Конструирование штамма Vibrio cholerae биовара эльтор гиперпродуцента холерного токсина II типа и определение оптимальных условий для продукции этого белка

Аннотация

Показано, что внедрение транспозона Tn5-Mob (Km^R) в хромосому токсигенного штамма V. cholerae МАК757 биовара эльтор обусловило появление инсерционных мутантов с измененным геномом профага СТХφ. Реорганизация генома профага выразилась в делеции четырех генов zot, асе, сер, orfU при сохранении лишь оперона ctxAB, кодирующего синтез холерного токсина II типа. Указанное изменение генома профага СТХφ обусловило повышение продукции этого белка у клонов МАК757 chr::Tn5-Mob (Km^R) Tox⁺⁺более чем в 2000 раз. Среди инсерционных мутантов Km^R Tox⁺⁺ в качестве штамма-продуцента выбран один клон с наиболее высоким уровнем биосинтеза холерного токсина (42,0-45,0 мкг/мл), получивший обозначение КМ234. Подобраны условия для культивирования штамма КМ234, обеспечивающие наибольшую продукцию холерного токсина. Показано, что сконструированный штамм V. cholerae KM234 биовара эльтор является стабильным и эффективным продуцентом холерного токсина 2-го типа и может быть использован в производстве для получения этого белка, необходимого для приготовления холерных профилактических и диагностических препаратов.