Определение видовой принадлежности штаммов бруцелл из фонда Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» с помощью амплификационных и рестрикционных технологий

Цель работы. Определение таксономического положения штаммов Brucella spp. с использованием комплекса амплификационных и рестрикционных методов. Материалы и методы. Проведено уточнение видовой принадлежности 17 типовых и 48 природных штаммов из фонда Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» с использованием амплификационного («Ген Brucella – идентификация – РГФ», AMOS-DEL, Bruce-Ladder, Suis-Ladder) и рестрикционного анализа omp25, omp2a, omp2b локусов с помощью ферментов AluI, EcoRI, Eco32I (EcoRV). Результаты и выводы. В ходе проведенной молекулярной идентификации у 50 штаммов бруцелл подтверждено таксономическое положение, указанное в паспорте штамма, у 12 культур уточнена видовая принадлежность. Для трех штаммов бруцелл установлены новые профили амплификации и рестрикции, что указывает на необходимость продолжения исследований. Полученные результаты в полной мере подтверждают перспективность применения комплексного подхода с использованием нескольких амплификационных систем и препаратов и рестрикционного анализа для определения видовой принадлежности штаммов к виду и биовару возбудителя бруцеллеза.

бруцеллы, идентификация, таксономическое положение, амплификационные системы, рестрикционный анализ

1. Касьян Ж.А., Осина Н.А., Касьян И.А., Шарова И.Н., Казакова Е.С. Апробация нового генодиагностического препара- та при исследовании проб биологического материала на наличие возбудителя бруцеллеза. ЗНИСО. 2016; 4(277):48.

2. Bricker B.J., Halling S.M. Differentiation of Brucella abor- tus bv. 1, 2, and 4 Brucella melitensis, Brucella ovis and Brucella suis bv. 1 by PCR. J. Clin. Microbiology. 1994; 32:2660–6.

3. Cloeckaert A, Verger J.-M, Grayon M., Grepinet O. Restriction site polymorphism of the genes encoding the major 25 kDa and 36kDa outer-membrane proteins of Brucella. Microbiology. 1995; 141:2111–21.

4. İca T., Aydin F., Gümüşsoy K.S., Perçin D., Sümerkan A.B., Ocak F., Abay S., Doğan H.O., Findik A., Çiftci A. Conventional and molecular biotyping of Brucella strains isolated from cattle, sheep and human. Ankara Üniv. Vet. Fak. Derg. 2012; 59:259–64.

5. Lopez-Goni I., Garcia-Yoldi D., Martin C.M., Miguel M.J., Munoz P.M., Blasco J.M., Jacques I., Grayon M., Cloeckeart A., Ferreira A.C., Carloso R., Correa de Sa, M.I., Walravens K., Albert D., Garin-Bastuji B. Evaluation of a multiplex PCR assay (Bruce￾ladder) for molecular typing of all Brucella species including the vaccine strains. J. Clin. Microbiol. 2008; 46:3484–7. DOI: 10.1128/ JCM.00837-08.

6. Loґpez-Goni I., Garcıґa-Yoldi D., Martin C.M., Miguel M.J., Barquero-Calvo E., Guzmaґ n-Verri C., Albert D., Garin￾Bastuji B. New Bruce-ladder multiplex PCR assay for the biovar typing of Brucella suis and the discrimination of Brucella suis and Brucella canis. Vet. Microbiol. 2011; 154:152–5. DOI: 10.1016/j. vetmic.2011.06.035.

7. Tiller R.V., Gee J.E., Frace M.A., Taylor T.K., Setubal J.C., Hoffmaster A.R., De B.K. Characterization of novel Brucella strains originating from wild native rodent species in North Queensland, Australia. Appl. Enviroment. Microbiol. 2010; 76:5837–45. DOI: 10.1128/AEM.00620-10.