ОБЗОРЫ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Широкое распространение новой коронавирусной инфекции COVID-19 в Российской Федерации определяет актуальность оценки конкретной территории по ее эпидемиологической значимости.
Цель исследования – выявление эпидемиологических особенностей и установление тенденций эпидемического процесса новой коронавирусной инфекции COVID-19 в Иркутской области и прогнозирование ее распространения.
Материалы и методы. Проведен оперативный анализ эпидемиологической ситуации по COVID-19 в Иркутской области по состоянию на 16.08.2020, обоснованы ограничительные мероприятия на основании расчета коэффициента распространения инфекции (Rt).
Результаты и обсуждение. Иркутская область по заболеваемости людей COVID-19 на 16.08.2020 продолжает оставаться одной из неблагополучных территорий в Сибирском федеральном округе и Российской Федерации. Определена постепенная динамика развития эпидемического процесса, которой на первом этапе эпидемии способствовали завозные случаи из неблагополучных стран и регионов Российской Федерации, а в последующем – местная передача. Подъем заболеваемости зафиксирован на два месяца позже по сравнению с центральными регионами РФ, в настоящее время наметилась устойчивая тенденция к снижению заболеваемости. Рост случаев инфицирования превалировал среди лиц, прибывающих на вахтовые и сезонные работы в административный центр и северные районы Иркутской области. Определен характер эпидемического процесса по гендерному, возрастному и социальному проявлениям. Показано, что риск заболеваемости новой коронавирусной инфекцией определяется интенсивностью контакта в семейных очагах, распространением в медицинских организациях и значительной долей бессимптомного носительства. Установлены высокие показатели летальности (0,7 %) и смертности (31,1 ⁰/₀₀₀₀) среди лиц старше 65 лет. Наблюдаемый с июня стационарный временной ряд изменения Rt-показателя с колебаниями от 0,92 до 1,01 требует сохранения контроля проводимых ограничительных мероприятий с оперативным принятием управленческих решений, исходя из складывающейся эпидемиологической ситуации в Иркутской области и с учетом оценки рисков ее возможного осложнения.
Цель. Выбор показателей популяций лимфоцитов макак-резусов, определенных методом проточной цитометрии, для оценки изменений клеточной составляющей их иммунного статуса.
Материалы и методы. Использовали кровь 11 здоровых самцов макак-резусов возрастом 2,0–2,5 года, массой 2,5–3,0 кг. Обезьян обследовали одновременно в каждый из 7 месяцев наблюдения (с мая по ноябрь). Иммунофенотипирование проводили на цитофлуориметре FC500 с использованием моноклональных антител Affymetrix eBioscience. Дифференцированы следующие показатели клеточной составляющей иммунного статуса: Т-лимфоциты общие (фенотип СD2+СD20-); В-лимфоциты общие (фенотип СD2-СD20+); натуральные киллеры (фенотип СD2+СD56+); T-хелперы (фенотип СD2+СD4+); цитотоксические Т-лимфоциты (фенотип СD2+СD8+); дубль-позитивные Т-лимфоциты (фенотип СD4+СD8+) и Т-лимфоциты, позитивные по антигенам СD2 и СD20 (фенотип СD2+СD20+).
Результаты и обсуждение. Статистический анализ полученных результатов выявил отсутствие влияния фактора времени исследования на указанные показатели. Для оценки изменений клеточной составляющей иммунного статуса макакрезусов возможно использовать показатели, отличающиеся меньшей вариабельностью: Т- и В-лимфоциты общие, T-хелперы, цитотоксические T-лимфоциты и Т-лимфоциты, имеющие фенотип (СD2+СD20+). Использование CD56 в качестве маркера натуральных киллеров макак-резусов нецелесообразно из-за его низкой экспрессии и малочисленности популяции, несущей данный маркер. Результаты исследований могут стать основой нормативных показателей субпопуляционного состава клеток иммунной системы макак-резусов, что позволит исследовать инфицированных животных при оценке качества лечебных препаратов в отношении опасных и особо опасных инфекций.
Цель работы – получение рекомбинантных вирусных антигенов основных иммунодоминантных белков: гликопротеина (GPΔMLD), нуклеопротеина (NP) и матриксного белка (VP40) вируса Марбург, а также исследование их антигенных и иммуногенных свойств.
Материалы и методы. Для создания рекомбинантных белков GPΔMLD, NP и VP40 вируса Марбург использовали синтезированные нуклеотидные последовательности, кодирующие эти белки, клонированные в составе экспрессионного вектора pЕТ21a. Иммуногенные и антигенные свойства полученных рекомбинантных белков проверяли с использованием ряда биомоделей (мыши, куры и морские свинки).
