Изучение состава клеточных антигенов патогенных буркхольдерий с использованием иммуноблоттинга

Проведен сравнительный анализ иммуноэлектрофореграмм клеточных антигенов - B. pseudomallei С - 141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264, B. cepacia 25416 после иммуноблоттинга с иммунными кроличьими сыворотками, полученными к живым клеткам авирулентного штамма B. pseudomallei 107, клеточным и внеклеточным антигенам B. pseudomallei 107, B. pseudomallei С - 141, B. mallei 10230, B. thailandensis 264 , B. cepacia 25416. Визуальный анализ позволил на иммуноэлектрофореграмме клеточных антигенов B. mallei 10230, полученной в иммуноблоттинге с сывороткой к клеточным антигенам B. mallei 10230, выявить фракции с молекулярными массами 18,4 и 35 kDa, отсутствующие на иммуноэлектрофореграмме B. pseudomallei С - 141 после иммуноблоттинга с этой же сывороткой, что позволяет дифференцировать патогенные буркхольдерии. В то же время использование в иммуноблоттинге гетерологичных иммунных сывороток повышает дискриминирующую способность сравнительного анализа иммуноэлектрофореграмм клеточных антигенов в целях дифференциации патогенных буркхольдерий. Уровень воспроизводимости иммуноэлектрофореграмм позволяет использовать коэффициенты их сходства для сравнительного анализа с применением компьютерных программ.

анализ, иммуноблоттинг, клеточные и внеклеточные антигены, сыворотка, Burkholderia pseudomallei, B mallei, analysis, immunoblotting, cellular and extracellular antigens, serum

1. Бейли Н. Математика в биологии и медицине. М.: Мир; 1970.

2. Будченко А.А., Илюхин В.И., Викторов Д.В. Сравнительный анализ электрофореграмм суммарных клеточных белков патогенных буркхольдерий. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2005; 2:24-8.

3. Домарадский И.В. Проблемы перекрестного иммунитета. М.: Медицина; 1973.

4. Илюхин В.И., Сенина Т.В., Плеханова Н.Г., Антонов В.А., Меринова Л.К., Сеимова И.К. Burkholderia thailandensis: биологические свойства, идентификация и таксономическая позиция. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2002; 1:7-11.

5. Кулаков Ю.К., Желудков М.М., Толмачева Т.А. Использование молекулярно-биологических методов идентификации бруцелл в сравнительном анализе штаммов, выделенных от больных собак. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2003; 1:6-14.

6. Anuntagool N., Rugdech P., Sirisinha S. Identification of specific antigens of Pseudomonas pseudomallei and evaluation of their efficacies for diagnosis of melioidosis. J. Clin. Microbiol. 1993; 31(1):1232-6.

7. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the guantitation of microgram guantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976; 72:248-54.

8. Katz J., Devvald R., Nicholson J. Procedurally similar competitive immunoassay systems for the serodiagnosis of Babesia eaui, Babesia eaballi, Trypanosoma euuiperdum and Burkhohleria mallei infection in horses. J. Vet. Diagn. Invest. 2000; 12:46-50.

9. Laemmli U.K. Clevage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227: 680-5.

10. Pal V., Kumar S., Malik P., Rai G.P. Evaluation of Recombinant Proteins of Burkholderia mallei for Serodiagnosis of Glanders. Clin. Vaccine Immunol. 2012; 19:1193-8.

11. Sermswan R.W., Wongratanacheewin S., Anuntagool N. Comparison of the polymerase chain reaction and serologic tests for diagnosis of septicemic melioidosis. J. Trop. Med. Hyg. 2000; 63:146-9.

12. Tiyawisutsri R., Peacock S.J., Langa S., Limmathurotsakul D., Cheng A.C., Chierakul W., Chaowagul W., Day N.P., Wuthiekanun V. Antibodies from patients with Melioidosis recognize Burkholderia mallei but not Burkholderia thailandensis antigens in the indirect hemagglutination assay. J. Clin. Microbiol. 2005; 43:4872-4.

13. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979; 76:4350-4.