ОБЗОРЫ 
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ 
Цель. Анализ эпизоотических проявлений природно-очаговых инфекций на территории юга европейской части России в 2017 г.
Материалы и методы. Использованы донесения, представленные Управлениями Роспотребнадзора, ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Южного и Северо-Кавказского федеральных округов, научно-исследовательскими противочумными институтами и противочумными станциями. Обработку полученных данных проводили с использованием программы Microsoft Excel 2010.
Результаты и обсуждение. Проведено эпизоотологическое обследование территории юга европейской части России по 19 нозологическим формам природно-очаговых инфекций. Всего изучено 70155 проб полевого материала, выявлены маркеры возбудителей 14 нозологических форм. Циркуляция вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки установлена в 11 субъектах; возбудителей туляремии и клещевого боррелиоза – в 8; вируса Западного Нила – в 7; маркеры возбудителей лептоспироза, Ку-лихорадки, гранулоцитарного анаплазмоза и моноцитарного эрлихиоза человека – в 6; возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом – в 5; маркеры возбудителя кишечного иерсиниоза – в 3; возбудителей группы клещевых пятнистых лихорадок, клещевого вирусного энцефалита и псевдотуберкулеза – в 2 субъектах. В Ростовской области подтверждена циркуляция вируса Синдбис.
Цель – оценить влияние специфических бактериофагов и гентамицина на морфо-функциональные свойства бактерий вакцинного штамма Yersinia pestis EV.
Материалы и методы. В работе использовали вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ, бактериофаги чумной Покровской и псевдотуберкулезный диагностический. Микробную культуру выращивали на плотной и в жидкой питательных средах при температуре 27 °С в течение 20–24 ч. Совместную инкубацию бактерий и бактериофага или гентамицина проводили при температуре 27 °С в течение 20 мин или 37 °С в течение 2 ч соответственно. Препараты культур исследовали методом просвечивающей электронной микроскопии.
Результаты и обсуждение. Проведена оценка влияния условий культивирования и различных стрессорных факторов на процесс везикулообразования клетками вакцинного штамма Y. pestis EV. Определены характер и выраженность морфофункциональных изменений в клетках Y. pestis EV в ответ на воздействие бактериофагами (чумной Покровской и псевдотуберкулезный) или антибиотиком (гентамицин). Установлено, что совместная инкубация в течение 20 мин Y. pestis EV с бактериофагом Покровской или гентамицином приводит к увеличению продукции внеклеточных везикул и сопровождается развитием дегенеративных изменений бактериальных клеток.
Цель работы. Выполнение сравнительного филогенетического анализа штаммов Yersinia pestis, выделенных в Прикаспийском Северо-Западном степном очаге в 1924–1926 гг., 1972 г. и в 1986–1990 гг., для выяснения причин его реактивизации в различные периоды XX в.
Материалы и методы. В работе использованы 30 штаммов Y. pestis из Прикаспийского Северо-Западного степного природного очага и сопредельных очагов чумы. Проведено полногеномное секвенирование восьми штаммов Y. pestis из этого очага, а также использованы полногеномные последовательности еще 16 штаммов из сопредельных природных очагов. Полногеномное секвенирование штаммов Y. pestis выполняли в Ion PGM system (Life technologies). Поиск SNPs в коровом геноме проводили с использованием программы Wombac 2.0. Для анализа филогенетических связей штаммов строили дендрограмму Maximum Likelihood, модель HKY85.
Результаты и обсуждение. Установлено, что в начале XX в. (1924–1926 гг.) на Ергенинской возвышенности в Прикаспийском Северо-Западном степном природном очаге циркулировали штаммы филогенетических ветвей 2.MED4 и 2.MED1 средневекового биовара основного подвида, которые в дальнейшем исчезли с этой территории. Показано, что штаммы, полученные на Ергенинской возвышенности в 1972 г., составили единый подкластер дендрограммы со штаммами из низкогорных и предгорных очагов чумы Кавказа и Закавказья этого же временного периода. Сделан вывод о том, что эпизоотические проявления на Ергенинской возвышенности в 1972 г., после длительного перерыва с 1938 г., вызваны заносом штаммов Y. pestis из низкогорных природных очагов чумы Кавказа и Закавказья. Отмечено, что «экспансия» кавказских штаммов носила кратковременный характер, и с 1974 г. (включая и современный период) зараженных чумой животных на Ергенинской возвышенности не регистрировали. Определено, что штаммы Y. pestis, выделенные в 1986–1990 гг. в восточной части Прикаспийского Северо-Западного степного очага, не имеют близкого генетического родства со штаммами, циркулировавшими на Ергенинской возвышенности в 1924–1926 гг. и 1972 г. Установлено, что каждый эпизоотический период (1913–1938 гг. и 1972–1973 гг.) в Прикаспийском Северо-Западном степном природном очаге завершался элиминацией циркулирующих штаммов Y. pestis и оздоровлением очаговой территории.
