Разработка тест-системы для дифференциации видов бруцелл методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени
https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-3-47-51
Аннотация
Цель работы. создание тест-системы, позволяющей проводить видовую идентификацию возбудителя бруцеллеза с помощью полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени.
Материалы и методы. Проведен анализ литературных источников и нуклеотидных последовательностей Brucella spp. с помощью специализированного программного обеспечения для выбора ДНК -мишеней, специфичных для каждого вида бруцелл, разработан методический прием и набор реагентов для идентификации видовой принадлежности возбудителя бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции с применением термоциклера с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов типа RotorGene.
Результаты и выводы. Разработана тест-система, позволяющая провести дифференциацию видов или группы видов бруцелл: B. abortus/B. ovis; B. melitensis; B. suis/B. canis; B. neotomae методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени. В качестве ДНК -мишеней выбраны гены BR0262, BRA0541-0542, BMEII0711, которые полностью или частично делетированы у разных видов бруцелл.
Об авторах
Ж. А. Касьян
ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия
Россия
Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46
Н. А. Осина
ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия
Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46
Россия
Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46
С. А. Щербакова
ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Россия
Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46
Россия
Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46
Список литературы
1. О нищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. М.: Медицина; 2013. С. 191.
2. П рофилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей. МУ 3.1.7.1189–03. М.; 2003.
3. П орядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней. МУК 4.2.3010-12. М.; 2013. 24 с.
4. Bricker B.J., Halling S.M. Differentiation of Brucella abortus bv. 1, 2, and 4 Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis bv. 1 by PCR. J. Clin. Microbiol. 1994; 32:2660–6.
5. Halling S.M., Peterson-Burch B.D., Bricker B.J., Zuerner R.L., Qing Z., Li L.L., Kapur V., Alt D.P., Olsen S.C. Completion of the genome sequence of Brucella abortus and comparison to the highly similar genomes of Brucella melitensis and Brucella suis. J. Bacteriol. 2005; 187(8):2715–26. DOI: 10.1128/JB.187.8.2715- 2726.2005.
6. Hinić V., Brodard I., Thomann A., Cvetnić Ž., Makaya P.V., Frey J., Abril C. Novel identification and differentiation of Brucella melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis, and B. neotomae suitable for both conventional and real-time PCR systems. J. Microbiol. Methods. 2008; 75:375–8. DOI: 10.1016/j.mimet.2008.07.002.
7. Leal–Klevezas D.S., Martinez V.I.O., Lopez M.A., Martinez S.J.P. Single step PCR for detection of Brucella spp. from blood and milk of infected animals. J. Clin. Microbiol. 1995; 33(12):3087–90.
8. Lopez-Goni I., Garcia-Yoldi D., Martin C.M., Miguel M.J., Munoz P.M., Blasco J.M., Jacques I., Grayon M., Cloeckeart A., Ferreira A.C., Carloso R., Correa de Sa M.I., Walravens K., Albert D., Garin-Bastuji B. Evaluation of a multiplex PCR assay (Bruceladder) for molecular typing of all Brucella species including the vaccine strains. J. Clin. Microbiol. 2008; 46: 3484–7. DOI: 10.1128/ JCM.00837-08.
9. Loґpez-Goni I., Garcıґa-Yoldi D., Martin C.M., Miguel M.J., Barquero-Calvo E., Guzmaґ n- Verri C., Albert D., Garin- Bastuji B. New Bruce-ladder multiplex PCR assay for the biovar typing of Brucella suis and the discrimination of Brucella suis and Brucella canis. Vet. Microbiol. 2011; 154:152–5. DOI: 10.1016/j.vetmic.2011.06.035.
10. Newby D.T., Hadfield T.L., Roberto F.F. Real-Time PCR detection of Brucella abortus: a comparative study of SYBR Green I, 5’-Exonuclease, and Hybridization Probe Assays. Appl. Environ. Microbiol. 2003; 69(8):4753–9. DOI: 10.1128/AEM.69.8.4753- 4759.2003.
11. Probert W.S., Schrader K.N., Khuong N.Y., Bystrom S.L., Graves M.H. Real-time multiplex PCR assay for detection of Brucella spp., B. abortus, and B. melitensis. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(3):1290–3. DOI: 10.1128/JCM.42.3.1290-1293.2004.
12. Rajashekara G., Glasner J.D., Glover D.A., Splitter G.A. Comparative whole-genome hybridization reveals genomic islands in Brucella species. J. Bacteriol. 2004; 186(15):5040– 51. DOI: 10.1128/ JB.186.15.5040-5051.2004.
13. Ratushna V.G., Sturgill D.M., Ramamoorthy S., Reichow S.A., He Y., Lathigra R., Striranganathan N., Halling S.M., Boyle S.M., Gibas C.J. Molecular targets for rapid identification of Brucella spp. BMS Microbiol. 2006; 6:13. DOI: 10.1186/1471-2180-6-13.
14. Redkar R., Rose S., Bricker B., DelVecchio V. Real-time detection of Brucella abortus, Brucella melitensis, and Brucella suis. Mol. Cell. Probes. 2001; 15(1):43–52. DOI: 10.1006/ mcpr.2000.0338.
Рецензия
Для цитирования:
Касьян Ж.А., Осина Н.А., Щербакова С.А. Разработка тест-системы для дифференциации видов бруцелл методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени. Проблемы особо опасных инфекций. 2016;(3):47-51. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-3-47-51
For citation:
Kas’yan Zh.A., Osina N.A., Shcherbakova S.A. Development of the Test-System for Differentiation of Brucella Species, Using Real-Time PCR. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2016;(3):47-51. (In Russ.) https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-3-47-51
Просмотров: 1252
Послать статью по эл. почте 