ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И ОЦЕНКА СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИГЕНОВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА

Abstract

Цель работы. Оценка серологической активности антигенов вируса бешенства, выделенных из мозговой ткани мышей гомогенизацией на FastPrep с последующим ультрацентрифугированием. Материалы и методы. В работе использовали производственный штамм вируса бешенства «Овечий» ГНКИ. Вирусный материал выделяли из мозговой ткани экспериментально зараженных мышей. Электрофоретический профиль вируса изучали по белковой, полисахаридной и гликолипидной составляющим. Серологическую активность компонентов вируса определяли иммуноблотом и ИФА с использованием специфических антирабических сывороток крови. Результаты и выводы. В ходе сравнения методов получения и очистки антигена вируса бешенства наиболее оптимальным определено проведение гомогенизации на FastPrep-24, с последующим фракционированием в градиенте сахарозы. В результате фракционирования в ступенчатом градиенте плотности сахарозы с концентрацией 15-50% при 25000 g в течение 120 мин получено пять фракций вируса бешенства. Максимально очищенной являлась белковая фракция, отобранная с зоны сахарозы 15-20%, и соответствовала молекулярной массе 67 кДа. Специфическая антигенная активность фракции составила 1:1280 (коэффициент специфичности 2,2). В результате иммуноблота антигенов, полученных с градиента сахарозы в диапазоне 40-45% и 20-35% после ультрацентрифугирования, выявлена одна мажорная фракция полипептидов (54 кДа). Полученные результаты будут применимы для усовершенствования диагностики бешенства.