Цель работы – установление механизмов изменения биосинтеза ацетоина в реакции Фогес-Проскауэра у генетически измененных штаммов V. cholerae биовара Эль Тор.
Материалы и методы. Использовали девять генетически измененных штаммов V. cholerae О1 серогруппы Эль Тор биовара, завезенных на территорию Российской Федерации и Украины в 1993–2011 гг., и четыре типичных штамма, изолированных в 1970–1972 гг. В качестве отрицательного контроля при изучении продукции ацетоина штаммами V. cholerae в реакции Фогес-Проскауэра использовали штамм V. cholerae 569В О1 серогруппы классического биовара. Относительную экспрессию генов изучали методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Построение модели белка проводили с использованием автоматизированного сервера SWISS – MODEL.
Результаты и обсуждение. Показано, что диагностически значимый признак – реакция Фогес-Проскауэра, используемая для дифференциации биоваров V. cholerae O1, изменен у всех изученных генетически измененных штаммов возбудителя холеры, выделенных в разные периоды текущей седьмой пандемии (66,7 % штаммов дают слабоположительную реакцию, 33,3 % – отрицательную). Полученные данные указывают на снижение или отсутствие продукции ацетоина у изученных штаммов. Анализ четырех структурных генов als оперона, а также исследование экспрессии регуляторных генов alsR и аphA, контролирующих его биосинтез, выявил, что изменение продукции ацетоина у геновариантов является следствием делеции единичного нуклеотида (Т в позиции 315) в структурном гене alsD, кодирующем ацетолактат декарбоксилазу, а также высокого уровня экспрессии негативного регулятора биосинтеза ацетоина – гена aphA. Моделирование пространственной структуры белка AlsD геноварианта М1293 и референс-штамма N16961 показало, что белок AlsD геноварианта действительно сильно редуцирован. Однако в отсутствие ацетолактат декарбоксилазы возможно спонтанное декарбоксилирование, что фенотипически проявляется в наличии слабоположительной реакции Фогес-Проскауэра.
Цель данной работы – определение эпидемиологической значимости хантавирусов, циркулирующих на территории Крыма, на основе ретроспективных сведений и с учетом полученных результатов за период мониторинга с 2015 по 2018 год.
Материалы и методы. Исследование мелких млекопитающих и сывороток крови доноров проводилось методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Результаты и обсуждение. Проводимые в 1985–1989 гг. изучения геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) позволили предположить, что циркулирующие среди полевок рода Microtus хантавирусы не имеют этиологической значимости в структуре заболеваемости ГЛПС. Проведенные в 2008 г. исследования выявили циркуляцию хантавирусов серотипа Tula среди Microtus arvalis (obscurus). Исследования природной очаговости хантавирусной инфекции в Крыму в течение 2015–2018 гг. показали циркуляцию хантавирусов среди мелких млекопитающих (Microtus socialis, Mus musculus, Sylvaemus witherbyi, Crocidura suaveolens), которые не являются основными резервуарами патогенных хантавирусов. Также выявлены серопозитивные к хантавирусам доноры – 0,4 %. Местные случаи заражения ГЛПС за весь период наблюдения не зарегистрированы. Для подтверждения положительных находок и определения эпидемиологической значимости циркулирующих возбудителей, пробы с положительными находками на хантавирусы отправлены в 2017 г. в Референс-центр по ГЛПС. Результаты исследований Референс-центра не подтвердили наличие антител к патогенным для человека хантавирусам в сыворотках крови доноров; в биологическом материале от мышевидных грызунов антиген патогенных для человека серотипов хантавируса не выявлен. Таким образом, в природных очагах Крыма в 2015–2018 гг. зарегистрирована циркуляция хантавирусов, которые не относятся к патогенным для человека серотипам хантавируса Puumala, Hantaan, Dobrava. Обнаружение серопозитивных доноров, свидетельствует о контакте населения республики с непатогенными для человека хантавирусами.
