Использование иммуноблоттинга для изучения эпитопной направленности моноклональных антител к антигену 200 kDa возбудителя мелиоидоза

Целью работы являлось изучение с помощью иммуноблоттинга эпитопной направленности моноклональных антител к антигену 200 kDa Burkholderia pseudomallei, синтезируемых гибридомами-продуцентами из двух коллекций, полученных в лаборатории иммунодиагностики и биотехнологии ФКУЗ «Волгоградский научно-иссле­дова­тельский противочумный институт». В работе использовали 8 типичных штаммов возбудителя мелиоидоза с полноценной антигенной структурой. Антигенные препараты разделяли вертикальным электрофорезом в денатурирующих условиях в 12 % полиакриламидном геле с 0,1 % додецилсульфата натрия. При тиражировании клеток 12 гибридом-продуцентов получали препаративные количества моноклональных антител к гликопротеину 200 kDa B. pseudomallei, на основе которых приготовили иммунопероксидазные конъюгаты. Эпитопную направленность моноклональных антител изучали методом иммуноблоттинга. В составе антигенных комплексов водно-солевых и формамидных экстрактов B. pseudomallei методом вертикального электрофореза установлено наличие нескольких обязательных мажорных компонентов. С помощью дифференциального окрашивания доказана гликопротеиновая природа отдельных компонентов исследованных антигенов. В иммуноблоттинге с применением названных антигенных препаратов определена эпитопная направленность ряда моноклональных антител к антигену 200 kDa возбудителя мелиоидоза, показаны отличия в картине их специфического взаимодействия с биополимерами, входящими в антигенный спектр, характерные как для гибридом-продуцентов, принадлежащих к разным коллекциям, так и для отдельных штаммов B. pseudomallei.

мелиоидоз, Burkholderia pseudomallei, антигены, моноклональные антитела, эпитопная направленность, иммуноблоттинг, melioidosis, antigens, monoclonal antibodies, epitope targeting, immunoblotting

1. Антонов В.А., Илюхин В.И., Храпова Н.П., Прохватилова Е.В., Викторов Д.В., Сенина Т.В., Будченко А.А., Ткаченко Г.А., Алексеева В.В., Захарова И.Б., Савченко С.С., Зинченко О.В., Сорокина Ю.И., Алексеев В.В. Современные подходы к диагностике сапа и мелиоидоза. Идентификация и типирование Burkholderia mallei и Burkholderia pseudomallei. Пробл. особо опасных инф. 2012; 112:46-50.

2. Булатова Т.В., Храпова Н.П., Барышева А.Ю. Разработка экспериментальной тест-системы иммуноферментной моноклональной для обнаружения антигена 200 kDa возбудителя мелиоидоза. Медицинский академический журн. 2012; Приложение: 307-9.

3. Корсакова И.И., Храпова Н.П., Напалкова Г.М., Ломова Л.В., Дрефс Н.М., Голосеев Ю.А., Булатова Т.В. Сравнительный анализ иммунохимических методов исследования антигенов патогенных буркхольдерий. Пробл. особо опасных инф. 2012; 113:82-5.

4. Храпова Н.П., Алексеев В.В., Корсакова И.И., Дрефс Н.М., Ломова Л.В., Булатова Т.В., Напалкова Г.М. Применение сапных и мелиоидозных моноклональных антител различной эпитопной направленности для обнаружения и идентификации патогенных буркхольдерий. Пробл. особо опасных инф. 2011; 107:66-9.

5. Gaseitsiwe S., Valentini D., Mahdavifar S., Reilly M., Ehrnst A., Maeurer M. Peptide microarray-based identification of Mycobacterium tuberculosis epitope binding to HLA-DRB1*0101, DRB1*1501 and DRB1*0401. Clin. Vaccine Immunol. 2010; 17(1):168-75.

6. Linnebacher M., Lorenz P., Koy C., Jahnke A., Born N., Steinbeck F., Wollbold J., Latzkow T., Thiesen H.-J., Glocker M. Clonality characterization of natural epitope-specific antibodies against the tumor-related antigen topoisomerase IIa by peptide chip and proteome analysis: a pilot study with colorectal carcinoma patient samples. Analyt. Bioanalyt. Chem. 2012; 403(1):227-38.

7. Ma G.Q., Shao F., Xie X.M., Cui H.F., Wan H.J. Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method for reliable detection Burkholderia pseudomallei in soil samples. African J. Microbiol. Res. 2014; 8(5):452-7.

8. Westermeier R. Electrophoresis in practice: A guide to methods and applications of DNA and protein separations. 4th ed. Weinheim: WILEY-VCH Verlag; 2005. 406 p.