Результаты и обсуждение. Получены рекомбинантные плазмиды, содержащие гены, кодирующие белки GPΔMLD, NP, VP40 вируса Марбург, а также штаммы-продуценты Escherichia coli, с выходом очищенных препаратов рекомбинантных белков GPΔMLD, NP, VP40 с одного литра культуральной жидкости – 5, 10 и 10 мкг соответственно. Рекомбинантные белки GP, NP и VP40 MARV при иммунизации мышей вызывают синтез антител с высоким титром (рекомбинантные белки NP и VP40 – более 409600, а рекомбинантный белок GPΔMLD – 12800). Мышиные антитела, специфичные к рекомбинантным белкам, взаимодействуют в иммуноферментном анализе с антигеном инактивированного MARV. Антитела кур, иммунизированных вирусоподобными частицами, содержащими на поверхности поверхностный гликопротеин вируса Марбург, и антитела морских свинок, иммунизированных экспериментальной ДНК-вакциной, содержащей ген GPΔMLD MARV, узнают рекомбинантный белок GPΔMLD и вирусный белок в составе инактивированного MARV. Полученные рекомбинантные белки обладают иммуногенностью/антигенностью и могут использоваться для разработки иммуноферментных тест-систем.
Целью настоящего исследования являлась оценка эффективности использования микроволновой системы обеззараживания медицинских отходов «Стериус 60» (Россия) для деконтаминации объектов, инфицированных ПБА I–IV групп, образующихся в результате работы с инфицированными лабораторными животными. Материалы и методы. Проверку эффективности обеззараживания биологических отходов, образующихся в результате жизнедеятельности лабораторных животных, СВЧ-излучением проводили в микроволновой системе для обеззараживания медицинских отходов «Стериус 60», рекомендуемой производителем для обеззараживания эпидемиологически опасных и чрезвычайно эпидемиологически опасных медицинских отходов, в том числе биологических (классы Б и В), путем объемного СВЧ-нагрева. В качестве обеззараживаемых отходов вивария использовались тушки неинфицированных лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, кроликовсосунков), гранулированные корма и подстилочный материал (древесная стружка), являющиеся объектами, непосредственно контактирующими с биомоделями. В качестве модельных тест-микроорганизмов использовали: Bacillus subtilus ВКМ B-911, Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718, Bacillus licheniformis G ВКМ B-1711-Д, Alcaligenes faecalis 415, Yersinia pestis EV, Bacillus anthracis СТИ. Как макетный наполнитель камеры для модельных тест-микроорганизмов применялась лабораторная посуда (пластиковые чашки Петри, фарфоровые ступки и пестики).
Результаты и обсуждение. В результате исследования получены данные, указывающие, что микроволновая система обеззараживания медицинских отходов «Стериус 60» неэффективна для обеззараживания биологических отходов в лабораториях, проводящих работы с биомоделями, инфицированными ПБА I–II групп. Установленный стандартный режим обеззараживания данной системы в отношении микроорганизмов III–IV групп патогенности оказался эффективным только для неспоровых форм. Поэтому, на наш взгляд, целесообразно ее использование для деконтаминации лабораторной посуды, инфицированной ПБА III–IV групп, непосредственно в местах образования отходов.
Цель исследования – молекулярно-генетическая идентификация и анализ филогенетического родства штаммов Yersinia pestis, выделенных на плато Укок в 2020 г., для установления современных границ природного мегаочага чумы в Горном Алтае в России и Монголии.
Материалы и методы. Исследовано 37 штаммов Y. pestis основного подвида, выделенных в Тувинском горном и Горно-Алтайском высокогорном очагах чумы и смежных территориях Монголии в 1971–2020 гг. Полногеномное секвенирование штаммов выполняли с помощью Ion S5 XL System (Thermo Fischer Scientific). Для обработки данных и сборки последовательностей сырых ридов de novo использовали Ion Torrent Suite software package 5.12 и Newbler gsAssembler 2.6. Средний размер собранного генома составил 4,55 м.п.н. Коровые SNPs выявляли путем выравнивания контигов штаммов Y. pestis на геноме CO92 с помощью программы Snippy 4.6, затем удаляли 28 гомоплазий SNPs. Полученный набор SNPs содержал только коровую область генома (955 SNPs). Дендрограмму строили методом Maximum Likelihood с применением программы PhyML 3.1.