Цель – риск-ориентированная оценка современной эпидемиологической обстановки по лихорадке Западного Нила в Астраханской области.
Материалы и методы. В работе использованы материалы ФКУЗ «Астраханская противочумная станция», Управления Роспотребнадзора по Астраханской области, Областной инфекционной клинической больницы им. А.М. Ничоги. Основным методом исследования явился эпидемиологический анализ заболеваемости населения области лихорадкой Западного Нила в течение 2000–2016 гг., проанализировано 145 историй болезни.
Результаты и обсуждение. В результате ретроспективного анализа определены и охарактеризованы основные категории эпидемиологического риска заболевания лихорадкой Западного Нила в Астраханской области в 2000–2016 гг. Установлено, что чаще болеют мужчины (95 из 145 – 65,5 %) в возрасте 19–70 лет (82,1 %). Среди женщин заболевания ЛЗН наиболее часто встречаются в этом же возрасте (75,8 %), среди детей – в возрастной группе до 6 лет (9,0 %). Анализ территории по риску заражения показал, что он высокий в одном районе, средний в одном районе, низкий в четырех районах и очень низкий в шести. При анализе условий заражения (факторов риска) ЛЗН населения области выяснено, что в подавляющем большинстве случаев (107 – 73,8 %) факторы риска не установлены. Из тех, которые удалось определить, следует выделить укус комара в доме, подвале, на рыбалке (16,3 %), а также укус, снятие с себя и раздавливание клеща незащищенными руками (6,9 %). Период наиболее высокого риска – с мая по октябрь с максимумом заболеваемости в августе (55,1 %).
Цель работы – анализ результатов мониторинга эпизоотической ситуации в монгольской части трансграничного Сайлюгемского природного очага чумы в 2018 г. для оптимизации профилактических и противоэпидемических мероприятий в приграничных районах Монголии и России.
Материалы и методы. Эпизоотологическое обследование проведено на площади 2668 км2 , исследовано на чуму 282 млекопитающих, 261 эктопаразит (из них 257 блох). Все лабораторные исследования полевого материала осуществлялись в мобильной лаборатории мониторинга и диагностики на базе автомобиля КАМАЗ. Весь полевой материал исследовали молекулярногенетическим (ПЦР) и серологическим методами. Свежие и мумифицированные остатки стола хищных птиц и трупы, добытые грызуны и зайцеобразные, блохи, снятые с трупов, подвергали экспресс-диагностике с использованием иммунохроматографического метода (ИХТ) для выявления капсульного антигена (FI) чумного микроба. Пробы, прореагировавшие положительно в ПЦР и ИХТ, исследовали бактериологическим методом. При проведении эпизоотологического обследования использованы ГИС-инструменты. Все полученные результаты наносились на электронные карты в программе QGIS 2.12.3.
Результаты и обсуждение. Выделено 47 штаммов Yersinia pestis ssp. pestis от серых сурков и снятых с этих животных блох. ДНК чумного микроба обнаружена в 60 объектах. Получено 60 положительных результатов серологического исследования. Зараженность возбудителем чумы добытых сурков равна 4,5 % (n=22), свежих трупов и остатков стола хищных птиц – 63,4 % (n=41), мумифицированных трупов и остатков стола хищников, костных останков – 10,0 % (n=140). Установлено, что на приграничной с Россией территории протекает интенсивная разлитая эпизоотия чумы, вызванная возбудителем основного подвида. Все эпизоотические проявления выявлены на высотах 2400–2800 м над ур. м. в поселениях серого сурка с высокой плотностью. Эпизоотия зарегистрирована на большей части южного макросклона хребта Сайлюгем на протяжении 100 км и по всему хребту Харланхуу уул на протяжении 30 км. Площадь эпизоотии, подтвержденной изоляцией возбудителя чумы, составила 1207 км2 (45,2 % от обследованной территории).
Целью работы явилось клонирование гена nanH Vibrio cholerae в составе плазмидного вектора, обеспечивающего экспрессию чужеродных генов под контролем т5-промотора, и создание штамма E. coli – продуцента рекомбинантной нейраминидазы.
