорных белков в области 55–60 и 25 кДа. Наглядные отличия наблюдаются по нескольким минорным белкам в области 30–55 кДа, в частности они отсутствуют у типичных штаммов. Показано также, что экспериментальные ИАЖ содержат антитела к эпитопам коровой части липополисахарида и поверхностных белков, причем большая часть из них являются общими для исследуемых групп холерных вибрионов. Полученные данные позволяют заключить, что возможность обнаружения V. cholerae R-варианта повышается при условии использования набора ИАЖ к R-вибрионам; для серологического анализа атипичных штаммов ИФА предпочтительнее реакции слайдагглютинации. Объединение ИАЖ в виде одного препарата представляется перспективным, так как позволяет охарактеризовать спектр поверхностных антигенных детерминант измененных штаммов и расширить возможности их обнаружения.

1. Безсмертный В.Е., Подосинникова Л.С., Иванова С.М., Титов Г.В., Смоликова Л.М., Мазрухо Б.Л., Кругликов В.Д.,Шестиалтынова И.С., Монахова Е.В., Кудрякова Т.А., Авдеева Е.П., Лобанов В.В. Характеристика культур холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, изолированных от людей и из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации в 2006 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 20. Ростов-на-Дону; 2007. С. 49–53.

2. Иванова С.М., Титов Г.В., Безсмертный В.Е., Титова С.В., Кругликов В.Д., Москвитина Э.А., Архангельская И.В., Ежова М.И., Кудрякова Т.А., Зубкова Д.А., Водопьянов С.О., Водопьянов А.С. Информация о биологических свойствах холерных вибрионов О1 серогруппы, изолированных из объектов окружающей среды и от людей на территории Российской Федерации в 2014 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 28. Ростов-на-Дону; 2015. С. 67–70. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.

3. Яшкулов К.Б., Каляева Т.Б., Оброткина Н.Ф., Тюнникова В.Д., Дандаева Б.В. О свойствах культур холерных вибрионов О1, выделенных из воды открытых водоемов Республики Калмыкия в период с 2012–2014 гг. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 28. Ростов-на-Дону; 2015. С. 71–75. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2015/06/Cholera-28-2015.pdf.

4. Иванова С.М., Иванников В.В., Мискинова Т.А., Лопатин А.А, Титова С.В., Кругликов В.Д., Москвитина Э.А., Архангельская И.В., Левченко Д.А.2, Чемисова О.С., Гаевская Н.Е., Ежова М.И., Непомнящая Н.Б. Информация о биологических свойствах холерных вибрионов О1 серогруппы, изолированных из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации в 2017 году. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 31. Ростов-на-Дону; 2018. С 48–51. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2019/01/СБОРНИК -31.pdf.

5. Мошкина А.А. Свойства забайкальских штаммов холерных вибрионов О1, выделенных за последние пять лет. В кн.: Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии (48.04). Вып. 32. Ростов-на-Дону; 2019. С. 110–12. [Электронный ресурс]. URL: http://antiplague.ru/wp-content/uploads/2019/11/Холера-и-патогенные-для-человека-вибрионы-выпуск-32.pdf.

6. Черепахина И.Я., Балахнова В.В., Подосинникова Л.С., Огнева Н.С., Сорокин В.М., Прозорова Л.А., Фецайлова О.П., Чиркова О.О. Современные подходы к изучению антигенной вариабельности холерных вибрионов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996; 4:85–6.

7. Лобанов В.В., Сухарь В.В. Особенности липополисахарида Vibrio cholerae. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002; 2:102–7.

8. Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Якушева О.А., Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Зюзина В.П., Яговкин М.Э. Изучение с помощью панели МКА поверхностных антигенных детерминант атипичных по агглютинабельности штаммов Vibrio cholerae. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 1:77–85. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-1-77-85.

9. Климович В.Б., Самойлович М.П., Грязева И.В., Крутецкая И.Ю., Пашкова С.Ф., Руденко И.Я. Моноклональные антитела на основе репертуара иммунного ответа мышей линии SJL/J. Медицинская иммунология. 1999; 1(1-2):47–58.

10. Нуралова И.В. Способ получения хламидийного люминесцирующего диагностического препарата, хламидийный люминесцирующий диагностический препарат и способ диагностики хламидийных инфекций. Патент РФ № 2141666, опубл. 20.11.1999.

11. Подоплекина Л.Е., Шарова О.И., Унгер Г.Н. Способ получения антител для производства диагностических препаратов вируса клещевого энцефалита. Патент РФ № 2063245, опубл. 10.07.1996.

12. Девдариани З.Л., Федорова В.А., Веренков М.С., Чижиньков А.И., Кочетов А.Х. Беспородные мыши – биопродуценты моноклональных антител к капсульному антигену возбудителя чумы. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1992; 2:73–4.

13. Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Якушева О.А., Алексеева Л.П., Водопьянов С.О., Ежова М.И., Носков А.К. Изучение диапазона изменчивости по агглютинабельности штаммов Vibrio cholerae, выделенных при мониторинговых исследованиях. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 3:107–14. DOI: 10.21055/0370-1069-2022-3-107-114.

14. Левченко Д.А., Кругликов В.Д., Подойницына О.А., Непомнящая Н.Б., Селянская Н.А., Водопьянов А.С., Ежова М.И., Ренгач М.В., Носков А.К. Комплексная характеристика штаммов Vibrio cholerae – R-вариант. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2023; 19(1):6–14.

15. Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях. СП б.; 2012. 48 с. [Электронный ресурс]. URL: https://ruslasa.ru/wp-content/uploads/2017/06/Directive_201063_rus.pdf.

16. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.; 1991. 288 с.

17. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0.

18. Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding – current status and outlook. J. Immunol. Methods. 1984; 72(2):313–40. DOI: 10.1016/0022-1759(84)90001-2.

19. Евдокимова В.В., Алексеева Л.П., Кретенчук О.Ф., Кругликов В.Д., Архангельская И.В., Бурша О.С. Иммуноферментные методы анализа в диагностике холеры. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(5):303–7. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-5-303-307.