Результаты и обсуждение. Определена современная популяционная структура Y. pestis основного подвида античного биовара филогенетической линии 4.ANT, эндемичной для трех очагов Горного Алтая в России и Монголии. Выявлено наличие клона 4.ANT-21, получившего распространение на территории этих природных очагов чумы в начале XXI в. Показана принадлежность трех штаммов, выделенных на плато Укок в 2020 г., к клону 4.ANT-21. По данным филогенетического анализа получены доказательства циркуляции 4.ANT на плато Укок ранее 2018 г. Сделан вывод о необходимости обследования пограничных с плато Укок территорий Монголии, Казахстана и Китая для установления современных границ мегаочага 4.ANT.
Цель исследования – определить влияние Yersinia pestis EV НИИЭГ на процесс формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек in vivo при моделировании чумной инфекции и оценить их вклад в противочумную защиту.
Материалы и методы. В работе использовали мышей линии ВАLB/c, которых подкожно иммунизировали культурой вакцинного штамма Y. pestis EV НИИЭГ. Заражали животных вирулентным штаммом Y. pestis 231 в дозе 20 LD50 (103 КОЕ). Для оценки вклада нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ) в антибактериальную защиту применяли экспериментальную модель, основанную на расщеплении НВЛ в брюшной полости мышей нуклеазой. Для подсчета числа НВЛ в перитонеальном экссудате (ПЭ) использовали люминесцентную микроскопию. Фагоцитарную активность клеток ПЭ определяли с помощью проточной цитометрии. Бактериологическим методом регистрировали бактерицидный эффект НВЛ.
Результаты и выводы. У предварительно иммунизированных мышей процесс формирования НВЛ в ответ на повторное введение живых клеток чумного микроба был в 5 раз интенсивнее, чем у интактных животных и сопровождался существенным усилением киллинга клеток Y. pestis в ПЭ. Применение в эксперименте для расщепления образующихся в организме иммунизированных животных НВЛ микрококковой нуклеазы позволило получить доказательства участия НВЛ в обеспечении антиинфекционной защиты от чумной инфекции. Таким образом, установленный факт формирования НВЛ при заражении Y. pestis мышей, иммунизированных вакцинным штаммом Y. pestis EV НИИЭГ, и влияния этого процесса на эффективность защиты от чумы является основанием для дальнейшего уточнения иммунопатогенетической роли нейтрофильных гранулоцитов при чуме.
Цель исследования – определение современных эпидемиологических особенностей Крымской геморрагической лихорадки на юге Российской Федерации.
Материалы и методы. Карты эпидобследования очага инфекционного заболевания, ежегодные итоговые донесения (2010–2019 гг.), сведения об эпизоотологическом мониторинге, предоставленные управлениями Роспотребнадзора и ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Южного и Северо-Кавказского федеральных округов. Использовали описательные, генетические, аналитические методы и ретроспективный эпидемиологический анализ.
Результаты и обсуждение. Природный очаг Крымской геморрагической лихорадки на территории европейского юга России имеет площадь 815 тыс. км2 и характеризуется стойкостью, расширением территории, циркуляцией европейских генотипов вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки. Генетические варианты вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки образуют локальные, частично перекрывающиеся популяции. В 2010–2019 гг. зарегистрировано 997 случаев Крымской геморрагической лихорадки. Клинически преобладали среднетяжелые формы болезни (74,2 %). Геморрагические проявления были у 29,3 % больных. Летальный исход заболевания зарегистрирован у 31 больного (3 %). Отмечено 2 эпизода нозокомиального заражения, инфицировано 9 медицинских специалистов. Увеличение эпизоотически активной территории природного очага Крымской геморрагической лихорадки связано с расширением ареала клещей Hyalomma marginatum в северном направлении в связи с аридизацией территории степей, отчасти за счет глобального изменения климата. Отмечена стабильность популяции вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки. Эпидемическое ядро природного очага сохраняется на смежной территории Ростовской области, Ставропольского края и Республики Калмыкия. Более высокая эффективность мер профилактики Крымской геморрагической лихорадки на территории ядра обусловлена целенаправленностью и интенсивностью мероприятий, что способствовало раннему обращению больных за медицинской помощью, ранней госпитализации и повлияло на развитие клинических проявлений и исход болезни, а также позволило минимизировать число внутрибольничных заражений вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки, в том числе медицинского персонала.