Материалы и методы. Донором ДНК послужил штамм V. cholerae о1, векторной плазмидой – pQE30. Ген амплифицировали с помощью пцр, клонирование осуществляли общепринятыми методами, продуктивность рекомбинантов и локализацию искомого белка определяли по результатам электрофореза лизатов клеток. Нейраминидазную активность определяли по наличию флуоресценции в ультрафиолетовом свете после инкубации со специфическим субстратом (4-метилумбеллиферил-N-ацетилнейраминовой кислотой). результаты и обсуждение. Сконструирована рекомбинантная плазмида pNanH, содержащая ген nanH V. cholerae, встроенный по сайтам BamHI-PstI в полилинкер pQE30. Экспрессия клонированного гена в штамме-продуценте E. Сoli JM103pNanH происходит под контролем т5-промотора при индукции изопропил-β-D-тиогалактозидом (иптг). Штамм обладает нейраминидазной активностью. рекомбинантный белок NanH накапливается в клетках продуцента в двух формах. первая, с молекулярной массой (мм) 89,5 кда, представляет собой непроцессированный белок с гексагистидиновым блоком (6His-tag) на N-конце и находится в тельцах включения. Ее содержание составляет 5,6–6,6 % суммарных клеточных белков. вторая, с мм 83 кда, обнаруживается в периплазматическом пространстве клеток и соответствует зрелой NanH, содержание составляет 3,4–3,8 %. Их общее содержание – 9–10 % суммарных клеточных белков, что позволяет считать штамм E. coli JM103pNanH суперпродуцентом искомого фактора. Штамм может быть использован для получения NanH V. cholerae в целях создания специфических диагностических, терапевтических и фармацевтических препаратов, а также для изучения свойств этого белка как фактора патогенности/персистенции возбудителя.
Цель. Данная работа проводилась с целью выявления маркеров (антиген и РНК) вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) в пробах от клещей, собранных во всех ландшафтно-географических зонах Гвинеи (Нижней, Средней, Верхней и Лесной) для получения современных данных о распространении возбудителя на территории страны.
Материалы и методы. Всего исследовано 4273 экземпляра клещей восьми видов, собранных в 2016–2019 гг. на территории Гвинейской Республики, которые объединили в 1406 проб. Эктопаразитов снимали с сельскохозяйственных животных, собак и мелких млекопитающих. Вирусный антиген выявляли с использованием иммуноферментного анализа. Наличие РНК вируса ККГЛ определяли методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией.
Результаты и обсуждение. В результате проведенных исследований антиген вируса ККГЛ выявлен в 21 пробе, что составило 1,5 %, а РНК – в 37 (2,6 %). Все образцы, в которых выявили вирусный антиген, содержали и РНК вируса ККГЛ. Положительные пробы зарегистрированы во всех ландшафтно-географических районах страны. Установлено, что основными переносчиками и резервуарами возбудителя КГЛ в Гвинее являются клещи видов Rh. sanguineus, Rh. geigyi, Rh. annulatus и Am. variegatum. Полученные данные подтверждают возможность циркуляции возбудителя в этом регионе и определяют необходимость дальнейшего изучения распространения вируса ККГЛ на территории Гвинейской Республики.
Эпидемиологический прогноз является основой планирования профилактических мероприятий и способствует повышению их эффективности и экономии финансовых ресурсов. Несмотря на несомненную важность решения этих задач, до сих пор нет процедуры составления прогноза заболеваемости населения клещевым вирусным энцефалитом (КВЭ), утвержденной в Роспотребнадзоре.
Цель сообщения – описать алгоритм краткосрочного прогноза заболеваемости КВЭ, оценить соответствие этих данных фактической заболеваемости и результатам ежегодно проводимого в субъектах страны оперативного сезонного мониторинга.
Материалы и методы. Использованы материалы государственного статистического учета «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях» (форма № 2), а также данные оперативного мониторинга за 2007–2018 гг. Для выявления многолетней тенденции развития эпидемического процесса применен регрессионный анализ. При наличии тренда прогноз проводился на его основе. При отсутствии – путем расчета среднемноголетнего показателя. Во всех случаях учитывался 95 % доверительный интервал изменения заболеваемости. Сравнение фактической заболеваемости с ожидаемой и данными оперативного мониторинга проведено по критерию Стьюдента. Расчеты выполнены в программе Excel.
