Разработка иммунохроматографической моноклональной тест-системы для выявления Yersinia pseudotuberculosis серогруппы I

Цель. Разработать иммунохроматографическую моноклональную тест-систему для выявления возбудителя псевдотуберкулеза серогруппы I. Материалы и методы. В качестве специфических компонентов для разработки иммунохроматографической тест-системы были использованы мышиные моноклональные антитела гибридных клеточных линий, полученные на липолисахаридный антиген наружной мембраны «холодового» варианта псевдотуберкулезного микроба I серотипа (YP-101Н2В4, YP-105С5А10); кроличьи антивидовые антитела против иммуноглобулинов мыши. Для получения конъюгата коллоидного золота с антителами (КЗ-АТ) были использованы частицы диаметром (30±2) нм. Для конъюгирования с коллоидным золотом использовали концентрацию антител, на 10-15 % превышающую точку выхода D580 на плато. Для изготовления иммунохроматографической тест-системы применяли комплект мембран фирмы MDI Easypack («Advanced Microdevise», Индия). Готовый конъюгат наносили на мембрану методом пропитывания. Антитела в аналитическую и контрольную мембраны в выбранной концентрации наносили с помощью диспенсора. Подложку с нанесенным конъюгатом и готовые рабочие мембраны сушили в вакуумном сухожаровом шкафу. Собранные иммунохроматографические тест-системы нарезали по 4,5 мм и тестировали на специфичность и чувствительность. Результаты и выводы. Разработана иммунохроматографическая тест-система, в которой использовали моноклональные антитела гибридной клеточной линии YP-105C5A10 в конъюгате с коллоидным золотом и моноклональные антитела гибридной клеточной линии YP-101H2B4 в тестовой линии. Тест-система обеспечивает выявление штаммов Y. рseudotuberculosis серогруппы I в концентрации от 500 тыс. м.к.·см^-3 (при тестировании 8 штаммов из 11 исследованных) до 4 млн м.к.·см^-3 и не выявляет при исследовании близкородственные иерсинии и гетерологичные микроорганизмы в концентрации 100 млн м.к.·см^-3.

возбудитель псевдотуберкулеза серогруппы I, моноклональные антитела, иммунохроматографическая тест-система, pseudotuberculosis agent, serogroup I, monoclonal antibodies, immune-chromatographic test-system

1. Балахонов С.В., Косилко С.А., Бренёва Н.В., Мазепа А.В., Окунев Л.П., Климов В.Т., Никитин А.Я., Сидорова Е.А., Севостьянова А.В., Трушина Ю.Н., Мельникова О.В., Ярыгина М.Б., Худченко С.Э., Чеснокова М.В., Андаев Е.И. Эпидемиологическая ситуация по природно-очаговым инфекционным болезням бактериальной и вирусной этиологии в 2012 г. в Сибири и на Дальнем Востоке и прогноз ее развития на 2013 г. Пробл. особо опасных инф. 2013; 1:38-43.

2. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней: практическое руководство. 2-е изд. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.

3. Покровский В.И., Сомов Г.П., Беседнова Н.Н., Антоненко Ф.Ф. Псевдотуберкулез. М.: Медицина; 2001. 256 с.

4. Ценева Г.Я., Воскресенская Е.А., Солодовникова Н.Ю. Биологические свойства иерсиний и лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза: пособие для врачей. СПб.; 2001. С. 28-34.

5. Ющук Н.Д., Шестакова И.В. Псевдотуберкулез. Инфекционные болезни: национальное руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2009. С. 352-62.

6. Byzova N.A., Zvereva E.A., Zherdev A.V., Eremin S.A., Dzantiev B.B. Rapid pretreatment-free immunochromatographic assay of chloramphenicol in milk. Talanta. 2010; 81(3):843-8.

7. Frens G. Controlled Nucleation for the Regulation of the Particle Size in Monodisperse Gold Suspensions. Nat. Phys. Sci. 1973; 241:20-2. DOI: 10.1038/physci241020a0.

8. Hermanson G.T. Bioconjugat Techniques. 2nd Edition. Amsterdam: Acad. Press; 2008.

9. von Lode P. Point-of-care immunotesting: approaching the analytical performance of central laboratory methods. Clin. Biochem. 2005; 38(7):591-606. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2005.03.008.