В настоящее время геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) остается самым распространенным природно-очаговым заболеванием вирусной этиологии в Российской Федерации. До настоящего времени не разработаны эффективные противовирусные препараты и терапия ГЛПС в основном имеет патогенетический и симптоматический характер.
Целью исследования являлась оценка клинико-лабораторной эффективности габриглобина в лечении среднетяжелой формы ГЛПС.
Материалы и методы. В исследование включены 22 пациента с диагнозом «ГЛПС средней степени тяжести» в лихорадочной стадии заболевания. Пациентам основной группы (n=10) в лихорадочный период ГЛПС наряду с патогенетической терапией внутривенно вводился габриглобин в дозе 0,1 г/кг в сутки. Курс лечения составил 2–3 инфузии. Контрольная группа (n=12) получала только патогенетическую терапию.
Результаты и выводы. В результате исследований выявлена клинико-лабораторная эффективность внутривенного введения габриглобина в терапии пациентов с ГЛПС средней степени тяжести, что проявлялось сокращением длительности лихорадочного периода на 2,1 дня, выраженности олигурии и сокращением длительности тромбоцитопении на 3,5 дня по сравнению с группой пациентов, получавших патогенетическую терапию.
Цель – изучение возможности индукции куриных антител, нейтрализующих вирус Марбург (MARV), с использованием различных иммуногенов.
Материалы и методы. В качестве иммуногенов использовали рекомбинантный вирус осповакцины, экспрессирующий трансген поверхностного гликопротеина (GP) MARV штамма Musoke, и псевдовирусные частицы, экспонирующие GP трех штаммов MARV: Popp, Musoke и DRC2000, – на основе лентивируса и рекомбинантного штамма вируса везикулярного стоматита (VSV). В иммунизации участвовало две группы птиц. Кур иммунизировали девять раз: в первый раз вводили рекомбинантный вирус осповакцины, а затем 8 раз – псевдовирусные частицы (на основе лентивируса и рекомбинантного штамма вируса везикулярного стоматита). Первую группу иммунизировали очищенным и концентрированным иммуногеном, а вторую группу им же, но в комплексе с неполным адъювантом Фрейнда. Накопление специфических антител оценивали методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для анализа накопления нейтрализующих антител использовали рекомбинантный VSV, экспонирующий GP MARV, и натуральный MARV штамма Popp.
Результаты и обсуждение. Разработана эффективная схема иммунизации кур тремя рекомбинантными конструктами, презентирующими GP MARV, в результате которой происходит индукция куриных антител класса IgY против вируса Марбург с титром в ИФА от 1:100 до 1:1 млн. Полученные IgY нейтрализуют псевдовирусы MARV (штаммы Popp, DRC2000, Musoke) в разведении от 1/256 до 1/1024 и натуральный вирус MARV штамма Popp в разведении 1/8. Более стабильные результаты продемонстрировала схема иммунизации с использованием неполного адъюванта Фрейнда.
Цель исследования – сравнительное изучение этиологической структуры внебольничных пневмоний у SARSCoV-2 «+» и SARS-CoV-2 «-» больных, обратившихся за помощью в медицинские организации Ростовской области.
Материалы и методы. Исследовали биологический материал (мазки из носоглотки и мокроту) от 508 пациентов с диагнозом «внебольничная пневмония», находившихся на амбулаторном лечении или в стационарах г. Ростова-на-Дону. Верификация респираторных вирусов, включая РНК SARS-CoV-2, а также M. pneumoniae, C. pneumoniae, L. pneumophila выполнена методом полимеразной цепной реакции в мазках носоглотки (n=508). Бактериологический анализ мокроты проводили с использованием дифференциально-диагностических сред, идентификацию выделенных патогенов осуществляли с помощью времяпролетной масс-спектрометрии на приборе Autoflex (Bruker Daltonics, Германия) c программным обеспечением BioTyper 3,0.
Результаты и обсуждение. В период распространения новой коронавирусной инфекции в Ростовской области основным этиологическим агентом внебольничных пневмоний является новый коронавирус SARS-CoV-2. Особенностью внебольничных пневмоний (ВП) у пациентов с лабораторно подтвержденным COVID-19 является более высокая частота микстинфекций как вирусной, так и бактериальной этиологии. На фоне выявления у пациентов с ВП РНК SARS-CoV-2 зарегистрированы случаи обнаружения коронавирусов других типов (HKU-1, OC43, HL-63 или 229Е). Наиболее часто этиологическим агентом ВП бактериальной природы являлись бактерии рода Streptococcus как у пациентов с ВП, ассоциированной с COVID-19, так и у пациентов с отрицательным результатом на SARS-CoV-2. Коронавирусные больные представляют группу высокого риска по развитию микотических поражений легких.