Результаты и обсуждение. Ожидаемые значения инцидентности КВЭ в субъектах Российской Федерации достоверно не отличаются от фактической заболеваемости, а также данных оперативного мониторинга. Недооценка эпидемиологического риска выявлена лишь в четырех субъектах из 49 (8,2 %), причем в трех из них различия составляют менее 16 %. Данные оперативного мониторинга субъектов РФ имеют значения, смещенные в сторону их занижения по отношению к фактической заболеваемости, что, вероятно, связано с учетом в «форме № 2» случаев КВЭ, подтвержденных и/или проявившихся по окончанию инкубационного периода после завершения установленных сроков еженедельных наблюдений. Таким образом, предлагаемый унифицированный подход к прогнозу заболеваемости населения КВЭ в субъектах России дает корректную информацию для оценки ожидаемых эпидемиологических рисков и своевременного планирования необходимых мер профилактики инфекции.
Цель – эпизоотолого-эпидемиологическое районирование территории Краснодарского края и Республики Адыгея по туляремии для определения уровня эпидемиологической опасности районов.
Материалы и методы. Использованы архивные данные Причерноморской противочумной станции за период 1946–2017 гг. и Противочумного центра Роспотребнадзора. При помощи ГИС-пакетов MapInfo Professional 10.5 и Arc GIS 10.2 сформированы базы данных, содержащие точечные слои мест заражения туляремией (49), выделения возбудителя туляремии (195) и ландшафтно-эпизоотологических районов на территории Краснодарского края и Республики Адыгея.
Результаты и обсуждение. Использование геоинформационных технологий позволило более детально рассмотреть проявления туляремии на разных участках. Показана перспективность использования Arc GIS и MapINFO для геокодирования, обработки и создания геоинформационной базы проявлений туляремии за многолетний период. Созданы векторные данные ландшафтов и мест проявлений эпидемий и эпизоотических проявлений туляремии на разных видах млекопитающих и клещей. Конвертация базы данных в Microsoft Excel позволила проводить статистическую обработку данных для целей эпидемиологического анализа. Проведенная работа по эпидрайонированию территории Краснодарского края и Республики Адыгея наглядно показали целесообразность использования ГИС-технологий для этих целей. Результаты анализа позволяют оптимизировать режим эпизоотологического обследования на различных участках Краснодарского края и Республики Адыгея. Показана целесообразность проведения эпизоотологического обследования и мониторинга территории с определением географических координат мест эпизоотических проявлений.
Цель работы – поиск локусов генома различных типов вируса ящура, характеризующихся наименьшей вариабельностью, для использования их в качестве генетических маркеров при ПЦР-индикации вируса.
Материалы и методы. В работе использовались ресурсы Национального центра биотехнологической информации и программные утилиты «BLAST» и «Vector NTI 9.1.0». Для ПЦР-амплификации применялась плазмидная ДНК с маркерной вставкой.
Результаты и обсуждение. Анализу подверглись нуклеотидные последовательности геномов вируса ящура типов А, Asia-1, С, О и SAT (1, 2 и 3). При выравнивании геномов изолятов каждого из типов вируса установлены потенциально консервативные участки. Сравнение этих локусов у различных типов вируса позволило выявить один максимально консервативный локус, последующий BLAST-анализ установил его высокую специфичность к геному вируса ящура, на этот локус выбрали праймеры и зонд. Кроме того, олигонуклеотидные затравки подобраны на три гена, входящих в геном крупного рогатого скота, наименее гомологичные специфичным олигонуклеотидам. Праймеры и зонд использованы в качестве внутреннего контроля амплификации. Для контроля хода амплификации разработан положительный контроль, имеющий нуклеотидную последовательность маркерной области генома вируса ящура. В геномах некоторых изолятов вируса обнаружен высокий уровень полиморфизма относительно ПЦР-зонда (у 12 изолятов по серотипам A, Asia-1, SAT1 и SAT2). Устранить влияние такой вариабельности на количество выявляемых изолятов вируса позволяют модификации ПЦР-зонда (Pas FMDV и Psat FMDV). Нуклеотидные последовательности праймеров, зондов и положительного контроля представлены в таблицах.
ISSN 2658-719X (Online)