Preview

Проблемы особо опасных инфекций

Расширенный поиск

Новый эффективный способ получения очищенной В-суъединицы холерного токсина и моноклональных антител к ней

https://doi.org/10.21055/0370-1069-2015-2-79-82

Полный текст:

Аннотация

Представлен эффективный способ получения В-субъединицы холерного токсина, преимуществом которого является относительная простота и экономичность, а также максимальный выход очищенной В-субъединицы, полностью лишенной примеси токсичной субъединицы А. Это достигается использованием рекомбинантного штамма холерного вибриона, продуцирующего вместо холерного токсина только его В-субъединицу, благодаря чему выделяемый препарат не обладает остаточной токсичностью. В данной работе мы использовали метод колоночной гельпроникающей хроматографии, который обеспечивает сохранение стабильного нативного состояния и максимальный выход антигена. Предлагаемый способ был отработан опытным путем, в процессе которого после каждого этапа колоночной гель-хроматографии на TSK-геле HW-60 чистоту образца анализировали с помощью диск-электрофореза, в результате чего выяснили, что трех ступеней очистки достаточно для получения лишенного примесей препарата В-субъединицы холерного токсина. Иммунологическая активность очищенной В-субъединицы подтверждена получением моноклональных антител. Полученный препарат В-субъединицы холерного токсина и моноклональные антитела к ней могут служить основой конструирования различных вариантов иммунодиагностических тест-систем.

Об авторах

Т. Л. Захарова
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия


Е. А. Михеева
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия


Н. А. Осина
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия


Список литературы

1. Захарова Т.Л., Киреев М.Н., Ливанова Л.Ф., Заднова С.П., Смирнова Н.И. Способ получения очищенной В-субъединицы холерного токсина из рекомбинантного штамма Vibrio cholerae. Патент 2456996 РФ, опубл. 27.07.2012. Бюл. № 21.

2. Захарова Т.Л., Ливанова Л.Ф., Заднова С.П., Смирнова Н.И. Получение очищенной В-субъединицы холерного токсина из рекомбинантного штамма Vibrio cholera. Биотехнология. 2003; 5:53-6.

3. Клюева С.Н., Щуковская Т.Н., Шмелькова Т.П., Кравцов А.Л., Захарова Т.Л., Белякова Н.И., Еремин С.А., Никифоров А.К. Иммунобиологическая характеристика В-субъединицы холерного токсина. Пробл. особо опасных инф. 2012; 3(113):67-70.

4. Смирнова Н.И., Крепостнова И.М., Ливанова Л.Ф., Заднова С.П., Еремин С.А., Ильина Т.С. Авирулентный штамм Vibrio cholera - продуцент В-субъединицы холерного токсина: получение и молекулярно-генетический анализ. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2007; 4:7-13.

5. Янишевский Н.В., Гинцбург А.Л., Вертиев Ю.В., Демме Ю.М., Каратаев Г.И., Смирнов Г.Б. Конструирование рекомбинантных плазмид, кодирующих биосинтез В-субъединицы холерного токсина. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 1987; 4:26-32.

6. Black R.E., Levine M.M., Clements M.L. Protective efficacy in humans of killed whole-vibrio oral cholera vaccine with and without the B subunit of cholera toxin. Infect. Immun. 1987; 5:1116-20.

7. Craig J.P. Cholera toxins. In: Microbial toxins. New York: Academic Press; 1971. Vol. 2A. P. 189-254.

8. Dertzbaugh M.T., Macrina F.L. Cholera toxin B-subunit gene fusion: Structure and functional analysis of the chimeric protein. Infect. Immun. 1990; 58(1):70-9.

9. Finkelstein R.A. The cholera enterotoxins and the cholera toxin-related enterotoxins : from the beginning to the present. Bacterial Protein Toxins. Zbl. Bakt. Suppl. 1992; 23:161-71.

10. Galfré G. Antibodies to major histocompat ibility antigens prodused by hybrid cell lines. Nature. 1977; 266:550-2.

11. Laemmli U.K. Cleavage ofstructural proteins during the assembly of the head of the bacteriophage T4. Nature. 1970; 227:680-5.

12. Lai C.Y., Mendez E., Chang D. Chemistry of cholera toxin: the subunit structure. J. Infect. Dis. 1976; 133:23-30.

13. Lycke N., Holmgren J. Strong adiuvant properties of cholera toxin on gut mucosal immune response to orally presented antibodies. Immunology.1986; 59:301-8.

14. Nursin S., Khan Y.K., Bhuiyan N.A. Diverse CTX phages among toxigenic Vibrio cholerae O1 and O139 strains isolated between 1994 and 2002 in an area where cholerae is endemic in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(12):5854-6.

15. Ouchterlony O. Antigens antibody reactions on gels. Act. Pathol. Microbiol. Scand. 1949; 26:207-12.

16. Taylor D.N., Cardenas V., Sanchez J.L. Two year study of the protective efficacy of the oral whole cell plus recombinant B subunit cholerae vaccine in Peru. J. Infect. Dis. 2000; 181:667-73.


Для цитирования:


Захарова Т.Л., Михеева Е.А., Осина Н.А. Новый эффективный способ получения очищенной В-суъединицы холерного токсина и моноклональных антител к ней. Проблемы особо опасных инфекций. 2015;(2):79-82. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2015-2-79-82

For citation:


Zakharova T.L., Mikheeva E.A., Osina N.A. New Advantageous Method for the Production of Purified Cholera Toxin B-Subunit and Monoclonal Antibodies to It. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2015;(2):79-82. (In Russ.) https://doi.org/10.21055/0370-1069-2015-2-79-82

Просмотров: 163


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0370-1069 (Print)
ISSN 2658-719X (Online)