Цель исследования – оценка состояния популяционного иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 среди жителей Саратова и Саратовской области в период эпидемии COVID-19.
Материалы и методы. В период с 23 июня по 26 июля 2020 г. проведено серологическое исследование образцов крови от 3372 добровольцев разных возрастных групп. Содержание антител к SARS-CoV-2 определяли методом ИФА с использованием набора реагентов «ИФА анти-SARS-CoV-2 IgG» производства ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора (Россия).
Результаты и обсуждение. В целом заболеваемость COVID-19 в Саратовской области протекает на фоне умеренной серопревалентности к вирусу SARS-CoV-2, сопровождается высокой частотой случаев инаппарантных форм течения инфекционного процесса. Отсутствие клинических симптомов заболевания в условиях ограниченного применения методов определения РНК вируса SARS-CoV-2 в ПЦР (11 % населения региона) затрудняет достоверность оценки реального распространения вируса в популяции и установления сроков формирования стойкого популяционного иммунитета. Низкий показатель антительного ответа среди лиц с позитивным результатом ПЦР-анализа, как и у добровольцев, перенесших инфекцию в мае–июне 2020 г., свидетельствует о слабом формировании иммунного ответа либо превалировании в популяции индивидуумов, реагирующих преимущественно активацией клеточного звена иммунной системы. Полученные результаты, хотя и нуждаются в объяснении по целому ряду позиций, могут применяться для организации профилактических мероприятий, включая вакцинацию, на территории региона.
В Российской Федерации к августу 2020 г. подтверждено более 850 тыс. случаев заболевания новой коронавирусной инфекцией (COVID-19), вызванной SARS-CoV-2. Ростовская область вошла в число десяти наиболее пораженных регионов России. Распространение болезни во многом определяется состоянием популяционного иммунитета на определенной территории.
Целью настоящего исследования являлись изучение специфического гуморального иммунного ответа и оценка уровня популяционного иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 среди населения Ростовской области.
Материалы и методы. В исследовании приняли участие 3048 человек. Волонтеры распределялись по семи возрастным группам. Содержание антител к SARS-CoV-2 определяли методом ИФА с использованием набора для анализа сыворотки или плазмы крови человека на наличие специфических IgG к нуклеокапсиду вируса SARS-CoV-2 производства Государственного научного центра прикладной микробиологии и биотехнологии (Оболенск) в соответствии с инструкцией по применению.
Результаты и обсуждение. Проведенная оценка серопревалентности к SARS-CoV-2 жителей Ростовской области показала, что доля лиц с положительными результатами теста на антитела IgG к новому коронавирусу составила 16,5 %, доля серопозитивных лиц в генеральной совокупности находится в пределах от 13,9 до 19,1 % (р<0,05). Достоверных гендерных различий в уровне серопревалентности не установлено, положительный результат зарегистрирован у 16,6 % обследованных женщин и 16,5 % мужчин. Установлен высокий уровень гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 на фоне низких показателей заболеваемости у лиц в возрасте от 1 года до 17 лет, что может свидетельствовать о доминировании бессимптомных форм болезни среди данной возрастной группы. Наибольший уровень серопозитивности выявлен среди дошкольников (33,6 %), учащихся (29,3 %), служащих (17,3 %), работников образования (15,3 %).
Цель исследования состояла в разработке унифицированного подхода к комплексной оценке риска осложнения ситуации по сибирской язве на основе ранжирования территорий по эпидемиологически значимым факторам.
Материалы и методы. Для комплексной оценки возможности осложнения ситуации использованы статистические принципы ранжирования оцениваемых показателей, в качестве которых рассматривались наличие и активность почвенных очагов сибирской язвы, преобладающие типы почв и их основные характеристики, а также социальные факторы риска, связанные с особенностями животноводства и возможностью инфицирования населения. Предложенная оценочная методика апробирована в масштабах страны, а ее содержание и результаты продемонстрированы в данной статье на примере Приволжского федерального округа. Материалами исследования послужили федеральные и региональные кадастры стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов, атлас и карты почв, данные статистического учета и отчетности Россельхознадзора, Росреестра и Роспотребнадзора.
