Применение новой основы питательных сред – пептона из фибрина – в производстве препаратов для фагодиагностики чумы и холеры

ФКУН Российский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора является единственным производителем зарегистрированных на территории РФ медицинских изделий для фагодиагностики чумы и холеры. Основной стадией изготовления диагностических бактериофагов является их накопление в культуре штамма-продуцента, предполагающее использование питательных сред (ПС) на различной белковой основе. Исследователями отмечаются все более учащающиеся случаи нестандартности последних, что нередко приводит к ухудшению качественно-количественных показателей фаголизатов. Цель работы – исследование возможности применения пептона из фибрина в качестве альтернативной основы питательных сред на этапе накопления бактериофагов в производстве препаратов для фагодиагностики чумы и холеры. Материалы и методы. В качестве штаммов-продуцентов использовали Yersinia pestis EV НИИЭГ и специфичные к нему бактериофаги – диагностический Покровской и Л-413С; Vibrio cholerae cholerae O1 145 и V. cholerae El Tor O1 75М и специфичные к ним бактериофаги – классический (С) и эльтор (XII и XV) соответственно. Контроль активности и специфичности чумных бактериофагов, накопленных на экспериментальных ПС, проводили используя штаммы Y. pestis и Y. pseudotuberculosis I–VI серотипов. Контроль активности и специфичности холерных бактериофагов, накопленных на экспериментальных ПС, проводили используя соответствующие штаммы V. cholerae cholerae и V. cholerae El Tor O1. Состав жидких ПС на основе пептона из фибрина в зависимости от потребностей культивируемых микроорганизмов отличался по показателям: аминному азоту, содержанию кофакторов неорганической и органической природы, водородному показателю. Результаты и обсуждение. Применение пептона из фибрина в качестве основы ПС для накопления чумных (Покровской и Л-413С) и холерных (С, XII и XV) бактериофагов показало не уступающий или превосходящий результат в сравнении с контрольными питательными средами, нормируемыми производственными документами. Экспериментальные серии бактериофагов, в сравнении с коммерческими препаратами, показали соответствие требованиям нормативной документации.

1. Кругликов В.Д., Гаевская Н.Е., Монахова Е.В., Москвитина Э.А., Агафонова В.В., Савина И.В., Подойницына О.А., Селянская Н.А., Водопьянов А.С., Дуванова О.В., Меньшикова Е.А., Ежова М.И., Шипко Е.С., Евтеев А.В., Казьмина В.С., Бодрая П.В., Сокиркина Е.Н. Анализ особенностей эпидемиологической ситуации по холере в 2024 г. в мире, в Российской Федерации и прогноз ее развития на 2025 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2025; (1):35–47. DOI: 10.21055/0370-1069-2025-1-35-47.

2. Попов Н.В., Карнаухов И.Г., Кузнецов А.А., Матросов А.Н., Иванова А.В., Марцоха К.С., Магеррамов Ш.В., Поспелов М.В., Корзун В.М., Вержуцкий Д.Б., Чипанин Е.В., Холин А.В., Лопатин А.А., Дубянский В.М., Ашибоков У.М., Газиева А.Ю., Кутырев И.В., Аязбаев Т.З., Бамматов Д.М., Балахонов С.В., Куличенко А.Н., Кутырев В.В. Эпидемиологическая обстановка по чуме в мире и прогноз ее развития на 2025 г. в Российской Федерации. Проблемы особо опасных инфекций. 2025; (1):74–83. DOI: 10.21055/0370-1069-2025-1-74-83.

3. Государственный реестр медицинских изделий и организаций (индивидуальных предпринимателей), осуществляющих производство и изготовление медицинских изделий. [Электронный ресурс]. URL: https://elk.roszdravnadzor.gov.ru/widget/ (дата обращения: 12.06.2025).

4. Дятлов И.А., Кутырев В.В., Храмов М.В. Питательные среды для выделения, культивирования и идентификации возбудителей особо опасных инфекций бактериальной природы. М.; 2012. 415 с.

5. Никифоров А.К., Овчинникова М.В., Комиссаров А.В., Зинина О.С., Гумаюнова К.С., Синягина Ю.В. Применение тангенциальной ультрафильтрации в производстве диагностических бактериофагов. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. 2022; 18(3):8–13.

6. Ляпустина Л.В., Омельянчук П.А., Лямкин Г.И., Вилинская С.В., Головнева С.И., Коготкова О.И., Будыка Д.А., Русанова Д.В., Куличенко А.Н. Совершенствование технологии производства бруцеллезных диагностических бактериофагов. Проблемы особо опасных инфекций. 2009; (3):69–72. DOI: 10.21055/0370-1069-2009-3(101)-69-72.

7. Холматов К.И., Вахрушина Н.И., Антонычева М.В., Чалбушев М.М., Белоусов А.Д., Астафьева С.В., Гумаюнова К.С., Зинина О.С., Синягина Ю.В., Рогожин В.В., Максимова В.Н., Бенцлер В.А., Овчинникова М.В., Комиссаров А.В. Способ получения основы питательных сред – пептона и питательная среда для накопления бактериофагов, специфичных к Yersinia pestis и Vibrio cholerae. Заявка на изобретение № 2023131500, опубл. 28.05.2025. Бюл. № 16.

8. Глазкова Е.А., Гумаюнова К.С., Комиссаров А.В., Овчинникова М.В. Исследование влияния различных энтеросорбентов на бактериофаг при конструировании комплексного препарата для лечения и профилактики холеры. В кн.: Зыкинские чтения: Материалы национальной научно-практической конференции, посвященной памяти докт. мед. наук, профессора Л.Ф. Зыкина. Саратов: ФГБОУ ВО Вавиловский университет; 2024. С. 48–52.

9. Bandara N., Jo J., Ryu S., Kim K.P. Bacteriophages BCP1-1 and BCP8-2 require divalent cations for efficient control of Bacillus cereus in fermented foods. Food Microbiol. 2012; 31(1):9–16. DOI: 10.1016/j.fm.2012.02.003.

10. Ma L., Green S.I., Trautner B.W., Ramig R.F., Maresso A.W. Metals enhance the killing of bacteria by bacteriophage in human blood. Sci. Rep. 2018; 8(1):2326. DOI: 10.1038/s41598-01820698-2.

11. Каттер Э., Сулаквелидзе А., редакторы. Бактериофаги: биология и практическое применение: пер. с англ. М.: Научный мир; 2012. 636 с.

12. Муфтахов М.В., Щукин П.В. Резонансный захват электронов молекулами цистеина и N-ацетилцистеина. Журнал физической химии. 2020; 94(1):89–97. DOI: 10.31857/s0044453720010240.

13. Чиркин А.А. Биохимия с основами генной инженерии: учебное пособие для студентов вузов по специальности «Биоэкология». Витебск: ВГУ им. П.М. Машерова; 2010. 182 с.

14. Pilipchuk T.А., Gerasimovich A.D., Ananyeva I.N., Kolomiets E.I. Optimization of process parameters for cultivation of bacteriophages promising for biological control of phytopathogenic bacteria of genus pseudomonas. Eurasian Journal of Applied Biotechnology. 2021; (3):28–40. DOI: 10.11134/btp.3.2021.3.