Результаты и обсуждение. Установлено, что во всех субъектах округа присутствуют потенциальные риски осложнения ситуации, связанные с наличием почвенных очагов. По сумме рангов наибольшее потенциальное неблагополучие отмечается в ряде республик и областей Поволжья. Вместе с тем реальная опасность обусловлена преимущественно социальными факторами, к которым отнесены особенности животноводства, а также степень восприимчивости населения. Максимальные риски в настоящее время выявлены на территориях республик Башкортостан и Татарстан, а также в Саратовской области. Проведенное исследование направлено на повышение эффективности эпидемиологического надзора за сибирской язвой на территории Российской Федерации, а предложенная методология может использоваться на всех уровнях надзора.
Цель работы – разработка латекс-теста для выявления возбудителя мелиоидоза, где в качестве сенситина использовались моноклональные антитела, а также апробация лиофильно высушенного экспериментального препарата на бактериальных изолятах из объектов внешней среды, собранных на территории Социалистической Республики Вьетнам.
Материалы и методы. Носителями специфических антител являлись окрашенные полиакролеиновые латексные частицы с активными альдегидными группами на поверхности. Для контроля специфичности диагностикума использовали типичные штаммы возбудителей мелиоидоза и сапа с полноценной антигенной структурой, а также штаммы Burkholderia thailandensis, Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas putida. Реакцию латекс-агглютинации выполняли с бактериальными взвесями 1–2·109 м.к./мл на пластиковых чашках Петри. Результаты реакции оценивали визуально на темном фоне по 4-крестовой системе в течение 5–8 мин. Положительной считали реакцию на 3–4 креста. Подозрительные на принадлежность к патогенным буркхольдериям колонии из первичных посевов переносили на L-агар с полимиксином В и выращивали 36 часов при температуре (37±1) °С. Видовую принадлежность отобранных колоний определяли методом мультиплексной ПЦР с использованием набора реагентов «Амплиген Буркхольдерии группы «pseudomallei» βL B/D – EPh».
Результаты и обсуждение. С коллекционными штаммами экспериментальный препарат продемонстрировал высокую чувствительность, агглютинировав 97,7 % штаммов B. pseudomallei и все штаммы B. mallei, реакция с B. thailandensis, B. cepacia, P. aeruginos и P. putida была отрицательной. При скрининге бактериальных культур, изолированных из объектов внешней среды, чувствительность диагностикума составила 89,4 %. Таким образом, использование латекс-теста на этапе первичного скрининга большого количества образцов существенно сокращает время выделения чистых культур возбудителей мелиоидоза и сапа и их идентификацию.
Цель работы – усовершенствование технологии концентрирования микробных клеток в производстве вакцины чумной живой, таблетки для рассасывания.
Материалы и методы. Использовали вакцинный штамм Yersinia pestis ЕV линии НИИЭГ. Для глубинного выращивания нативной культуры чумного микроба применяли реактор БИОР-0,25 с автоматизированной системой управления. Концентрат микробной взвеси получали методом микрофильтрации с применением установок АСФ-009 и АСФ-020. Содержание живых микробных клеток определяли циторефрактометрическим методом. Оценку устойчивости Y. pestis штамма ЕV к технологическим факторам осуществляли методом фотометрической регистрации изменений оптической плотности суспензии бактерий в процессе литической реакции клеток на воздействие додецилсульфата натрия. Физико-химические и иммунобиологические свойства вакцины чумной живой, таблетки для рассасывания, определяли в соответствии с ФС.3.3.1.0021.15 Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV издания.
Результаты и обсуждение. Конструктивные особенности внедренного оборудования позволили осуществлять концентрирование микробной суспензии методом мембранной фильтрации, используя в качестве емкости промежуточного хранения реактор БИОР-0,25, что дало возможность исключить три технологические операции. Общая концентрация микробов в суспензии, полученной регламентным и усовершенствованным способами, составляла не менее 150 млрд м.к./мл. Различные гидродинамические режимы в рабочих полостях фильтрующих установок АСФ‑009 и АСФ-020 при концентрировании не повлияли на морфометрические свойства и устойчивость микробных культур к технологическим факторам. На основании экспериментальных данных составлен материальный баланс процесса мембранной фильтрации. Выявлено, что выход концентрата с 1 л нативной культуры по усовершенствованной технологии достигал 0,13 л, продолжительность процесса сократилась до 5 ч, а выход готового препарата за один производственный цикл увеличился в три раза. Таким образом, усовершенствована технология концентрирования микробных клеток Y. pestis при производстве таблетированной формы чумной живой вакцины.
ЮБИЛЕИ
ISSN 2658-719X (Online)